t*******g
发帖数: 8 | 1 1. pYES2和配套的菌株，有个实验想在yeast里试一下，哪位能共享一下？非常感谢！
2.clontech的pDsRed2-Nuc Vector或pEYFP-Nuc
我在South Florida。
多谢！
站内或j*******[email protected] |
|
t*****z
发帖数: 1598 | 2 PS: 我的质粒抽提之前是保存在top10菌株里的，而以前用的都是DH5a，该不会是这个
问题吧？ |
|
S******e
发帖数: 393 | 3 难道是因为换了菌株？
DH5a更好些？
也是一个可能的原因(不确定)。 |
|
t*****z
发帖数: 1598 | 4 是的，特别是对于冷冻的菌株，先划板，然后小体积，然后大体积。 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 5 这个问题在本版应该就讨论过不下三遍了，好消息是你绝不是第一个遇到类似问题的人
，坏消息是可能没有特别的解决办法。
我记得之前有一例是，换过菌株，换过培养条件（培养基温度时间什么的），换过抽提
方法，但是maxi就是不正常，最后只好大量小提然后再合并。
你可以试着换一换各种条件，或者试试看midi，也许有用也许没用，试过才知道。好运！
plasmid
, |
|
i*****g
发帖数: 11893 | 6 这确实很头痛
我知道有时会有楼主说的这个麻烦，也说不清楚原因或者准确说，不值得划6个月去玩
这个
有时是maxi有这个麻烦，但楼主是mini，很麻烦了
楼主只好多换些菌株，mini culture不要摇过头了 |
|
l****3
发帖数: 399 | 7 其实这个研究是属于天然产物药物化学的研究，和这里大多数人做的生物不是一个领域
。化学版好像没太多人讨论，生物版帖子倒不少。
现在的传统的天产或者说生药，分离纯化的技术上没什么难的；分析化学的技术又发展
很快，高分辨的NMR,MS,HPLC-NMR可以鉴定极小量的化合物。这个领域黄金时期早就过
了，基本上快要死掉了。成功取决于两个因素，一是有资源，可以拿到别人没有的菌株
或者动植物，来自深海，戈壁，极端环境等等；二就是运气。当然相同的资源，干得越
多，得到好化合物的几率越大。 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 8 谁要是能搞出个工程菌株通过发酵产紫杉醇，估计可以捐个小型研究所出来了 |
|
|
l****3
发帖数: 399 | 10 倒个有抗生素的板子，一划不就知道了吗
或者梯度的液体培养，看看多高浓度有抑制 |
|
|
A********2
发帖数: 107 | 12 抗生素抗药的问题远比大家想得要严重的多，尤其是在中国和印度，印度是猜测没去过
，但是国内的情况显而易见，只不过这些抗药菌株都在医院里，感染的人主要是免疫力
低或者被破坏的，比如老人和癌症病人，如果有一天这些高致病性高抗性的细菌感染正
常人群了，这个问题就严重了，这就不是什么一个国家的问题，体制的问题了，是全人
类的问题。 |
|
A********2
发帖数: 107 | 13 显而易见是因为我从小就打针打抗生素，当时还只是青霉素也就是penicillin，但是后
来dosage越来越大，肌肉注射也没有了都是挂吊瓶，再后来是青霉素也不用了，用头孢
用贵的，并不是青霉素就没有用了，而是因为头孢更贵，这些都是广谱的抗生素，也就
大大增加了抗药产生的几率，因为所有的细菌都在被选择都在进化，抗性的基因在细菌
之间可以通过很多途径互相传播。看看现在中国的医院里，每天有多少人在挂吊瓶，如
果感冒了去医院，基本上是这个结果，导致这种现象的原因很多，比如医院的利益，医
生以及患者尤其是患者对抗生素抗药认识的匮乏，社会的压力，医疗体制的改革，这些
东西我们改变不了，但是中国抗生素被滥用是显而易见的，要说的话例子太多太多，比
如那些制造抗生素的药厂把残渣倾倒到河水土壤中会对环境中的微生物产生巨大的选择
压力，比如养殖中滥用抗生素喂牛对反刍动物的microbiome产生选择，比如在家里自己
吃药大部分的药物随尿液拍到下水道中对里面的微生物产生压力，等等等等，在我们的
食物安全都不能够保障的时候，还有多少人能去关系是不是细菌会抗药呢。
在解释解释如果，其实已经不是如果了，最近的超级细... 阅读全帖 |
|
y******8
发帖数: 1764 | 14 大段的promoter相同序列，克隆，表达都会有重组，silencing问题。如果有特殊菌株或者细胞系，可以
一试。
如果用很短的序列，如TetO，问题不是很大。可以同时驱动基因很多表达。 |
|
X*******0
发帖数: 134 | 15 决定能否用Lmbda噬菌体转染的因素是什么?
我要筛文库,但是普通常用的E.coli本身带这个基因所以没法筛,需要把文库弄到一个营
养缺陷型的E.coli株里.
缺陷型株是E.coli BW16787 genotype:
F-, Δ(argF-lac)169, ΔphoA532, λ-, rpoS396(Am), rph-1, Δ(phnP-phnH)523(
Tn5-1/132), hsdR514, creC510, Mu+
这样的菌能用Lambda噬菌体包装的大容量载体去transfect吗? |
|
m******g
发帖数: 3924 | 16 国内一个好朋友，需要一种食品用的菌株，想让我在美国买然后邮寄回去，请问大家有
过这样的经历吗？需要注意什么？还担心海关出关问题，以及美国法律问题。 谢谢。 |
|
D*a
发帖数: 6830 | 17 你要是从去年圣诞一直看过来就明白了
楼主批判他老板的爱将拿一个菌株的data到处吹嘘，我反正是没看出来楼主为了他老板
的虐待写了八百个主帖批判科学研究整体的行为有啥不同。 |
|
n******t
发帖数: 1281 | 18 FYI:
http://www.bacillusbbs.com/
Bacillus subtilis strain with inducible super-competence.
Zhang, X. Z. and Y. H. Zhang. 2011. Simple, fast and high-efficiency
transformation system for directed evolution of cellulase in Bacillus
subtilis. Microb. Biotechnol. 4:98-105. PMID: 21255377 read online
枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。
2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养
过夜。
3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。
4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养9... 阅读全帖 |
|
|
h****6
发帖数: 229 | 20 I have one in my freezer. However, i don't know if it is still alive. What
is your purpose? |
|
d*p
发帖数: 534 | 21 I may need to do large scale cloning, which needs a huge amount of Taq. So I
would like to purify the Taq by myself.
I'll greatly appreciate if you could mail me one. I may email you a Fedex
account.
Many thanks. |
|
s********n
发帖数: 2939 | 22 Go to buy, it is really cheap! Fermentas. |
|
S********i
发帖数: 34 | 23 买去吧，你如果需要的量很大的话，站内短我，我告诉你一个公司非常便宜。应该比你
自己纯化便宜多了。
I |
|
|
I***a
发帖数: 13467 | 25 LOL
streptomyces的模式菌株，遗传难做？？
extremely
important
a |
|
I***a
发帖数: 13467 | 26 那些难做又有人想做的菌株，
我觉得已经不是在细菌学范畴了，应该是药物／天然产物方面了，
但是即便如此，能发现新的产物也难了，黄金时期早过了，即使还有海洋啥的很多未知的 |
|
h**********r
发帖数: 671 | 27 你可以去E. coli Genetic Stock Center request一套做e. coli gene deletion的
lamda red菌株加质粒(7个左右吧) |
|
e****s
发帖数: 1125 | 28 那你用ＢＬ２１ ＤＥ３干啥。
你在３７度下Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ里看见，低温下看不见，也不是什么超级
诡异的问题。特别如果你是依靠铐染来鉴定蛋白的话。３７度表达快，蛋白都在ｉｎｃ
ｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ里面，低温下，一方面细菌少，表达慢，且可能部分成为可溶
蛋白，同样体积下，Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ里的量会少很多。
所以，前面问你是怎么检测蛋白的。
不知道你用什么高级载体？不需要ＩＰＴＧ诱导，又为何用ＤＥ３菌株呢？ |
|
l********g
发帖数: 19 | 29 有谁知道她的这个菌株是不是必需依赖砷？培养基里没有砷就不繁殖吗？ |
|
n********y
发帖数: 187 | 30 维生素C与两步发酵法 (2009-03-07 09:28:54)转载▼
标签： 保健 饮食 维生素c 维c 古龙 中国 健康
1986年，来自媒体的一则消息引起了国内外的广泛关注：由中科院微生物所和北京制药
厂联合研究发明的用于维生素C生产的二步发酵法新技术，以550万美元的价格转让给瑞
士的罗氏公司。这一技术的出口交易额不仅创造了当年中国最大技术出口交易额的纪录
，即使到今天在中科院系统也无出其右者。
“二步发酵法”是中国第一个拥有自主知识产权的工艺技术。如今从国家正式颁布发明
的1980年算起已25年过去了，国内有关制药厂仍然都使用二步发酵法这种新工艺进行维
生素C生产，一直在创造着巨大的经济效益和社会效益。
研发历史
上世纪60年代末，北京制药厂有关技术人员向中科院微生物所求援，就维生素C在生产
过程中产生的噬菌体问题，提出希望微生物所能够帮助改革维生素C生产老工艺的迫切
要求。
传统生产维生素C的方法是1933年德国人发明的的“莱氏化学法”，它需要经过五道工
序（一步发酵、酮化、氧化、转化和精制），连续操作有困难，生产中不仅伴有大量有
毒气体和“三废”的产出，而且对生产环... 阅读全帖 |
|
s******s
发帖数: 13035 | 31 PCR胶回收的？用的e.coli啥菌株？转化以后测了多少colony? 大的小的都挑了么？
的1 |
|
s******r
发帖数: 2876 | 32 最多一个礼拜，你跟别人要来菌株也差不多时间。
that takes time... |
|
g***y
发帖数: 201 | 33 不是很明白为什么要在bacteria里面删除neo, 难道不用在ES cell里做selection么？
SW105 has an arabinose-inducible flpe gene ,做bac recombineering 的 lab不是
通常都有sw102,105,106系列菌株么？
位置 |
|
b*********8
发帖数: 44 | 34 非常感谢centuribob的详细解答！
我用的菌株是GV3101， 有的加了P19， 有的没有加， 并且在24， 48h 不同时间点取
的样，结果都没有信号。 我的蛋白也属于 NB-LRR ， 在48h 就能看到轻微的细胞死亡
表型，72-96h后更明显，所以应该是蛋白表达没有问题。
另外，我的蛋白根据预测应该是细胞质和细胞核都有的，不是很肯定，所以想用GFP看
定位，但没有信号，也没有细胞死亡的表型。不知道是不是由于蛋白太大的缘故。
请问centuribob能否把你的带HA的载体借我做对照？因为如果我自己做一个，我不确定
会不会work. 非常感谢！ |
|
l*******6
发帖数: 128 | 35 赞非常好的建议！我试着申请过一些生物燃料的公司利用遗传工程改造菌株的职位，感
觉自己的背景比较MATCH， 但到目前为止没有一点机会。也许我应该多看看试剂诊断研
发的工作，请问你知道什么网站这方面的信息比较多吗？ 谢谢！
------------------- |
|
i**n
发帖数: 283 | 36 有商用前景不？我觉得还是有点用的。 想想早上9点来，做转化。 下班的时候就可以
做 colony PCR, 或者上液体培养基过夜培养，第二天早上就可以 mini-prep. 用这个
菌株，悲催的生物研究生也能早几天毕业。 |
|
d******1
发帖数: 709 | 37 10几年前就试过类似的菌株，而且克隆，表达一起用。 |
|
i**n
发帖数: 283 | 38 在俩个不同的菌株上重复出来同样的结果。 应该和一小段 DNA 有关。 具体的机制不
清楚。 但是有很好的线索。 研究起来不是很难。
我不是搞细菌的，就是这个比较好玩。 想问问大家的意见。 值得用业余时间追下去不？ |
|
i**n
发帖数: 283 | 39 我是拿出来比较一下菌落大小的。 你要看8小时的话，这个是8小时的。板子涂的不好
，但是结果应该很清楚。 top 10 8小时在左边，这个突变体在右边。 这个菌株，8小
时的菌落大小和top 10 14 小时的差不多。 |
|
j***y
发帖数: 1640 | 40 俺好不容易从比别人那里讨来了一个vector, 一看是滴在 一个小圆形的 filter
paper 上的， 俺是新手误以为该质粒是在Ecoli 菌内， 就把它放到 5ml LB 管内一小
时后， 取50 uL 上清 涂平板， 过夜什么都没有涨出来。 俺才意识到，别人寄过来的
是质粒， 不是菌株。
俺把这小块滤纸融在5mL LB 里面了， 这个还有补救的办法么？ |
|
j***y
发帖数: 1640 | 41 是的
俺后来用 stratagene mutagenesis kit 带来的 XL1-blue heat shock 转化什么都没
有涨，再改用用电转化 就有蓝色菌株在 X-gal板涨出来 (vector 是带 Lacz alpha的） |
|
|
|
|
m*****j
发帖数: 144 | 45 我2014年就毕业了，以前我就对这个 分子诊断领域 很感兴趣，其实自己在实验室也经
常得用一些“诊断”方法来鉴定菌株，基因，蛋白啥的（当然这个技术很简单，但是原
理应该和医疗分子诊断差不多）。我经常看这个博主的博客，觉得非常的好，贴出来跟
大家分享。http://bbs.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=290052
通过看他的博客，我发现这个 医疗分子诊断 貌似很新的领域，推广起来貌似很难。那
我就想，以我的能力入了这行，能干的好吗？而且，要是想将来回国，这个领域在国内
应该刚刚起步（还是没有引入，根本没基础？）那我回国了，岂不是没有地方找工作了
？有人要说，你可以自己开这个公司啊，可是这个技术肯定不便宜，国内的人应该消费
不起，市场没有，怎么能盈利啊？而且这个诊断，肯定可靠性要求很高，不去权威医院
，自己整个公司，患者也不信你啊。不过，倒是可以跟政府合作，是吧，算是非盈利机
构？
请大家原谅我，在这里瞎想，我这也是锻炼下思维，理清下思路。如果哪位前辈能帮我
指导下，那就太感谢了。
刚联系了个暑假的volunteer，可以去一个molecula... 阅读全帖 |
|
L*****t
发帖数: 56 | 46 你把pLXSH空载体转DB3.1之类耐ccdB的菌株，Amp+CM平板划线挑几个克隆做Miniprep再
试试看。
我以前听人提过慢病毒系列的Gateway载体因为重复序列较多，存放久了构象会改变导
致克隆失败，但是本身序列没变所以重新转化提新鲜的质粒就行了。 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 47 可以给一下文献链接么？
另外有没有推荐的commercial available GROES菌株？
fold |
|
g***a
发帖数: 337 | 48 比如我想自己凭空找一个有抗药性的菌株，我就把一大滴没抗性的涂在低浓度抗生素的
板子上，任其自生自灭，然后挑那上面幸运的长出来的，再扔在一块有抗生素的板子上
，其实我什么也没做，只是负责换换环境，然后大家自己进化出了抗药性，不适应的都
挂了。
我干这种事情的时候，觉得自己就是这群大肠杆菌的神。当然作为god，可能需要先给
我们造好DNA和RNA，然后再把大家扔在地球上。
PS，我不信教，但是我觉得宗教和科学不应该有交集，神永远属于形而上的世界，而科
学永远属于经验世界。 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 49 36kb的（invitrogen的pAD系列）质粒在TOP10上化学转化没问题，但不是连接产物。 |
|
n****3
发帖数: 543 | 50 GENOMIC DNA
1xTE
7cSalmonella+
Typhimurium, |
|
