d******e
发帖数: 65 | 1 我想卖的物品:
最后600油卡(200bp,400shell)
单张面值:
50
可接受的价格 (required):
.90
物品新旧要求:
邮寄方式要求:
买卖双方谁承担邮寄损失(required if not code only):
付款方式说明:
boa
其他补充说明:
广告的有效期:
物品来源 (required for ALL cards!):
我的联系方式:
warranty期限: |
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r**********e
发帖数: 587 | 2 想对大概200bp的oligo template做in vitro transcription
我的目的就是，对oligo进行突变，比如一个A，一个C， 然后做IVT， 然后就简单的
nanodrop测量RNA yield；来观察A/C对transcription的影响
protocol上说对于short template，IVT可能有点困难。我想请问为啥呢？因为
polymerase很大，polymerase initiation需要一定的空间距离？而200bp太短？
我的目标并不是追求max yield，我的目标是比较A和C的yield区别。但是，因为200bp
长度太短，我不知道用200bp做IVT比较yield，是否严谨？ |
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s****2
发帖数: 19 | 3 最近实验不顺到了极至. 做basic PRC扩增一个基因, 只用水做模板也会有特异性的条
带.
目的基因是昆虫发育调控基因,在人体没有同源基因,我不会是污染源.
之前这个基因是扩增了且构建好载体的. 最近总是没有办法重复出来以前的结果,才想
着重新检查下基因表达的.结果,做PCR就是用水做负对照都会有和目的条带差不多大
的条带.
开始以为是被污染了.buffer, Extaq, dNTP 都换了新的,水也是用的新开封的
commercial的ddH2o.结果用水作模板还是有一条漂亮的带.(也试了Gotaq,结果一样)
枪头肯定是新的,后来连枪都洗过了. 也重新去合成了之前那对引物,还是一样负对照有
带.
实在没有办法了, 重新设计了引物,产物也比原来长200bp.
悲催的是, 再次所有东西都换新的以后作PCR,负对照还是有条带,且比原来长200bp.
最后没有办法,都让实验室其他人帮我做,结果一样还是负对照有带.
今天老板让我不要自己再做了,找了专门作分子技师明天帮我做.
版上的各位高人,有人有过这么诡异的经历么,请赐教阿~~~ |
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m***o
发帖数: 272 | 4 Philipli,十分感谢你的建议。
做short form 的目的是：wild type 和short form是在不同的组织中表达。以前认为
这个gene only expressed in one specific tissue A, but after the lab got the
knock out mice, it has different phenotype. We trying to figure out the
mechanism if these related with the specific tissue A or the gene also
expressed in other tissue but at short form.
我现在是打算把这个short form最长的ORF表达出来看看，但是老板感兴趣的那个组织
我没有检测到，所以还会继续race.
还有问题没有彻底明白：
1 现在这个short form的TSS,我测到的是大概90bp的差别，是不是可以说是一个TSS
cluster?
2 你说每个cluster里面有大概200bp的差别，记得看过... 阅读全帖 |
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j*****q
发帖数: 82 | 5 接了个别人做的项目，设计的一团糟。
搞了个atg trap，后面的selection marker是通过targeting进去的。但是一直测不到
表达。atg和后面的基因之间能隔多远啊？我们这个隔了将近200bp。这个估计不仅跟距
离有关，跟中间的序列也有关系吧。想做个control，就是克隆这个隔了200bp的结构，
但是要做到一模一样的序列不可能。
请问下做个atg trap的，碰到这样的问题，一般怎么处理啊，我们以前做过中间隔50-
60bp的，都没有问题。 |
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H*******i
发帖数: 196 | 6 现在市场价格1kb gblock 150$ 比60bp引物自己搞便宜省事多了（但是序列有限制，
promoter terminator很大可能不能合，不过不知道大订单能不能单独谈减少限制）
长引物，现在IDT可以买200bp的，就是价格很贵（200bp接近100$了）
技术上没啥大突破，Venter当时搞那个基本把可能需要的技术问题都解决了。
最大科学意义就是删了一堆垃圾序列，在yeast上看起来对正常条件和短时间压力条件
的生长没太大影响。另外不知道他们有没有整理好的分段文库，有的话可以降低未来的
大规模染色体操作复杂度，以后把全合成yeast当作某些实验的一个模式生物也是不错
的。 |
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D********n
发帖数: 978 | 7 risk free rate是1 bps时charge 200bps和risk free rate是1000 bps时charge
200bps是一回事么？ |
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c********g
发帖数: 15629 | 8 http://zgrx.freeforums.org/topic-t35.html
方舟子与陈章良
对绝大多数海外学人来说，陈章良是一个耳熟能详的名字。这不仅仅是因为他是中国留
学生中回国时间较早（1987年）、回国之后地位上升得最快（1989年任北大正教授、
1992年起任北大生物系主任、生命科学院院长、1995年任北大副校长）、名气大得惊人
的一位人物，更是因为关于这个人的传闻一直不绝于耳。这是一些什么样的传闻呢？方
舟子曾在2000年12月16日专门就此撰写了一篇文章，题为《为什么不把陈章良立此存照
？》，其中说：
“目前网上对陈章良的指责主要有四点（估计都来源于《华夏文摘》几年前登过的一篇
攻击谈家祯、陈章良的文章，那篇文章充满不实之词，极不负责任）：
一、陈章良抄袭。
二、陈章良伪造恐龙蛋基因研究。
三、陈章良生活作风有问题。
四、陈章良学术成果太少。
对后面两点，不在我们打假范围。对前面两点，解释如下。”
http://www.xys.org/xys/ebooks/others/sc ... gliang.txt
方舟子说，“陈章良学术成果太少……不在我们打假范围”，显然是... 阅读全帖 |
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g*********r
发帖数: 9366 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
coarsening (草枯鹰眼疾，雪尽马蹄轻) 于 (Sun Jan 1 00:19:46 2012, 美东) 提到:
http://zgrx.freeforums.org/topic-t35.html
方舟子与陈章良
对绝大多数海外学人来说，陈章良是一个耳熟能详的名字。这不仅仅是因为他是中国留
学生中回国时间较早（1987年）、回国之后地位上升得最快（1989年任北大正教授、
1992年起任北大生物系主任、生命科学院院长、1995年任北大副校长）、名气大得惊人
的一位人物，更是因为关于这个人的传闻一直不绝于耳。这是一些什么样的传闻呢？方
舟子曾在2000年12月16日专门就此撰写了一篇文章，题为《为什么不把陈章良立此存照
？》，其中说：
“目前网上对陈章良的指责主要有四点（估计都来源于《华夏文摘》几年前登过的一篇
攻击谈家祯、陈章良的文章，那篇文章充满不实之词，极不负责任）：
一、陈章良抄袭。
二、陈章良伪造恐龙蛋基因研究。
三、陈章良生活作风有问题。
四、陈章良学术成果太少。
对后面两点，... 阅读全帖 |
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q******s
发帖数: 7469 | 10 金融市场不喜欢uncertainty,像川普这种大嘴巴当大统领，股市它开口一天能涨跌10%
，比美联储涨200bps都有效。所以我说那帮没心版的号称中产的床粉，应该都是4万多
年薪没401k没投资账户没房子的。这种就是光脚的不怕穿鞋的，来个革命它们才能翻身
的那种。 |
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h*****d
发帖数: 210 | 11 EMSA 新手，希望能碰到生物学的老师帮我看看。
我从种子提nuclear extract, 想做EMSA, 用的是DIG-Gel shift kit. 开啥有了
TATABOX （5 repeats) 25bp in length, 试试看蛋白是不是有功能的，结果没加蛋白
的free probe也有带，所以认为我那加了蛋白后产生的带不是真的binding，因为2 带
的位置是一样的。但是有些情况用其他大一点的探针，50bp, 会得到smear. 还有我跑
电泳的胶很小，8x8cm（bio-rad)， 5% native gel. 0.25x TBE buffer, 4C, 80V.
问题：
1）怎么能证明蛋白是用功能的？现在没有binding， 不知是不是蛋白的原因，SDS-
PAGE 检测蛋白还行。抽的几次都是结果差不多，尽管有些带很强且集中在2个区段，但
总体来讲，蛋白的分布大小都有。
2)能不能找个其他probe 做postitive control。 有人可以推见一下啥探针？
3）我是用的nuclear extract, 探针可不可以用200bp 长的。
4)调整些啥才能有好 |
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T***y
发帖数: 6600 | 19 若你是漂亮MM， 估计很多人愿意手把手的教你怎么用。 |
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l*****t
发帖数: 18 | 22 same as debit card or credit card, very convenient. |
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v****e
发帖数: 19471 | 23 yeah they insured the CDOs at very low premiums (like 20bp--200bp a year dep
ending on ratings). they realized the problem fairly early--it was like fall
2006 when they stopped doing that. but it was already too late. |
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H******i
发帖数: 4704 | 24 Tech Trader Daily
April 26, 2013, 2:51 P.M. ET
Amazon Falls 6%: Bull, Bear Debate Slowing Growth, Profit Potential
By Tiernan Ray
Shares of Amazon.com (AMZN) are down $17, or 6%, at $257.70, following a Q1
earnings report last night that featured lower-than-expected revenue, higher
-than-expected operating income, and a forecast for revenue this quarter
below expectations.
Amazon shares today reflect not only last night’s results, but also,
perhaps, word that a bill to pass Internet sales tax pa... 阅读全帖 |
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H******i
发帖数: 4704 | 25 Daniel Kurnos, The Benchmark Company:
Reiterates a Buy rating, and a $330 price target. Kurnos is keeping his
estimate for $77 billion in revenue this year, adjusted Ebitda of $5.3
billion, and $3.30 per share in adjusted EPS. “Although unit growth slowed
200bps q/q to 30%, excluding digital, 3P sales increased by 300bps q/q as a
percentage of physical units, which, combined with the ongoing digital shift
, led to OIBDA of $1.1 billion, up 37% y/y, exceeding our $979 million
estimate. Operating ... 阅读全帖 |
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l*****u
发帖数: 12114 | 26 2%就是200bps?, book value掉12%？ 按照最近的ER，BV是25刀，现在是22刀，就是12%
off, 是不是说明已经都price in了？
是什么在支持它的巨额分红？ |
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m*********a
发帖数: 3299 | 27 如果Interest rate +200bps, mortgage basis widening至少+25bps. book value -13
%.
-13%+ (12%)= -25%.
12% |
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m*********a
发帖数: 3299 | 28 如果+200bps,分红估计只有12%了，二年不赚钱，那不亏大了。
当然，如果你是对的，那就赚了。
对我来说，风险小的，能有10%就很好了。
如果要风险大的话，就去赌场赌大小，每把100%的回报。
赌场我还知道规则，但对许多股票我连为啥涨也搞不清。
成功率更低。没有赚大钱的命。 |
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Z***T
发帖数: 727 | 29 研究表明，端粒的平均长度随著细胞的分裂次数的增加及年龄的增长而变短。端粒DNA
序列逐渐变短甚至消失，就会导致染色体稳定性下降，这可能是引衰老的一个重要因素
。因此，端粒似乎是一种有丝分裂钟，限制者真核生物DNA复制的能力。越来越多的证
据表明端粒的长度控制著衰老的进程。端粒缩短是触发衰老的分子钟。人的体细胞每次
有丝分裂，如果没有端粒酶的活化，就会丢失50-200bp长度的端粒，当丢失数千个核甘
酸时，细胞就会停止分裂而衰老。活化的端粒酶将会导致端粒DNA序列延长，大大延长
细胞的寿命。如果把端粒酶基因导入正常细胞，细胞寿命将大大延长。这种结果首次为
端粒的生命钟学说提供了直接证据。那么，端粒缩短为什么会导致衰老呢？有理论认为
，端粒就像一种“时间延迟”的保险丝，经过一定数目的细胞分裂以后就被用完，当端
粒变的太短时，就不能形成原来的封闭结构了。人们认为，当细胞探测到此种结构时就
会启动衰老、停止生长或凋亡，这取决于细胞的遗传背景。
1998年《Nature》上有一篇标题为“Extension of Life-Span by Introduction of
Telomerase in... 阅读全帖 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 31 我不知道具体的transcriptome的大小。但是如果10%-20%的genome转录的话，100bp
paired-end reads，10 million reads的话，内存需要14 到23GB左右。（2X100bp这个
是按照100bp read size算还是200bp read size算？）
那个K值是什么？似乎不影响内存计算。
我还在等做这方面分析的人士给我一个准确的transcriptome大小的数值。
BTW，Velvet方便使用吗？你有没有用过CLC genomics workbench？
多谢！^_^ |
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q**********0
发帖数: 335 | 32 There are two RNAs, one is about 1800bp, one is 200bp, how to know these two
RNA molecule will complementary to each other? What kind of software we can
use? Thanks. |
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o********s
发帖数: 28 | 33 There are two RNAs, one is about 1800bp, one is 200bp
Should they be 1800nt and 200 nt? instead of bp? |
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h*****d
发帖数: 210 | 34 EMSA 新手，求教高手以下问题。
我从种子提nuclear extract, 想做EMSA, 用的是DIG-Gel shift kit. 开啥有了
TATABOX （5 repeats) 25bp in length, 试试看蛋白是不是有功能的，结果没加蛋白
的free probe也有带，所以认为我那加了蛋白后产生的带不是真的binding，因为2 带
的位置是一样的。但是有些情况用其他大一点的探针，50bp, 会得到smear. 还有我跑
电泳的胶很小，8x8cm（bio-rad)， 5% native gel. 0.25x TBE buffer, 4C, 80V.
问题：
1）怎么能证明蛋白是用功能的？现在没有binding， 不知是不是蛋白的原因，SDS-
PAGE 检测蛋白还行。抽的几次都是结果差不多，尽管有些带很强且集中在2个区段，但
总体来讲，蛋白的分布大小都有。
2)能不能找个其他probe 做postitive control。 有人可以推见一下啥探针？
3）我是用的nuclear extract, 探针可不可以用200bp 长的。
4)调整些啥才能有好的bindin |
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a*****i
发帖数: 361 | 35 我最近在做EMSA,也还是处于摸索阶段。
但是对于probe 200bp应该是可以的，我用的是400bp，因为我不太确定具体的binding
位点。另外，如果probe的条带和加蛋白以后一样只能说明没有bind的吧。我刚开始也
一直找不到binding的条带，后来配了几种不同的buffer，发现有一种效果好一点。这
个binding reaction的条件可能需要自己试一下，怎么样最合适。我用的是RNA，操作
过程中很容易降解，所以到现在也没一张我老板满意的picture。
希望你试验一切顺利！ |
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l*******k
发帖数: 361 | 36 EDTA有些时候对binding会有很不好的影响，尤其是你的蛋白是ATP binding protein的
话，你可以用Tris-Boric Acid buffer试试，合适的binding condition（buffer, ph...)需要自己摸索的，我觉得你可以找一个TATA binding protein作为positive control来改进你的实验条件，一般来说，probe越长binding越难检测， 100bp左右比较reasonable，200bp有些太长了 |
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h*****d
发帖数: 210 | 37 我试过了TATABOX1 有5个重复，共25bp (5x5)不过效果不好，不知为啥。
只不过这个探针不是我标记的，也很长时间了，大约有 一年多了。free probe 有个带
可能是跑的时间不长吧。
ph...)需要自己摸索的，我觉得你可以找一个TATA binding protein作为positive
control来改进你的实验条件，一般来说，probe越长binding越难检测， 100bp左右比
较reasonable，200bp有些太长了 |
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j***a
发帖数: 2 | 38 这里EMSA 高手很多，请大家帮忙看看
用一段PROMOTER 序列（200bp) 做probe, 能binding 到体外转录的蛋白上，但背景比
较高然后用两个片段来做probe, 有一段能binding, 。奇怪的是，当把这个片段再弄成
两段（直接合成PRIMER, ANNEAL)就没有binding了，难道是这个binding 需要二级结构
？ |
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y******8
发帖数: 1764 | 39 I think the resolution of ChIP can be 200bp. If in genomic not plasmid
DNA, the promoter should hold more POL II than coding region.
And you can try other transcription initiators. |
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n********k
发帖数: 2818 | 40 simply modify the vector first by fusion PCR (about anywhere 200bp-1kb)
introducing the desired cut site at
the desired position...and then do whatever you want...I would't trust any
PCR with a 13KB template without
sequencing...if u are luck, everything might be alright but u could end up
in dark having no clue what's gone
wrong...If you want to do the cloning in a single step which I won't
recommend if not an experienced one, just
go three piece or even four piece ligation... that way, u mig... 阅读全帖 |
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g******1
发帖数: 244 | 41 在新实验室第一次做RT-PCR，用的是实验室传下来的protocol。
oligoT作RT以后再用cDNA扩增，使用200bp左右产物的primer sets扩增，3组全部扩出
产物；但是
同一个基因，1kb左右产物的primer set就扩不出来。因为有正负对照，知道PCR体系和
引物没问题。
但是试了很多次，包括使用其他基因的引物，都是括不出大片段。
这是什么情况？ |
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m********r
发帖数: 124 | 42 版上牛人多，特来问个问题：
PCR总是令人烦恼，国内的时候就遇到过，现在又出来折腾我了：
我是想分别扩e.coli两个蛋白的两个同源domain,都很小，200bp的样子，但总是得不到
，都只有引物二聚体。我不觉得是引物的问题，因为两组引物都失败了，而且以前没有
遇到过这个问题。我到觉得是模板的问题。我直接用的colony，然后用PCR的那个95度
10Min，理论上认为能裂菌。我在想是裂菌不充分呢？还是我开始加的菌落太多了？我
一直担心模板不够，挑个菌落在tube里twirl了很久。或者裂菌之后就是问题比较多，
我应该尝试的先制备chromosome再扩增呢？太头大了，牛人过来指点下吧 |
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x********u
发帖数: 430 | 43 You can try alternative heating and cooling for breaking down the cell. 3X[
95C/1min and -80C/5min].
Try to use GoTaq Hot Start DNA polymerase.
If you still cannot get the desired band, try growing the cell in liquid
culture, and make genomic DNA by PureLink gDNA kit.
Since your fragment is around 200bp, why not just synthesize the sigle
strand oligoes and reconstitute your molecule by annealing on a PCR machine.
Good luck! |
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c***y
发帖数: 615 | 44 谢谢回复。能详细讲一下reshuffle的具体设计方案吗？你是担心任何3'端的插入片断
都会影响luciferase level?
我其实test 了3个不同的in vitro selection products ( 序列完全不同，但长度在
100-200bp), luciferase reading （after normalized with against Renilla
reading） 分别是：0.6, 1.35, 1.1 (control reading 是0.39)
24 |
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s******s
发帖数: 13035 | 45 这个是长的probe，普通的PCR产物或者plasmid, 用DNaseI随机切出nick,
然后用klenow还是啥重新合成片段掺入biotin。长度大概200bp－500bp，
取决于反应时间，时间越长，DNaseI的nick越多，片段越短 |
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D******t
发帖数: 79 | 46 RNAlater works good for me, although some people started to argue against it
.
For mRNA Deep sequencing, I extracted the 200bp band and purify the band
myself. It works good. |
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i*e
发帖数: 352 | 47 一开始我猜也有可能是跑胶缓冲液太久没换的关系
不过你说新引物也相对应有200bp的诡异条带
难不成上样/跑胶时候漂移了？ |
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p******i
发帖数: 1092 | 48 转录的起始位点：
如果有TATA BOX, 很可能是single transcription start site，
但是大多数真核gene都没有TATA BOX，所以都是有好几个TSS clusters，每个TSS
cluster里面的TSS们大概在200bp这么大的范围之内
如果有几个相聚较远的TSS cluster，那么这个gene有可能有不同的mRNA species，但
是还是要做实验去验证
是不是应该针对每一个mRNA species，再单独考虑start codon 的问题？
however... 貌似很多gene都有不同的mRNA species，但是不一定这些mRNA species都
有功能，更不一定都会translate成蛋白
你说你的目的是得到一个蛋白的short form，
你expect short form和wild type的区别是什么？
after all, if there is nothing new about this short form, you cannot publish
, right?
是不是可以把可能的short form的ORF... 阅读全帖 |
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k****l
发帖数: 279 | 49 How do you know your template is OK? and in the right amount?
Try amplifying 200bp as positive control |
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g*********d
发帖数: 233 | 50 夏荣辉，李江
上海交通大学医学院，上海（200011）
E-mail：e******[email protected]
摘 要：基因的表观遗传学修饰正越来越受到人们的重视，它包括DNA甲基化和组蛋白修
饰，组蛋白修
饰又包括组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化。基因的表观遗传学改变在基因转录调节方面有
重要作用。最
近研究较多的是多种组蛋白修饰方式和DNA甲基化在基因转录调节方面的共同作用，本
文详述组蛋白
修饰和DNA甲基化的发生机制，并且总结了组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化与DNA甲基化之
间的相互作
用，提示不同位点的组蛋白甲基化与DNA甲基化共同作用于基因转录，并且发挥不同的
作用，具体体
现在组蛋白乙酰化、组蛋白H3K9、H3K27和H4K20甲基化与DNA甲基化协同作用，使基因
发生转录抑
制，而组蛋白H3K4甲基化与基因转录激活有关。
关键词：组蛋白修饰；DNA甲基化；关系
1. 引 言
目前，在研究肿瘤发生发展的过程中，基因的表观遗传学修饰所起的作用日益得到人们
的重视。组蛋
白修饰和DNA甲基化是两种最重要的表观遗传学修饰方式。研究表明，人类几乎所有类
型的肿瘤都存
在组蛋白及DNA甲基化的异常... 阅读全帖 |
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