m**********3
发帖数: 636 | 1
最后两条Jcrew的条绒裤子,她家号都大,颜色看照片.
这个是28s
每条十五块加邮费. |
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s**********s
发帖数: 7387 | 2 i agree that there is no picture that you can't make with a me super while
you can with a M6. but for wide angle focal lengths with wide aperture, i.e.
35/1.4 or 28/2.8, SLR lense are just too bloody big compared to Ms. even
SLR 50/1.8 is significantly bigger than a 'cron 50.
and aren't those brilliant 28s, 35s and 50s among the major reasons of
buying a M? |
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x*x
发帖数: 2001 | 5 咋了，开头在左手，
28s时候摘下来了拿在右手。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 8 我本科和硕士7年在海大度过，对海大感情很是深厚！时常去海大校园散步，感觉很美
好、很亲切！
今年6月我将从中科院海洋所的海洋生物学专业博士毕业；希望去美国作博后。我博士
期间做扇贝（软体动物）的分子免疫相关研究，主要是克隆了2个蛋白酶抑制剂基因，
运用real time RT-pcr 对其在菌刺激后的表达规律进行研究，验证其参与了免疫应答
；然后在原核细胞中对基因进行表达，对重组蛋白进行抑制蛋白酶的活性研究，并对其
抑制常数进行实验与计算。本想继续做点pull-down，及RNAi对其相互作用的蛋白进行
研究，并对其体内功能进行研究，但是时间好像比较紧张。
硕士期间做赤潮藻原甲藻属的分子系统生物学研究（18S，28S，ITS区），并对物种特
异性探针及引物的设计作了研究，以期用于赤潮藻的监测。
查阅美国，做海洋生物的分子生物的好像不多，目前查到Dr Warr。
我想让海大校友看看我这个背景（自我感觉比较差，不过咱海洋生物起步比较晚，就这
现状）申请美国哪个方向的比较可行？那些专业，或者那些学校？当然指点一些实验室
最好。
感觉转医学健康相关应该一点戏都没有的；但是"免疫-流行病"，或“ |
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l***h
发帖数: 392 | 9 这歌cpu太弱了吧
60s太慢了 x2 240都有28s。 |
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a*******t
发帖数: 1356 | 10 [root@Pogoplug /root]# time dd if=/dev/sda of=/dev/null bs=4M count=100
100+0 records in
100+0 records out
real 0m 15.28s
user 0m 0.00s
sys 0m 5.30s
多谢啦，看来没问题 |
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E****A
发帖数: 184 | 11 I tried once, only loaded 60ug total RNA of each sample for mRNA isolation,
however still some 28S and 18S rRNA left, as one of the probes located in a
CpG island, lots of the probes cross-hybridized with the left rRNA,
frustrated! |
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e*r
发帖数: 103 | 12 请问有人用过Bioanalyzer测总RNA吗？？ 一般来说第一个峰是marker 大约在25左右。
最后两个峰分别是18s 和28s. 有时候会在marker 峰后又来个峰，这个是什么呢？ |
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w******e
发帖数: 1187 | 13 土人第一次做，全盘follow trizol的protocol。为省reagent用了100mg tissue
per ml trizol。发现以下问题，请达人指点：
1. chloroform extraction后的precipitation，为什么用isopropanol？室温
incubate也让我很困惑。。。
2. 做了两次，第一次是heart，拿到RNA很顺利，测OD时发现：260 peak偏向270；
230附近有极高的峰。看来chloroform和precipitate后wash的步骤都不太effective？
3. 第二次做liver，搞到巨多RNA，很oily，dry了之后pellet死活不溶，试了
60oC加热，加大volume，最后还是有很多不溶。是不是trizol用少了？
4. 用了hand held homogenizer和pestle+mortar两种tissue homogenization
methods，run了urea agarose gel（顺便请问大家都用什么denaturing gel），
18S:28S rRNA大约1：1，很困惑degra |
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w******e
发帖数: 1187 | 14 28s:18s should be 2:1 I believe? |
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h******u
发帖数: 131 | 17 一种柱子，从公司买的。如果你的基因有homologue, 或者多个isoform. 也有可能出现
这种情况。 |
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n*****e
发帖数: 119 | 18 可以用kit把大部分rRNA去除。看看能不能增强信号。 |
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d******u
发帖数: 178 | 20 这个如果是直接用PCR产物标记作探针挺常见。我们是把扩增片段克隆到pGEM-T里面，
用酶切产物作探针，基本解决问题。 |
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e****p
发帖数: 354 | 21 DADIAYOU 我问一下质粒酶切后还做用P32 DCTP做PCR 吧
cheerfly 割胶回收后PCR产物做探针，PCR的模板是CDNA，用OLIGODT 反转录的话，为
什么还会28 18S 污染呢？
WWWWLZ质粒做模板还是会有这种现象，你的建议是什么呢？还是探针位点问题？
非常感谢！ |
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d******u
发帖数: 178 | 22 质粒酶切后a-P32 CTP+Klenow标记 |
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c******y
发帖数: 148 | 23 模板是cDNA，
1，cDNA合成之前是否用Dnase I 消化
2，RNA降解途径或者RNA processing过程中会出现polyA加尾现象，我了解的至少植物
叶绿体的RNA的存在这种现象，刚google下，似乎哺乳动物也存在这种异常的加尾，用
oligodT反转录有可能会产生rRNA的cDNA
3 质粒做模板
miniprep的时候是否有痕量的大肠杆菌的基因组污染？
建议放弃PCR做模板，
酶切质粒，或者合成oligo探针
1，2，3的解释也仅仅是个人猜测了 |
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t*****z
发帖数: 1598 | 25 谢谢楼上各位，尤其是Chamgrape的方法，如果真的管用那太好了。我今天试了下一个
total RNA。一条亮带在0.8kb，一条暗带在1.4kb，乘以2之后勉强接近18S和28S的大小
了。粗略定量也许可以吧。 |
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c********b
发帖数: 363 | 26 normally people use rRNA (like 18S or 28S) as a control, so run on is
general for RNA polymerase but not only for Pol II.
Run-on reflects how many active polymerases were binding to the gene-of-
interest at the moment the cells were freezed. So it can reflect the
transcription activity (I did not stay that it can tell the stability). And
of course, you know nothing is 100% in biology, right?
nuclear run-on, just google it, easy to find. It is not good for short genes
, because less space for pol... 阅读全帖 |
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w***7
发帖数: 463 | 27 28s/18s should be greater 1.5. yours is 1. please redo it. your profesor is
going to kill you. |
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W*****o
发帖数: 1780 | 28 现在检查mRNA integrity的办法是不是都是通过rRNA的？（28S:18S或者RIN).有没有办
法不通过rRNA直接检测mRNA是否降解的办法？谢谢！ |
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W*****o
发帖数: 1780 | 29 能有个定量的概念吗？就像RIN或者28S:18S这样的数值。
而且对于RT-PCR是针对特定基因的。不同基因可能结果不同。 |
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g********6
发帖数: 86 | 30 可以deplete rRNA后做NGS。不知道你用什么beads做IP，magnetic beads有很高的
background binding。
TapeStation
28S |
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s*******e
发帖数: 1389 | 31 Dashed line 讲的是insert（开始60秒）中的～28s处的“虚线” |
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H**T
发帖数: 3007 | 32 ～28s处的“虚线”放大32倍后还是相连的，一点也不虚啊。“虚线”至少相邻两点在
100%比例的时候应该有一定的距离。 |
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R*****s
发帖数: 41236 | 33 6/8/12
先游了250yd x 2, best time: 5:04, 又PR了.....
要是早上不做那100个深蹲， 今天估计就能破5分了...
还是第一次游得最快最轻松， 感觉还是胳膊的
有氧能力不行的原因....
然后试了试新买的kick board和pull buoy,
分别测试了一下只打水/只滑水/正常游， 25yard,
每种都大约测了4-6次， 取最好时间(都是带踢墙），
结果：
带pull buoy划水： 29s
扶kick board打水：28s
正常游：25s
发现带pull buoy很怪， 还不如自己打水， 也不如正常游快....
扶kick board腿打水相当的累， 打一趟喘半天， 效率还是比手
差太多了， good news是倒不算太慢...
正常游和带pull buoy游基本划水次数差不多， 25yard基本两个手
要30下左右， 说明我划水的效率非常低， 这个是下面要着重
改善的问题.....
另外， 用卷尺量了下池子， 的确是25 yard的标准池.... |
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k*******i
发帖数: 158 | 34 看了看几个dealer的inventory，基本都是2014的，而且几乎没有裸的，都是装了tech
或者premium的，基本28s Drive要36000起。当然我还没有询价，看能降多少。我感觉
能33000拿到差不多？ |
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