d****i
发帖数: 2346 | 1 今天用Attractene转染plasmid，先加plasmid到optim medium，然后加Attractene，然
后去vortex和spin down。发现管底部有白色沉淀。用手指弹了弹管子，白色沉淀慢慢
消失了。
plasmid浓度为1ug/uL. A260/280=1.9, A260/230=2.3. 溶解在10mM Tris-Cl里面，离
心无沉淀。
Attractene是2015年1月买的。单独加Attractene到optim里面离心无沉淀。
那么那个白色沉淀到底是什么？ |
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c*******u
发帖数: 12899 | 2 ☆─────────────────────────────────────☆
quen77 (quen77) 于 (Fri Sep 24 01:58:18 2010, 美东) 提到:
我家宝宝从6个月的时候换的similac，吃的头几罐没事，大概是第4罐的时候开始拉肚
子，当时我一直以为是着凉的，拉肚子有持续20几天，有吐过2－3次，拉肚子期间我有
按照儿医建议换成isomil，好像好点，换回去又拉得很厉害，那几罐估计是一起买的，
那批吃完就好了。
我现在回想起来，在孩子拉肚子那段时间，我泡奶的时候有发现奶瓶里有黑色沉淀，就
是那种黑色的小颗粒，那几罐持续都有，记得特别清楚，因为当时孩子拉肚子时，我怕
是水不行，每次都是现烧的水，然后溶解奶粉，特别烫，我就把奶瓶晃啊晃啊，无聊的
时候看了瓶底，确实那段时间有黑色沉淀，很小的颗粒状。
所以提醒各位美妈，泡完奶后静置一下，看看是否有黑色沉淀。
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banchui (banchui) 于 (Fri Sep 24 02:15:37 2010, 美东)... 阅读全帖 |
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K**********e
发帖数: 188 | 3 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
buffer，刚刚好） |
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 用desalting column试试呢？
或者你把已经有沉淀的样品离心一下，取上清再加点SDS再跑胶。如果你之前加的
loading buffer里的SDS已经把K离子都沉淀下来了的话，应该后来加的SDS就不会沉淀了吧。
不过我不知道你的蛋白是不是也跟SDS一起沉淀了，还是先除盐比较保险。 |
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m********2
发帖数: 317 | 5 p53免疫共沉淀以及其结构
老板让我免疫共沉淀p53，然后测其结构。我对这一个领域不了解，想问问大家。
第一，有没有好用的kit or protocol来免疫共沉淀p53。
第二，免疫共沉淀出来的p53能否用来测结构。
第三，解构需要的蛋白量是多少?
谢谢大家， |
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C*******e
发帖数: 420 | 6 在做一个polymer的侧基改性实验, 反应条件完全一样,在室温下往反应底物里缓慢的滴
加改性剂,但结果差别很大.
绝大部分时候反应进行很短时间系统就不稳定了,有大块的沉淀生成, 搅拌停止, 实验
进行不下去了. 这时候改性剂只加了很少一部分,不超过1/3.
很少的时候反应能比较缓慢进行,系统一直处于比较uniform的状态, 最后比较浑浊,但
整个反应过程没有显著的大块沉淀. 改性剂能完全加完, 反应比较彻底.
我想要的是没有显著沉淀的结果, 但很难达到, 基本上是可遇而不可求.怎么能控制沉
淀还是不沉淀呢? 请有经验的同学指教! |
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o***s
发帖数: 42149 | 7 倒出成豆腐花状的牛奶。受访者供图
消费者投诉牛奶变质，工作人员初步检测为“牛奶脂肪沉淀”
近日，家住广州番禺的邓女士在家用牛奶冲麦片时，发现打开的盒装牛奶竟然已变成豆腐花状的碎块。前晚，接到投诉之后，伊利公司派出工作人员到邓女士家进行取证，工作人员初步判断是“牛奶脂肪沉淀”，目前客服已收回邓女士买的3箱牛奶，并按原价进行赔偿。
邓女士告诉记者，一个月前，她在番禺一家大型超市买了3箱24盒装的伊利纯牛奶，“家里每天都用牛奶冲麦片做早餐，所以一次就买比较多。”牛奶买回家后，邓女士和家人打开一箱来做早餐。
“前几天一直没有出问题的，第一箱牛奶都喝剩下9盒了。”13日那天早上，邓女士如常拿出4盒牛奶冲麦片。据她回忆，当时打开第一盒牛奶是正常的，她冲好了麦片以后就给儿子先喝，然后打开第二盒，准备做给老公吃，“牛奶一倒出来，就发现不对劲，像豆腐花一样一块一块的。”
邓女士赶紧又打开了第三盒牛奶，但倒出来的也是这样的块状物，靠近一闻还有一股酸馊味。难道是过期变质了？邓女士起了疑心，不过检查纸盒的生产日期之后发现，这箱牛奶是今年4月份产的，远未过保质期。
百思不得其解的邓小姐只好打伊利的客服电话求证，... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 8 最近，“李玉刚出家”的消息炒的沸沸扬扬，2日下午，李玉刚本人发布微博否认了出家传闻，称自己只是偶尔禅修沉淀自已，这也证实了李玉刚皈依是真“出家”为假。
网友曝照片证实李玉刚正式出家
12月2日报道 最近，“李玉刚出家”的消息炒的沸沸扬扬，但比对前后经过可见，其中有很大的炒作嫌疑。网易娱乐发现，最近所有关于李玉刚出家的消息都是其工作团队放出来的。12月2日凌晨，有一篇“李玉刚皈依佛门12年 网友曝其正式出家”的稿子，这篇稿也成为2日的消息来源。2日下午，李玉刚本人发布微博否认了出家传闻，称自己只是偶尔禅修沉淀自已，这也证实了李玉刚皈依是真“出家”为假。
12月2日下午，李玉刚发布微博，否认出家，李玉刚称：“谢谢大家关心，我在台北出差，接下来要有很多的工作要做，偶尔的禅修只是为了沉淀自已，希望未来能够有更多更好的作品奉献给大家！感恩！ ”
与此同时，中国歌剧舞剧院也对此次“出家”谣传发出郑重声明：“作为中国歌剧舞剧院的一名演员，李玉刚热爱生活，忠于岗位，对工作充满激情。网络上流传的‘李玉刚剃度出家’一说纯属子虚乌有。” |
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t***a
发帖数: 2813 | 9 一瓶芝麻油快用完了，发现底部有颜色较深的沉淀。现在每次用的时候，都会有一点深
色沉淀状的油一起倒出来。不知道这个是不是该扔掉了？ |
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D********s
发帖数: 757 | 10 偶真是丢人丢到家了～
一直知道怀孕会有色素沉淀，
觉得没关系，大不了将来做做果酸换肤，应该恢复的了吧？
再说，偶身体各个方面都像偶妈，她一直也没什么斑斑点点的～～～
结果————————@￥@
六个月的时候，偶还在沾沾自喜，脸上没什么斑的时候～
偶很杯具得发现，偶的色素沉淀居然～～～居然～～～～
居然在脖子上～～～～～～～～～～～
太恶心了！！！！太气愤了！！！！！
现在天气越来越热，偶的豹纹脖子啊，遮也遮不住了～
哭死啊～～
新妈妈们，色素沉淀什么时候褪掉啊？用美白的药用护肤品成么？ |
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n*********m
发帖数: 11 | 11 宝宝9个半月了，嘴周围一直会有一些轻微的湿疹，但我们一直都用Baby Eczema Cream
不严重一定不会上激素药（从出生到现在应该用不到3次），想请问一下这里有这样类
似的色素沉淀的例子吗？有什么方法可以把这小豆粒大的色素沉淀慢慢消失掉？宝宝皮
肤很白，所以现在那豆粒大的色素沉淀有点明显，看着心里有点难过。 |
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q****7
发帖数: 284 | 12 我家宝宝从6个月的时候换的similac，吃的头几罐没事，大概是第4罐的时候开始拉肚
子，当时我一直以为是着凉的，拉肚子有持续20几天，有吐过2－3次，拉肚子期间我有
按照儿医建议换成isomil，好像好点，换回去又拉得很厉害，那几罐估计是一起买的，
那批吃完就好了。
我现在回想起来，在孩子拉肚子那段时间，我泡奶的时候有发现奶瓶里有黑色沉淀，就
是那种黑色的小颗粒，那几罐持续都有，记得特别清楚，因为当时孩子拉肚子时，我怕
是水不行，每次都是现烧的水，然后溶解奶粉，特别烫，我就把奶瓶晃啊晃啊，无聊的
时候看了瓶底，确实那段时间有黑色沉淀，很小的颗粒状。
所以提醒各位美妈，泡完奶后静置一下，看看是否有黑色沉淀。 |
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M*******e
发帖数: 1633 | 13 怀孕的时候就发现自己腋下色素沉淀，心想好在不穿无袖的就没关系。
今天偶然才发现，自己腿窝处也有两大片色素沉淀……不知道多久才能下去……在此之
前都不能穿裙子或者短裤了……555
有没有什么乳霜或者油油之类的能帮助色素沉淀快速消失呢？ |
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A******7
发帖数: 12 | 14 我这里貌似要用IE才能播放，Firefox不行。
http://a8.ent.tom.com/player/splay.php?songid=690655
作词：李霄云
作曲：李霄云
瞬间我才发觉
你给的时间之间，差了限制
从前，回到以前，象没人看见一切，忘了体现
你冷漠，转成身体的温度，心的温度
将被丢弃的角落
你给我的爱不在，离开，掩埋，还没反应过来，就化成了悲哀
她给的爱应该感慨，依赖，温柔在你胸怀，幸福却将我撕开
我给你的爱还在，不堪的未来，我正在沉淀下来
泪是停止妥协，勾勒出忽现画面，挣扎浮现
我沉默，害怕触碰的残酷，讽刺都哭
怎样才习惯的角度
*
你给我的爱不在，离开，掩埋，还没反应过来，就化成了悲哀
她给你的爱应该感慨，依赖，温柔在你胸怀，幸福却将我撕开
*
我给你的爱还在，不堪的未来，我正在沉淀下来
沉淀 下来 |
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c******r
发帖数: 3778 | 15 这个SDS钾会沉淀蛋白吗？不是就SDS沉淀嘛？能不能沉淀了离心取上清跑胶？ |
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j*******8
发帖数: 933 | 16 又上来问问题了。
事情是这样的： 昨天用干冰冷却的丙酮来沉淀蛋白， 当即就看见了白色絮状沉淀。
然后将试管转移至-20度过夜。 可是今天早上来看沉淀反而消失了！ 请问是什么原因
？ 怎么补救？ 谢谢！ |
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t****p
发帖数: 1504 | 17 上清有目的抗体，但是浓度相当低。如果沉淀不溶解的话，我怎么知道它是否含有我的
抗体成分呢？
我现在把它离心了，上清透析，沉淀在等答案。
如果沉淀不溶，我纯化的抗体相当少啊！
2M
BSA
运。 |
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f******s
发帖数: 440 | 18 遇到过和LZ一样的问题
4个抗体，2个没问题，2个有沉淀，完全一样的操作。
沉淀后的上清部分抗体量很低，可以估计大部分在沉淀。
透析之后情况没有好转。无奈，全部过滤掉了......
希望LZ找到更好方法。
1M |
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O******1
发帖数: 13088 | 19 即使扩散了，也应该在日本近海附近沉淀海底吧。那个10年之内扩散到整个太平洋的模
型没有考虑沉淀作用吧。生物携带迁徙先不考虑。
专家出来议一议。 |
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n**********r
发帖数: 4 | 20 原标题：习近平谈扶贫：脚下沾有多少泥土，心中就沉淀多少真情
党的十八大以来，习近平总书记站在全面建成小康社会、实现中华民族伟大复兴中
国梦的战略高度，把脱贫攻坚摆到治国理政突出位置，提出一系列新思想新观点，作出
一系列新决策新部署，推动中国减贫事业取得巨大成就，对世界减贫进程作出了重大贡
献。为帮助国内外读者学习研究习近平关于扶贫的重要论述和中国脱贫攻坚的伟大实践
，推动全面建成小康社会、共建人类命运共同体，中共中央党史和文献研究院会同国务
院扶贫办编辑了《习近平扶贫论述摘编》。
本书内容，摘自习近平二〇一二年十一月十五日至二〇一八年六月期间的讲话、报
告、演讲、指示、批示等六十多篇重要文献，分八个专题，共计二百四十二段论述。其
中许多论述是第一次公开发表。
今天更新本书第二篇，重点阐述“坚持党的领导，强化组织保证”。
各级党委和政府要高度重视扶贫开发工作，把扶贫开发列入重要议事日程，把帮助
困难群众特别是革命老区、贫困地区的困难群众脱贫致富列入重要议事日程，摆在更加
突出的位置，要有计划、有资金、有目标、有措施、有检查，切实把扶贫开发工作抓紧
抓实，不断抓出成效。
——《在河北省阜平... 阅读全帖 |
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o**4
发帖数: 35028 | 21 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: oct4 (hi), 信区: Biology
标 题: 紧急求助：怎么溶解蛋白质沉淀啊？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 25 10:46:31 2012, 美东)
我做Flag pull down，之后把elution冻在-20°过夜，今天早上解冻的时候发现蛋白质
沉淀，
我加了SDS （终浓度1%），煮了5分钟，还是没见到任何溶解，
请问该怎么溶解蛋白质啊？
用loading buffer煮一下能溶解么？
谢谢 |
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f******d
发帖数: 72 | 22 今天第一次给宝宝喂米糊糊，喂完后发现碗底有一些很细很细的黑沙状沉淀。看着很让
人担心。这正常
吗？
买的Gerber的rice cereal。开盒后第一次食用，应该出现这种黑色的沉淀吗？好害怕
呀，不知道明
天还该不该继续喂宝宝。 |
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h***a
发帖数: 1773 | 24 【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 如何使ons关系稳定沉淀 ，求助
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 23 19:24:42 2013, 美东)
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本人情况:男
【职业】：自由职业 【年龄】：24 【教育程度】：大学【年收入】：24万
【婚姻状态】：单身【体态】健美：身高: 181公分；体重: 190斤； 【容貌】：
用10分制来估计 应该是7.5吧
——————————————————————————————————————
对方情况:女
【职业】： 自由职业 【年龄】：31 【教育程度】：
大学【年收入】：30万 或更多【婚姻状态】：快要离了【体态】：小中等丰满 身高
——————————————————————————
【两地相距】：同城 有互相住处过夜的频率
【相识途径】：ons 有一点朋友交集
【亲密程度】：情侣干的都干了
【交往时间】：1... 阅读全帖 |
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q***8
发帖数: 95 | 25 因为夏天不用这个油，所以放在冰箱里，放的时候还没有沉淀，今天拿出来一看很多白
色的絮状沉淀，这是变质了吗？ |
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S*****4
发帖数: 514 | 26 也许没有人会知道，现在的我为什么会如此拼命，如此的精力旺盛 。从周一到周七，每天工作十二三个小时也乐此不疲。见缝插针的功夫还得学习还得充电还得玩耍，一样我都不想落下。
许久之前，我不曾这样活过。生性懒散的我喜欢安静喜欢安稳喜欢安逸；我漫不经心地过着自己清浅的日子、玩儿着自己喜欢的文字；我不争不拼没有贪欲；我顺其自然得过且过；我只想就这样在平淡的日子里安然地老去。可是，我从来也没有想过，一个相隔千里的陌生女子，却在相识之后彻底地颠覆了我现有的生活。
这个陌生的女子，想必大家都猜到了-------冰，是的，她是冰，从陌生到亲如姐妹。
还记得当初，她说来就来，不畏惧距离亦不畏惧陌生。她带着一些可爱和霸道；带着一点爽朗和幽默；带着一丝飞扬和自信，带着无所畏惧和冒险的精神，就像一道灼人的阳光，轻而易举就穿透了我平凡的生活。站在她的面前，我自是不能比，我胆怯、羞涩、木讷。也就是在那一瞬间，我迫切的想要成为她那样女子，可以坦荡又勇敢的面对所有。
后来的后来，越接触也越觉得她的人生充满了张力。她经历丰富、生命饱满，她能笑看人间繁花开尽，更不惧人生中的任何困难与痛... 阅读全帖 |
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v*****n
发帖数: 21 | 27 星座上说这周是我需要多沉淀心情的一周
本不相信什么星座，什么命运，何来沉淀，何来需要，脑子里面只剩下倒浆糊的，没
有了一点点的概念。
一个人的时候，脑海里面一直在追问自己一个问题，自己到底需要什么，到底在做什
么，到底要达到一个什么样的生活，什么样的地步，那才算是真正的满意，往往这个时候
是自己的心情最沉静的时候，也是最容易钻牛角尖的时候。一旦陷了进去，情绪也就降到
了低谷，如浓郁的蓝，充满着忧郁和伤感，外带一丝丝的宁静的配料。
最终还是被自己说服，在一场自我的较量之中，理智和情感，阴郁和乐观，思考和现
实，想和做争锋相对，一触即发。失落的情感失守了，悲观的情绪妥协了，阴郁的心情变
淡了，眼睛也就渐渐的离开了牛角尖的伤感，走进生活片片的青草地，还是那句话，我们
永远不知道将来那一秒所要发生的事情，为什么逼迫自己去想一些连神仙和上帝都望洋兴
叹的问题呢？这样的想只能是一种拖累，一种劳累，一种辛苦而已，苦了自己，苦了心情
，苦了你。
“我们总是在失去的时候才懂得去珍惜”天天广而告之的台词里面都是那么一句，不
知道这句话是哪位哲人总结出来的，很可能是一位普通人，更或者是一个和尚，普通人的
生 |
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l*******s
发帖数: 245 | 28 雨季总是那样漫长，长到让人忘记了时间。深深浅浅的雨痕斑驳了青石上那亘古不
变的纹路。悠长的窄巷，承载着清凉的记忆，凉了八月，散了清香。
风，轻轻翻开天空的一角，饶有兴致地品鉴这尘世的繁华画卷。浓墨重彩，镌刻了
多少繁花烟柳，甚或是一片云水禅心。禅意亦是可以重笔勾勒的，只要心中清净，哪怕
是泼墨，都不减其笑看浮华的风骨。
花未凉，人却散。记忆的断壁是那么陈旧，落寞了时光的遗憾。灯火依旧，指尖的
轻舞恍若繁世的诗篇，晕染出一抹婉约的风景。一阙月下独咏，是惊为天人的绚烂；一
曲花前拂弦，是彼时芳菲的盛开。静坐于如水的风韵里，独自编织着梦想的瑰丽，让它
们尽情绽放于墨香里，书写绝美的华章。
清浅的墨痕，掩不住眸中的欢欣，执一册诗页，去颂读文字的静好。时光一点一点
走过，墨香未散，茶却凉。铭记一方素纸的眷恋，用落尽幽香的淡然，绘出素雅如初的
执念。
浮生梦里，时光荏苒了过去。夏末的凤凰花凋零了一径的凉意，凄美得让人心疼。
拾落花，凝成一帘胭脂梦。梦里，幽香弥散的径里，墨色浸染了我的时光空隙，倏而，
散成了片片落花，在等我去默默拾起。
夜色，亦像墨色，只是缺了那大片的留白。望着如此多的浓墨，竟不知... 阅读全帖 |
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h****d
发帖数: 1305 | 29 前不久去看了在北京展览管举行的“建国50周年成就展”，
其中在四川展厅有偶们沉淀的YGA大屏幕投影彩电（一面
墙大小），很COOL，还有关于沉淀的介绍（不过把学校
的照片贴错了，经指正才改过来。。）怎么说也该算是
展厅里比较惹目的东东了。（当然，肯定少不了交大的
磁悬浮小车车咯），整个四川厅感觉效果不是很好（象
有的厅整体效果非常好，使用了很多手段来突出），但是
成飞的FC-1战斗机模型真的很漂亮拉！！ |
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i**i
发帖数: 1500 | 30 问题：
－－
什么样的系统可以最有效地将买买提讨论的成果沉淀。
系统不限，例如类似wiki, wordpress, quora, stackoverflow等等.
要求：
－－
有效地将买买提讨论的成果沉淀。
需要和买买提结合，在其现有用户群之上二次开发。
需要提供用户交互的方式和流程。
最终目的：
－－－－
提高买买提帖子的质量，让用户有收获，增加用户粘性。
这是一个测试贴。 要证明的就是这个葵版其实是娱乐版，版上的人就是一盘散沙，啥
也干不成。比学术版还差。
最后这个贴不了了之。 |
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c*******r
发帖数: 440 | 31 借宝地请教：
表达纯化了的MBP融合蛋白，用Factor Xa 酶切后出现沉淀，上清几乎无目标蛋白，目
标蛋白的PI=10 （将来用于结晶）。
通过改变酶切buffer 的 PH，或添加 DDT, glycerol, 盐浓度，还是酶切后还是出现
沉淀。
请分析原因和解决方法，多谢！！！ |
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c*******r
发帖数: 440 | 32 对，蛋白本身可溶性不太好，少量才是可溶的才考虑用MBP融合蛋白表达，但酶切后目
标蛋白几乎全部沉淀，有什么方法可以减少沉淀呢？ 将来还想做晶体研究呢， 急
多谢 |
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e****s
发帖数: 1125 | 33 不能在沉淀以前测浓度？
然后沉淀，用SB溶解。 |
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n******e
发帖数: 110 | 34 沉淀的不一定全是你要的抗体。测一下剩下溶液里抗体滴度先。要是还是很高的话，就
直接透析溶液，沉淀以后再说。不过我推荐用脱盐柱来换buffer，又快又好。
1M |
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l*****r
发帖数: 131 | 35 楼上说得对，关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体，不妨试试2M
Arginin pH4.3，我试过洗脱效果比pH2.5要差点，但还行。另外还有个idea，如果BSA
在Glycine里不沉淀的话，加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗？祝好运。 |
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n******e
发帖数: 110 | 36 沉淀PBS洗后不知道能不能用DMSF溶解？有时候有机溶剂可能会有好的溶解效果，然后
稀释在其他溶液里。要注意的是，含DMSF的溶液不能透析，要用脱盐柱才行。
还有用来中和洗脱液的1M tris 不用很多。我见过的protocol一般建议1ml洗脱液加
100ulTris。这个实在太多了。我试过30ulTris仍然可以中和1ml洗脱液的。我想Tris太
多可能也是引起沉淀的一个原因。
建议而已，没有严格验证过。 |
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n******e
发帖数: 110 | 37
的抗体成分呢？
可以试试沉淀直接电泳。有时候沉淀会溶解在上样buffer里。 |
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c**********6
发帖数: 1173 | 38 最近在做一些很简单的PCR。就是来amplify一些大概200mer的DNA library。
发现做完PCR以后总是会在管子里面发现好一些白色的沉淀。感觉这个很像是蛋白质，
但是我的template是合成的DNA，不存在蛋白质。难道这些沉淀是polymerase或者
buffer里面的BSA什么的（如果有BSA的话）
用的是Stratagene的Herculase.大家有类似的经验么？
谢谢 |
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k****o
发帖数: 589 | 39 最近几天用Pierce的Seize X Protein A kit做IP，要沉淀的是一个膜受体。用的抗体
（兔IgG）应该没有问题，因为做WB和flow cytometry都成功。使用了DSS让抗体和
Protein A交联。用了300～400 ug total protein沉淀，4度翻转过夜。之后清洗用的
是自己照着kit说明配的PBS,用kit自带酸性elution buffer洗脱，收集了3个组分。可
是之后用SDS-PAGE+WB检测，受体的带完全没有。我知道这个受体肯定是表达的。请问
可能原因有哪些？
另外Seize X的kit刚好用完，有没有什么其他的kit便宜质量又不错的？曾经考虑过
dynabeads，但是貌似还得另买一台磁力沉淀器？
多谢！ |
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e**r
发帖数: 1144 | 40 有些质粒小提的试剂盒
中和后形成的沉淀是一团，很容易离心下来，上清里几乎没有渣滓
而自己配溶液总或者某些其他试剂盒，中和后会有一些渣滓漂在上清里
什么东西能起到这种帮助沉淀的效果？ |
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l*****5
发帖数: 197 | 41 大家好，现在遇到一个问题不知道怎么解决，希望在此得到帮助，不甚感激！
我用recombinent protein 做一个in vitro assay，最终希望得到一个比较纯，浓度比
较高的dimer，所以一个是His tag，另外一个是GST tag，计划用两次纯化得到最终产
物，其间涉及到另外三种enzyme,实验室以前别人做的，都是His tag。
按理说，整个反应的过程没有多大难度，有一些文章也有receipe，但因为我需要的是
最终的产物，然后再接着往下做别的，所以希望能做的多一些，也需要浓度大一些。但
我已经试了3、4次了，基本上每次做都会缓慢的出现絮状的沉淀，就好像蛋白变性的那
种感觉，会不会是我用的反应浓度比paper上的浓？但我需要的量比较大啊。。。lab以
前的师兄做过，效果还可以，我的浓度是他的5倍，而且总体的量也多很多，他以前做
的量都比较少，也不需要纯化之类的，师兄毕业走人了，而且他一直就用比较稀的浓度。
还有，我试着将离心后的上清过Thermo Pierce的glutathione agarose beads,可以看
到蛋白有吸附（有YFP tag），但我最后... 阅读全帖 |
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J*****n
发帖数: 1041 | 42 用TCA沉淀蛋白，溶解蛋白的溶液中有大概1%的去垢剂NP-40，所以在加入Na-
deoxycholate （DOC）就有很多沉淀出来，不知道会不会对蛋白得率有影响？
many thanks in advance!
这个是protocol
1. to one volume protein, add 1/100 volume of 2% DOC, keep on ice for 15 min
2. add 1/10 volume 100% TCA and keep on ice for 1 hr
3. centrifuge at 10,000 g for 10 min at 4C
4. wash the pellet in acetone to get rid of residual TCA
5. resolubilise the pellet in appropriate buffer, and add Laemmli sample
treatment buffer to protein solution
6. SDS-PAGE |
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e***y
发帖数: 358 | 43 要纯化Maxi plasmid DNA，但是没有高速离心机。异丙醇沉淀这步有近30ml，一般台式
离心机容量太小，swing的离心机速度不够。还有什么办法把DNA沉淀出来？好像可以用
膜来滤，那种膜可以？Qiagen有不需要离心机的kit，但各种原因暂不考虑。 |
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b**s
发帖数: 589 | 44 现在才反应过来diethyl ether 就是乙醚
我认为沉淀剂的选择应该有以下的特点
1。必须是不良溶剂(不用说)
2。必须便宜(用量较多)
3。必须容易挥发(一般要放到红外灯下烘干)
要沉淀充份
1。不良溶剂量要足
2。沉淀时间要足够(要能把小分子的部分也沉下来，以使样品保持原样)
3。你的样品分子量要觉高一点 |
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l****t
发帖数: 36289 | 45 问题是你在美国的时候有过你家现在这样的低温的时候么？
网上说放冰箱（低温）以后出现絮状沉淀是正常现象，拿出来过段时间会恢复清透
但是不是低温情况出现的沉淀不正常 |
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c***s
发帖数: 70028 | 46 果冻状异物
8月5日下午，莆田市民唐先生致电本网新闻热线0594-2535366反映，称其3日在莆田涵江易太便利店新涵店购买的一瓶农夫山泉矿泉水，内有白色果冻状异物。由于瓶盖已经开启，农夫山泉客服人员对此回应，或人为作假。
5日下午4时许，记者来到了莆田涵江新涵街，看到唐先生手持的一瓶净含量1.5L的农夫山泉矿泉水内有白色果冻状异物，该瓶矿泉水生产日期为2014年7月8日。
据唐先生介绍，8月3日，他在易太便利店新涵店购买了几瓶1.5L的农夫山泉，8月5日下午2点左右饮用其中一瓶时，突然感觉嘴里有异物，连忙吐出后观察手中的农夫山泉发现，瓶内有白色果冻状异物，“但是我看了其他几瓶农夫山泉都没有发现异物。”
随后，记者来到当天唐先生购买农夫山泉的易太便利店。该店店长对此感到惊讶，“乍一看还以为是椰果。”该店店长拍照后表示，可以给唐先生退货，并将联系厂家检查同批次的货品，如存在类似情况将全部下架并撤回厂家。
记者以“农夫山泉 白色异物”为关键词，在网上搜索后发现，有许多网友都表示遇到此类情况。部分网友称曾得到农夫山泉回应“白色沉淀物为矿物质在冷藏后沉淀，并不影响食用”。但大部分网友对此说法持... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 47 黄轩和杨幂主演的《翻译官》正在播出，它同时收获的，是猛烈的吐槽和猛烈的收视率，观众一边骂它，一边让它的首播破了2，原因或许是，它对梦想的描述格外激动人心，对程家阳和乔菲的虐恋节奏掌控得恰到好处。它有这样的收获，不算意外，和观众一直以来的观看口味，比较一致。
算起来，这也是在半年不到的时间里，我们看到的第四部由黄轩主演的大戏了，去年年底的《芈月传》，今年年初的《猎人》和《女医·明妃传》，以及现在的《翻译官》，都是高投入、高收视的作品，接下来还将有《海上牧云记》和张艺谋电影《长城》。对黄轩来说，这是一个大年。这些艺术性和商业性俱佳的作品，彻底改变了黄轩给人们留下的文艺小生的印象，让他成为商业性很强的明星。
而我，是在黄轩的文艺小生时代，开始喜欢他的。《春风沉醉的夜晚》里，秦昊和陈思成太抢眼，但他的出现却也同样触目。后来他演了《成都我爱你》，这部电影上映时，我没机会看到它，但没想到，后来在KTV里和这部电影遭遇——电影中的画面，被剪成了谭维维《往日时光》的MV，这首歌和歌背后的画面，让我极为好奇，于是专门找了电影来补课。然后是《蓝色骨头》和《黄金时代》以及《推拿》，所有这些电影里，他都有上乘... 阅读全帖 |
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C***U
发帖数: 6529 | 48 小时候大家肯定都填过成语反义词吧。可以这么说，基本上，每个形容现象、性格、行
为的成语都有一个意思相反或对立的成语存在。但其实，它们是站在不同角度上对同一
种现象、性格、行为的表述。
于是中国人生来就充满了矛盾，同一件事，可对可错，可褒可贬，缺乏标准。
这都是历史的沉淀，很智慧，同时也是一种负担。 |
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p********7
发帖数: 18007 | 49 http://www.jiaoyou8.com/friends_info?action=user_info&login_id=
请人在中国的各位优秀的男士勿联，无关您的条件，
只是我个人的选择问题，您再让我心动，我也只能是心动一下而已了，恕不能一一
做解；请打算海归回中国创业的男士勿联，小女子只想选择一个安静的国度和一个
踏实的男人过一种朴实的生活。2.国外的土壤或许没有国内如此丰富，但很厚重，
能够沉淀，让人有回归本真的力量。那种守着一份爱情过好自己小日子，那份简单
而真实的自由和快乐，是我最终明白自己一直所向往的，我愿意放弃国内的一切，
把家安在国外也出于这方面考虑，望各位海涵。 |
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