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c*h
发帖数: 33018 | 3 貌似rate要涨了，up to 80bps
发信人: pc (>>>>>mac), 信区: Living
标 题: 貌似rate要涨了，up to 80bps
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 16 11:47:24 2012, 美东)
只有conforming fixed (including high balance)受影响，arm, jumbo等不变
up to 80bps according to Wells Fargo
http://www.mortgagenewsdaily.com/channels/pipelinepress/0116201
发信人: kellyguo (kellyguo), 信区: Living
标 题: Re: 貌似rate要涨了，up to 80bps
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jan 16 12:31:11 2012, 美东)
Relatively speaking, that is true. Most lender already started to include
this at their pricing ... 阅读全帖 |
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X*******0
发帖数: 134 | 4 50-80bp的primer,你有没有考虑到这么大引物合成中的错误合成,不完全合成?有没有向
引物合成公司注明要求PAGE纯化?不注明的话公司默认是给你脱盐纯化,错误产物也混在
里面.你这么长的primer,里面可能有大比例的错误引物,必然杯具啊
80bp |
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A*******e
发帖数: 284 | 5 你的是不是20bp的配对区后面接着80bp的尾巴？ 如果这样真的很难p出来，尾巴太长。
我的经历是不要一次加80bp，一次加20-30，p完这轮，再加20-30，这样才能做出来 |
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s******a
发帖数: 472 | 6 是的，20bp的配对区后面连着80bp的尾巴。之所以这样做主要是因为实验室另外一个
PhD以前就是这样子做的，我的protocol也是按照他以前的修正过来的。
现在他带我做，所以基本上整个克隆策略是“复制”他原来的策略。其实一次加80bp确
实不好，合成时间长，质控不合格重新合成时间更长。
他不大听我的意见，会说他之前都可以，肯定是我的问题。因为做的不顺利，他都说过
我浪费钱了。要是我给他说我想重新合成引物估计他不愿意。
所以现在很郁闷，如果想自己try某个参数什么都想避开他，总是说这个没有影响那个
没有影响。实在郁闷。 |
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F*****t
发帖数: 3219 | 7 A股迎"定向降息"！证金公司下调转融资费率80基点
新浪财经综合 2019-08-08 06:28
8月7日一则央行将降息的假消息扰动市场，但随后被央行辟谣，证实是假消息。不过随
后证金公司下调转融资费率80BP的消息，又再度搅动市场，有不少观点热情地理解为，
这接近于向股市定向放水，央行没有降息举动，证金公司却对A股定向降息了。 |
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k******o
发帖数: 3328 | 8 Relatively speaking, that is true. Most lender already started to include
this at their pricing model step by step. |
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b********2
发帖数: 5191 | 9 WF的policy是这样的. 但目前因为欧洲那边, rate还是在走好. |
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h****3
发帖数: 187 | 10 两房这次G-Fee的增加，其实是要让以后取得新贷款的人士去补贴 payroll tax cut 的
受益人。 |
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m*******d
发帖数: 274 | 11 What is bps? If rate raises 0.8%, that is a lot! |
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d*********t
发帖数: 751 | 12 google到的
Investopedia explains 'Basis Point - BPS'
The relationship between percentage changes and basis points can be
summarized as follows: 1% change = 100 basis points, and 0.01% = 1 basis
point.
So, a bond whose yield increases from 5% to 5.5% is said to increase by 50
basis points; or interest rates that have risen 1% are said to have
increased by 100 basis points. |
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p******y
发帖数: 3523 | 13 不是，针对rate，估价上涨在0.25%左右。
我觉得短期看，rate走高的可能性很大，但整体经济没有起色的话，rate还是有可能再
下降的，不过，要想降得比现在更低就有难度了，通胀以及人为的调整，其实都是在提
高rate的下限。 |
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l*****o
发帖数: 26631 | 15 希望银行的存钱利息也涨，比俺滴贷款利息高就好了，嘿嘿... |
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k******o
发帖数: 3328 | 17 rate还是跟大盘的经济相关的，由于经济进一步恶化而导致的利率下降，有可能会被各
种政府所收的费用offset掉一部分， |
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k******o
发帖数: 3328 | 19 Nod Nod. Absolutely correct. |
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e****s
发帖数: 1125 | 21 我用ZYMO的Kit弄过80bp的，我只是把2次洗涤，减到一次。效果很好。
关键还是PCR产物多点就好了。 |
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b*******6
发帖数: 39 | 22 我4个月前硕士毕业来德国
一个挺好的大学 拿的是老板给的奖学金 不是国家奖学金
老板是我们这行的大牛 说实话 人也不错
刚开始的课题1个是克隆，把一个蛋白加上不同的tag插到pQE8或者pQE60的载体里面去
载体选的位点是BamH1和Hind3，片段的酶切位点用的是Bgl2（因为片段里面有BamH1位
点）和Hind3，因为要在N段和C段加上10+aa大小的tag，所以一般引物都很长，50-80bp
本来想用pQE9而不是pQE8，但实验室里面没有9，BamH1和Hind3在8里面中间就隔了1个
碱基
第二个课题是用Dpn1酶构建不同的突变株
用pQE8的那个载体死活折腾不出来，前前后后大概4个月，另外2个倒是很顺利
第一次和老板谈活是在来这边3个月后，他说我是来读博士的，不应该在克隆这种小事
上折腾，应该很简单；第二次，就是昨天，他看到我pQE8最后一次克隆的结果：仅有几
个克隆，送过去测序，要做的8个构建株里面只有一个对的，其他基本上都是在Bgl2那
一段的引物地方要么有突变要么就是缺失。然后就发火了，叫我2个月以内结束实验室
课题走人。
来这边4个月，除了开始阶段适应外，基本上... 阅读全帖 |
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n***w
发帖数: 2405 | 24 引物是不是太长了。。。我从来没有用过这么长的引物，你试过用overlap pcr吗？另
外，你dNTP加了多少，有时候dNTP
要是不够，发生突变的概率比较大。
祝lz好运！
lz这么短时间内，比我有成果多了～～
80bp |
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s****9
发帖数: 932 | 25 我前段时间也是有个简单的subclone做不出来，后来实验的technican上手２天就搞顶
了。
后来发现别人给我的viral vector本身就不对。
汗，我已经postdoc第二年了。
80bp |
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n********k
发帖数: 2818 | 26 BamH1和Hind3在8里面中间就隔了1个
u run into a difficult but rather common problem...how did u do your
digestion? Have your checked NEB
appendix about it---the correct one would be digest with HindIII first and
then digest with BamHI,
otherwise, your chance of success is very low...That said, I would always
try to avoid this situation...go with
different enzyme cute sites, fusion PCR, homologue based cloning, or blunt
ligation(nowaday very
easy)...For a beginner, I hope to remind one truth: virtually for ... 阅读全帖 |
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y***i
发帖数: 11639 | 27 有可能是construct在细菌内leak expression，而表达的蛋白对细菌有毒，所以克隆
长不大，长大的都是变异克隆
可以尝试的是
1. 降低温度 30度培养
2. 看看板子上有没有很小的clone，挑出来，30度摇
3. 如果clone数不多，pcr check（只需要挑一点菌在pcr里沾一下）
4. 还不行尝试换其他菌种。
我也有一次怎么克隆都出不来，气得发疯。后来发现我是第一次遇到了蛋白毒性问题。
80bp |
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c*******n
发帖数: 218 | 28 说句实话， 我觉得你老板不是东西，象这种技术活做不出来，不过是时间和经验的问
题，可以臭骂你一顿，然后帮帮你或找个人帮帮你看看问题出在哪里不就结了吗。立马
赶人，一点余地不留，真不是东西。别信你SB师兄的，你老板不是什么好鸟。
80bp |
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g***l
发帖数: 3142 | 29 塞翁失马，焉知非福
趁机跳出生物火坑，说不定将来你还要感谢你的奴隶主老板帮你下决心。
80bp |
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k******t
发帖数: 1498 | 30 克隆的事情就不好意思说了。
实验室rotation的学生两月内50+克隆干的风生水起。
不妨试试in fusion。那小子都是批量制造，从未fail的说。
80bp |
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n********k
发帖数: 2818 | 31 仅有几
个克隆，送过去测序，要做的8个构建株里面只有一个对的，其他基本上都是在Bgl2那
一段的引物地方要么有突变要么就是缺失。
well, could you start with these wrong ones now and just do some mutagenesis
, like you did with dpn1 ones...it would be much easier if it were due to
digestion/ligation etc...but it won't solve the problem if your fragments
are toxic or have too many repeats etc...It is a bit strange that it only
happen to your primer region in all the constructions though...if it is
toxic or due to recombination, it could happen to any regions or... 阅读全帖 |
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Z******5
发帖数: 435 | 32 我在网上查到一些办法，比如cold PCR富集啥的。
自己试过构建野生型和突变型质粒，然后按照1:1000到1:100梯度稀释，用sybgreen扩
增检测Tm值，然后做标准曲线。 扩增片段80bp，要检测的位点在中间。 发现A到G的突
变Tm值升高了0.5度。G到T的突变Tm值没变化。 然后用梯度稀释的比例值与Tm值做回归
，能得到R方0.95的回归曲线。但是如果加上bar值，各组Tm之间其实根本没有统计差别
。同时又由于用的是ABI7500，又是不饱和染料sybgreen，分辨率也就0.5度，这个方法
也就作罢。
后来尝试在突变位点附件做定点突变PCR，制造出酶切位点（野生型能切，突变型不能
切），结果神奇的发现药物处理第二代后，细胞中积累的突变就有50%至高了，完全不
想一开始自己想象的千分之一、万分之一。 |
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r*****t
发帖数: 4793 | 33 我想看几个miRNA的表达
手头有RT的产物，用的是random hexamer为引物做的
我一般做qPCR时扩增80bp的片段
用这样的条件可以对一般的miRNA或miRNA前提进行检测么？
谢谢！ |
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