k**l
发帖数: 2966 | 1 looks like pretty hardcore, reading the documents...
btw, about the simplest solution "alarm()", if my code took 2.35s to finish,
it can only wait 8s(or 7s?) instead of the desired 7.65s, right? |
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K****a
发帖数: 161 | 2 我在目的基因CDS 3'端加了一个Flag-tag，然后转化Arabidopsis野生型，用的是35S
promoter。转化植株的第一代RNA水平高的株系挑选出来传代，第二代出现表型分离，
而且符合3：1的比率。用Northern检测第二代植株的RNA水平，发现出现特殊表型的植
株中RNA水平很高，但是用western检测不到蛋白表达。所以我设计了三段探针，分别用
目的基因CDS的前，中，后三部分，Northern结果发现前段和中段探针能检测到高表达
，但是最后一段却没有信号。
现在我想的是高表达的RNA不是全长，所以用Anti-Flag抗体检测不到蛋白表达。但是我
不知道为什么会出现这种情况。构建的用的是CDS，不含任何intron，按理说不会出现
alternative splicing。我现在想的是在5'端再加上一个HA-tag，转化得到过表达植株
，看看会不会出现相同表型，如果有的话，RNA是不是truncated，如果是的话，用Anti
-HA抗体检测看看有没有truncated protein存在。
遇到过这种现象的同学能不能指导一下，我想破脑袋也没想通。多谢！ |
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g*********5
发帖数: 2533 | 4 i.e, some substitute of 35S-Met AND 35Cys? |
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H******d
发帖数: 13 | 5 谢谢您提供的信息！俺用的是35S驱动的eGFP。从mRNA水平看，表达量是相当高。当然
蛋白水平可能根本就不高。事实上用抗体检测有明确的信号但不是很强。您能不能告知
the element of the translation enhancer in his construct。
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l**********1
发帖数: 5204 | 6 Did you try test the level of leakiness with no isotope label actin?
i mean whether your target even abundantly but still holded entirely intra- cellular tyrosine-
containing protein, such as actin or tubulin:
then your negative control with 35S labeled that also became Immunoprecipitation positively
Details please go to
Protocol full text link:
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch07.Protein%
20Labeling.pdf
cited :
>For many applications, an important control for surface-l... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 7 Did you try test the level of leakiness with no isotope label actin?
i mean whether your target even abundantly but still holded entirely intra- cellular tyrosine-
containing protein, such as actin or tubulin:
then your negative control with 35S labeled that also became Immunoprecipitation positively
Details please go to
Protocol full text link:
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch07.Protein%
20Labeling.pdf
cited :
>For many applications, an important control for surface-l... 阅读全帖 |
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V***b
发帖数: 3419 | 8 嗯，是这样。ub-substrate在降解前还要de-ub，所以de-ub的效率也影响proteasome降
解该底物的速度，而且de-ub的酶还很多，针对每个底物还不一样。我想的是最简单的
方法用cell lysate，然后把ub-GFP丢进去，温育一段时间，然后看看底物省多少。如
果ub-GFP加速降解，我至少可以说UPS在这个细胞里活性增强了。不过感觉挺弱的。
我现在正在搞35S pulse-chase看global protein turn-over，但这个细胞的autophagy
和lysesome都变了，试验结果不容易阐述啊。。。就怕reviewer到最后猛踩我一脚，我
就无法翻身了。 |
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c********b
发帖数: 363 | 9 其实我觉得不一定是linker的问题，表达量出问题的可能性更大。
你是做的转基因还是transient 表达？一般我都是先在烟草里面agro-infiltrate试过
之后才做转基因，protoplast也OK，但是麻烦些。
我不同的蛋白连同样的linker（比如说pK7FGW2.0里面的那个GFP linker），表达量相
差10-50被是很经常的事情。有的用35S promoter表达好，有的用inducible （
estrogen）表达好。加不加RNA silencing suppressor差别也很大。有的蛋白老叶子新
叶子都能表达，有的只能在新叶子上表达。
与其在linker上折腾（估计也很难找到万能的），你试试agro-infiltration，用P19做
co-infiltration，这个算是做简单的了。 |
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y*******a
发帖数: 303 | 10
我们也是用高保真酶P的全长。我是觉得colony PCR 没必要用高保真酶检验。我的
promoter是35S，不知道是不是E.Coli体内无法接受protein kinase? |
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y*******a
发帖数: 303 | 11
我可以得到基因的全长，只是觉得用高保真酶做colony PCR比较浪费。我用的promoter
是35S.不知道是不是因为E.Coli自身接受不了protein kinase的表达？ |
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y*******a
发帖数: 303 | 12
我的promoter 是35S。 strain是DH5alpha。 |
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c********b
发帖数: 363 | 13 我说的当然包括GFP融合蛋白。只要是35S driven的GFP融合蛋白的定位，除非之前已经
研究的非常清楚，不然大多数情况Plant Cell是不会放过的。
只有用native promoter driven的GFP融合蛋白能成功互补loss-of-function mutant的
情况下，plant cell才会认为OK。 |
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f******t
发帖数: 2699 | 14 有人知道转的Bt用的什么promoter么？随便翻了一下，没看见。如果是35S，开始减数
分裂之后就没有表达了，所以种子里面应该是不表达的。
稻属杂交应该比较困难，可能因为稻属的genome相对复杂，要不怎么说袁老贡献大呢。
玉米不太一样，作物玉米跟其他玉米草之类的东西都可以杂交，但是杂交后代育性我就
不清楚了。 |
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c********n
发帖数: 225 | 15 谈谈和蛋白打交道的日子 （一）
序
笔者已经做了多年和蛋白相关的科研与服务，产品研发生产以及产业化。在这里分享一
下与蛋白打交道这些年带来的一些感想。其实所有的科学研究都是用来解决人类已经和
即将遇到的各种各样的问题的，只有解决了问题才会有更大的存在价值。
第一篇 DNA测序， Sanger Style - 纪念Frederick Sanger
2013年11月20号，Frederick Sanger 去世了， 享年95岁。Sanger是DNA测序之父，获
得过两次诺贝尔奖， 一个是1958年蛋白测序， 另一个是1980年DNA测序。虽然DNA结构
发现的比蛋白晚， 但毕竟是genetic code，master script。ATCG四个碱基的组合比蛋
白的20个氨基酸的天文数字组合可更容易研究找规律了。人天生就是个好奇的动物，
最喜欢找规律, 尤其喜欢从简单的地方入手，所以围绕DNA的研究在Watson-Crick的碱
基配对这个简单地规律被发现以后，起来的就比蛋白快了很多。其实DNA和蛋白， 就像
是帅才和将才， 他们的用处是不同的，需要出色的帅才（DNA）订好了方向，能干的将... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 16 谈谈和蛋白打交道的日子 （一）
序
笔者已经做了多年和蛋白相关的科研与服务，产品研发生产以及产业化。在这里分享一
下与蛋白打交道这些年带来的一些感想。其实所有的科学研究都是用来解决人类已经和
即将遇到的各种各样的问题的，只有解决了问题才会有更大的存在价值。
第一篇 DNA测序， Sanger Style - 纪念Frederick Sanger
2013年11月20号，Frederick Sanger 去世了， 享年95岁。Sanger是DNA测序之父，获
得过两次诺贝尔奖， 一个是1958年蛋白测序， 另一个是1980年DNA测序。虽然DNA结构
发现的比蛋白晚， 但毕竟是genetic code，master script。ATCG四个碱基的组合比蛋
白的20个氨基酸的天文数字组合可更容易研究找规律了。人天生就是个好奇的动物，
最喜欢找规律, 尤其喜欢从简单的地方入手，所以围绕DNA的研究在Watson-Crick的碱
基配对这个简单地规律被发现以后，起来的就比蛋白快了很多。其实DNA和蛋白， 就像
是帅才和将才， 他们的用处是不同的，需要出色的帅才（DNA）订好了方向，能干的将... 阅读全帖 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 17 how about 35S and 75Se? thanks |
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s******s
发帖数: 13035 | 18 35S非常safe，衰减快, beta弱，这玩意儿连epp管都穿不太过，
一般实验室用的mCi级别没有大危险，不要吃下去就行了 |
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I*******o
发帖数: 49 | 19 各位前辈，
我检查WT和mutant B中蛋白A的蛋白量，发现没有区别。但是，我将蛋白A的超表达植株
与mutant杂交，从F3中获得野生型和突变体背景的蛋白A超表达植株，发现蛋白A在
mutant中的蛋白量低于WT。这结果怎么解释呢？蛋白B貌似不能影响蛋白A的endogenous
水平，但影响artificial超表达的水平，有意义吗？这结果可信吗？谢谢大家指点迷津
。 |
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a***y
发帖数: 19743 | 20 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: aaaty (阿fan提), 信区: Biology
标 题: 请问哪里可以定制或购买放射性维生素B1
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 19 19:43:13 2011, 美东)
比如14C或者35S的
谢谢！ |
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w********w
发帖数: 1550 | 21 今天订了几本书，加HP 35S，一共300多大洋，惨啊。
加州就是倒霉，还要买测量，地震的书。每个考试都是40%的通过率，我同事都两次落
马了。
大家有没有今年十月考的？ |
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f*********d
发帖数: 366 | 22 FE/CivilPE 三个牌子的calculator, 有没有人用过， 知道那个用起来比较顺手啊？请
大家帮忙推荐一个。。。。
谢谢！
(1)HP-33s ; HP-35s
(2)Casio - All FX-115 models. Must have FX-115 in it's model name.
(3)Texas Instruments - All TI-30X and TI-36X models. Any Texas Instruments
calculator must contain either TI-30X or TI-36X in its model name. |
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w********w
发帖数: 1550 | 23 hp is for professionals. check out the hp 35s. plus RPN requires less keys
for the same calculation. |
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m*******1
发帖数: 328 | 25 That is not a very smart request. If your boss MORE power in medicine, it is
much less in surgery. He could not help you a lot outside medicine. Be
realistic though. Surgery is really cool work. But you are at much higher
risk to be kicked out in GS than IM. Even if he could get you in, at most,
it is preliminary surgery (non designated). It is much less than categorical
IM. Man, I know exactly how you feel. You want to return to clinics one
day and pick up the lancet again. You feel like a big... 阅读全帖 |
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c*********a
发帖数: 11 | 26 宇宙模型之幻方结构
——描述整个宇宙的一个“简单的理论”
陈振华
第九章/一百章：稳定核素之幻方结构描述
概要：
原子的稳定核素与例2数阵“蓝图”更多的是一致性，成为一种常态；不一致的显然不
符该标准，成为非常态，因而衰变，其能量激荡伴随放射性，成为“放射核素”。
研究者给出的“核素”概念是：核素是指具有特定的原子序数、质量数和核能态，且其
平均寿命长得足以被观测的一类原子，分为稳定核素和放射核素两类。较通俗地说，核
素是指具有一定数目的质子和一定数目的中子的一种原子。
承续第七章的阐述，元素自发性的“数序整合”工程，其目的是按照例2数阵“蓝图”
标准，整合出能在下一个层级的构建工程中能用的结构单位，“能用”的基本前提是要
有相对的稳定性。
数序整合工程过程中，难以实现各个工程单位同步，所以会出现一种情况是一些单位该
用的核素材料或是在寻求中，或是被别的单位抢走了，形成了“半拉子”工程；还有一
种情况是工程本来完成了，但因天然聚合力的影响，贪婪性地增添了多余的核素材料—
—“半拉子”工程的持续施工及多余的核素材料受常态规律干预而调整，表现为衰变，
其能量激荡会伴随放射性——因而有了“... 阅读全帖 |
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l*****j
发帖数: 5163 | 27 非常感谢楼上热心的mm！很感动大家这么热心啊！听了版三mm建议去menswear house试
了一下，需要35S号，回来google了下美国大部分牌子最小都是36号，所以只好在
menswearhouse买啦~~
衷心谢谢大家//bow~ |
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G***s
发帖数: 10030 | 28
4
西装一般要稍微长点吧，你确定是35s？这个也太小了吧，还是不同的品牌号码差的不
一般 |
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z*****r
发帖数: 4261 | 29 不用谢，买到合适的就好！
非常感谢楼上热心的mm！很感动大家这么热心啊！听了版三mm建议去menswear house试
了一下，需要35S号，回来google了下美国大部分牌子最小都是36号，所以只好在
menswearhouse买啦~~
衷心谢谢大家//bow~ |
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z*****r
发帖数: 4261 | 30 西装一定要试，试穿的时候，店员也会给些建议。
4
西装一般要稍微长点吧，你确定是35s？这个也太小了吧，还是不同的品牌号码差的不
一般 |
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D******y
发帖数: 3780 | 31 are you talking about the HPFP issue for 35s? |
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A********h
发帖数: 2789 | 32 有不少新车型要出啊
http://www.autoblog.com/2015/08/26/barracuda-grand-cherokee-tra
Chrysler
Dodge Durango-sized SUV with stow-and-go was shown. A poster on Allpar
Forums claims it had a Durango's interior. New Aspen?
Town and Country PHEV confirmed (again). A plug-in minivan was originally
announced as part of five-year plan.
No news on 200 or 300.
Dodge
The redesigned Charger will use the Alfa Romeo Giulia's rear-drive platform
and, according Automotive News, draw inspiration from 1999's Charger concept... 阅读全帖 |
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b*****e
发帖数: 14299 | 34 ☆─────────────────────────────────────☆
anoia (阿诺) 于 (Sat Feb 24 17:37:23 2007) 提到:
Hexar
T3
Rollei 35S or 35SE
而且按道理说35系列的黑色版本很少,结果发现ebay上n多...心动啊...
☆─────────────────────────────────────☆
devtt (唯心 ～ 素的) 于 (Sat Feb 24 17:38:17 2007) 提到:
rollei 35 可是纯手动，估计对焦，测光不准啊
你也玩？
☆─────────────────────────────────────☆
devtt (唯心 ～ 素的) 于 (Sat Feb 24 17:38:54 2007) 提到:
而且这个机器很多新加坡产的
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anoia (阿诺) 于 (Sat Feb 24 17:41:05 2007) 提到:
所以要黑色的
是最早德国产的
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