v********a
发帖数: 646 | 1 请问，absorbance of 1 unit at 260 nm corresponds to 40 μg of RNA per ml (
A260 =1= 40 μg/ml).
这个算式，是怎么得来的？
能不能给出原始的计算方法？
谢谢！ |
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s******y
发帖数: 220 | 2 已经用nanodrop check 了， A260/280 是2.11， A260/230 是2.32
查了一下，A260/280对DNA是1.8， RNA是2.0， 是不是表示我的sample是OK呢？
有没有什么别的方法能快速验证一下，下游是要去做RNA seq的，谢谢！ |
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v***a
发帖数: 1242 | 3 谢谢！
我的蛋白没有tag，就是用抗此蛋白激酶的抗体看表达。这个蛋白本身在basal level下
用抗体看WB都蛮清楚的，看不出来差异会和此有关吗？
重新测序全对（除去终止子最后一个未得到confirm），质粒的纯度还行，A260/A280是
1.746，A260是0.365 AU。
提高转化效率有哪些方法呢？ |
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d****i
发帖数: 2346 | 5 今天用Attractene转染plasmid，先加plasmid到optim medium，然后加Attractene，然
后去vortex和spin down。发现管底部有白色沉淀。用手指弹了弹管子，白色沉淀慢慢
消失了。
plasmid浓度为1ug/uL. A260/280=1.9, A260/230=2.3. 溶解在10mM Tris-Cl里面，离
心无沉淀。
Attractene是2015年1月买的。单独加Attractene到optim里面离心无沉淀。
那么那个白色沉淀到底是什么？ |
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c*********d
发帖数: 9770 | 6 荒猫牛不耕微信号laoniu003005
功能介绍
好文分享
来源：荒猫之舞
作者：荒猫
中美贸易战告一段落，毫不意外地，咱们又赢了。不过与以往不同的是，这次美国也赢
了，是双赢。据报道，咱们答应了美国减少贸易逆差的要求，所以美国赢了；而因为要
减少贸易逆差，中方将大量增加自美购买商品和服务，这样可以满足咱们不断增长的消
费需求和促进高质量经济发展，所以咱们也赢了。
但让我感觉不可思议的是，这么好的事情，为什么一直不做呢？为什么要在美国政府的
逼迫下去做呢？是因为没有想到？那岂不是说那些人能力低下？是因为想到了而不做，
那岂不是证明了那些人很坏？
而且在美国高调启动贸易战之初，咱们是抱着多大的决心，宁为玉碎不为瓦全，一定要
打赢的，一定要粉碎美国人阻挡咱们大国崛起的阴谋的。当美国提出500亿的清单时，
咱们针锋相对；当美国提出1000亿的清单时，咱们继续应战；而当美国把清单的总价提
高到2000亿的时候，一夜之间，美国就不是阻挡咱们大国崛起，而是有利于咱们大国崛
起了。美国的要求原来是有利于咱们的发展，而不是遏制咱们的发展了。我恍然大悟：
原来以前的针锋相对，是用的激将法，是为了刺激美... 阅读全帖 |
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t**********3
发帖数: 12623 | 7 2.0T
211 hp @ 5,500 rpm
258 ft-lb @1,200-4,000 rpm
7G-Tronic DCT
据说定价与GTI持平 |
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M*****e
发帖数: 4550 | 8 美国不卖吧？不过定价跟gti持平，那真是对vw不小的打击，毕竟国内b比v的牌子响太
多了，v由于当年捷达被买来当出租，大家绝不会把v当成什么高档车 |
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t**********3
发帖数: 12623 | 9 奔驰销量刚够宝马的一半，后两个季度就指望A和CLA来冲冲销量了 |
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M*****e
发帖数: 4550 | 10 这款车美国卖？
还有电哥，现在3系都要出320了，为啥c系不出个c180或者c230之类的，把价钱降降？A
系觉着好小，坐进去憋屈 |
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t**********3
发帖数: 12623 | 11 美国早晚要买，我觉得最别扭的是中控那个屏幕，好像after market装上去的，CLA也
那个德行
320就是328的低调校版本吧，宝马比较地道，除了ECU和内饰配置其他都一样，回来一
刷ECU就变328
而奔驰的低调校版本C180就比较恶心，ECU是硬件锁死的，只能外挂，外挂又不可靠效
果也不好
？A |
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M*****e
发帖数: 4550 | 12 180美国也买不到啊
屌丝就想买个便宜的又不要太小的，你说cla便宜是便宜可实在太小了 |
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y*********e
发帖数: 576 | 14 这个我搜到的说法都是不能刷328的ECU，因为传动部分用的不一样的元件，倒是可以刷
个323听说 |
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s********a
发帖数: 1680 | 16 A系B系 原本都是主妇主夫的买菜车，现在看来是受日系各种hatchback刺激太大了 奋
起直追了
外形没话说 要是美国引进我也打算上 那个lcd位置确实太别扭了 |
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t**********3
发帖数: 12623 | 17 没有开过BMW的总对Ultimate Driving Machine有种fantasy，就像美国傻逼白左没经历
过社会主义和计划经济就觉得各种好。
BMW侧重操控的设计有两个条件：
1. 牺牲舒适性和驾乘体验平衡
2. 老款的液压助力转向
现在，宝马为了提升乘坐舒适度和加大车内空间，已经在侧重操控做了很大妥协，后来
也全面放弃了液压助力转向的设计。
可以说现在的宝马就是全线买菜车。
给追求驾驶乐趣的人保留的选项是M Sport Pkg和Dynamic Handling Pkg (Active
Steering)，这两个加起来大概一万多美元了。
操控性是个主观的东西，但BMW轮们喜欢把方向硬悬挂硬开着累视作操控好。电哥认为
，操控好是一个综合体验，驾驶乐趣不是单方面因素和数据决定的。就这个驾驶乐趣的
体验而言，电哥开过很多不同的车，来说说这个体验的比较。
A3 Quattro/Golf R > 128i > A260/A200
ATS (with MRC) > C300 > A4 Quattro > 328i
CTS (with MRC) > A6 Quattro > E260 Spor... 阅读全帖 |
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M****e
发帖数: 70 | 21 make sure that you are aware of the buffer effect:
It is estimated that DNA has 15% lower absorbance in TE
buffer, 23% lower in TE+saline compared to water.
1 O.D.260 are 38, 45 and 50 ug/ml for DNA in ddH2O,
TE and TES, respectively. I assume the same for RNA,
and 1 O.D.260 are 40 ug/ml for RNA in TE (from Ambion).
btw, A260/A280 is different for pure RNA
DEPC'd H2O (pH5-6) 1.60
Nuclease free H2O (pH6-7) 1.85
TE (pH8.0) 2.14 |
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w*c
发帖数: 875 | 22 Thanks a lot!
我决定用kalb et al. (1977)的方法,用A230和A260估测蛋白浓度,这种方法基本上对蛋
白本身的氨基酸组成不要求.
反正ferredoxin这个蛋白无论怎么样也测不准,估计reviewer也不会说什么.
OD230
浓度！！）
就足够了。(Bradford 曲线对于不同的标准蛋白也有不小差别的） |
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w******e
发帖数: 1187 | 23 有没有遇到过过后即使做了etoh precipitation，OD curve还是不正常的情况？
我遇到过好几次A260 peak shift到 270了，对下游的实验ms也有影响。 |
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s********2
发帖数: 138 | 24 嗯,oldmonster 批评的是，我总觉得自己现在的表达水平骤降。我用的是BigDye
teminator cycle sequencing kit进行测序。试剂盒里面自带一个质粒和引物，作为
control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所以用量大）。我用
的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也是1.7-2.0。产物
和引物的比例是50ng：3.2pmol。进行cycle 标记，进行了25个循环。然后将标记后的
产物用Ethanol/EDTA 进行纯化。结果是：control出来结果很好，而自己的产物却只有
在很前面的地方有很高的几个峰，根本不是产物。所以我怀疑我的产物根本没有标记上
？不知道这样是不是还是不够详细。希望大家能够帮帮我！ |
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s********2
发帖数: 138 | 25 这个就是我得到的两个结果。sample就是自己的样品，另外一个是control。希望大家
能够帮帮我！谢谢了。
质粒和引物，作为control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所
以用量大）。我用的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也
是1.7-2.0。产物
产物纯化试剂盒，利用了专门用于测序的那种纯化试剂盒。第二，我尝试着用了DNA浓
度梯度。但是出来的结果都是一样的。只是在最前面有几个峰。我真是不知道到底是哪
里出问题了。希望大家能够帮我分析一下。 |
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k*******s
发帖数: 214 | 26 这是sequencing PCR reaction根本没有开始，有几个可能
1. 你的引物的Tm太低，在同样退火温度下，引物没有结合好。
2. 模板的溶度太低。
3. 模板样品里面有抑制PCR反应的物质，比如EDTA
另外BigDye很稳定，自带的对照肯定能做出来，因为样品最纯的，引物M13也是最常用
的，本身做这个对照没有意义。
质粒和引物，作为control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所
以用量大）。我用的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也
是1.7-2.0。产物
产物纯化试剂盒，利用了专门用于测序的那种纯化试剂盒。第二，我尝试着用了DNA浓
度梯度。但是出来的结果都是一样的。只是在最前面有几个峰。我真是不知道到底是哪
里出问题了。希望大家能够帮我分析一下。注： 后面有结果图片。 |
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w******y
发帖数: 2504 | 27 新手作RT，遇到如下几个问题，还请大家不吝赐教：
1.用的小鼠的心脏组织提的RNA；
2.提的时候A260/A280的值在1.5左右；
3.纯化之后，这个值只有1.00甚至更低；
4.跑了RT之后发现，趋势和别人报道的相反；
5.引物还是很特异的。
想请教一下，这个纯化怎么越纯越低呢；还有纯化会否是我后面不理想的结果的原因呢？
谢谢 |
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S******e
发帖数: 393 | 28 当时我转的蛋白较大，检测tag可以看到表达，但用蛋白本身抗体检测就看不大出来差
异，说明表达量还不够高。
MCS后一般有stop condon, 所以你的stop condon 没测出来应该没大问题。
我做transfection的质粒一般A260/280 是大于等于1.9， Qiagen kit prep.
plasmid浓度最好1ug/ul 以上。
我觉得你看不到差异的原因很可能是表达量还不够，但你没有tag也没法检测它是否已
表达，你把效率提上去再检测看看，我觉得还是很有希望。
提高转化效率也是我一直的问题，但我估计我转的质粒比你大，我前几天在这问过这个
问题。 你先用脂质体方法试两次，LTX或lip2000, 若还不行，建议你再try电转，据说
效率高出很多。 |
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b***g
发帖数: 516 | 29 请问大家都是用什么方法来从组织从提取DNA的？我想用illumina的系统做，老鼠的low
density panel，请问一般的kit提的DNA（比如QIAGEN的DNeasy Blood&Tissue) 够纯
不？纯度是不是A260/A280>1.8就够了？大概需要多少量的DNA够呢？
求大侠赐教，谢谢了！ |
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s******a
发帖数: 472 | 30 I am wondering why my two DNA pellet have different colors, one is white and
the other is yellow. There is paper describing different colors due to
extraction methods, ranging from transparent, white, yellow to brown. And
this does not correspond to A260/A280 ratio.
However, my two samples were extracted by one method, I have a feeling that
this might correlate with size of pellet. Any idea? |
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c*****n
发帖数: 233 | 31 yield非常低(5oug/ml)怎么办？
A260/A280 在1.5-2.0之间。mRNA用DEPC treated water稀释过。 |
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c*****g
发帖数: 66 | 32 how about the ratio of A260 and A280?
DNA contamination biases the ratio towards 1.8.
DNA |
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j****t
发帖数: 1663 | 33 DNAse treatment试了吗？
另外，A260/280 的读数2.11挺正常的。 |
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z*f
发帖数: 27 | 35 From Wiki:
Using the Beer-Lambert Law it is possible to relate the amount of light
absorbed to the concentration of the absorbing molecule. At a wavelength of
260 nm, the average extinction coefficient for double-stranded DNA is 0.020
(μg/ml)−1 cm−1, for single-stranded DNA it is 0.027 (μg/ml)&#
8722;1 cm−1, for single-stranded RNA it is 0.025 (μg/ml)−1 cm&#
8722;1 and for short single-stranded oligonucleotides it is dependent on the
length and base composition. Thus, an ... 阅读全帖 |
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y***g
发帖数: 1375 | 37 转篇有意思的文章：
最近哥们买了一台BRZ，于是，整个世界都变了……
他天天神叨叨的嘴里只有一句话：切2档7300，干他!
以下是他的评测：
对于BRZ的评测大家也许已经看腻了，UP主现在就要以自己的方式来评测这款车。
路上看到一辆GTI 切2档7300 干他
路上看到一辆劳恩斯酷派 切2档 7300干他 有点慌
路上看到一辆高尔夫R 切回自动遵纪守法
路上看到一辆极光 切2档7300干他
路上看到一辆飞思 切2档7300干他 有点慌
路上看到一辆速腾GLI 切2档7300干他
路上看到一辆法拉利458 停下靠边抽烟 看看他走了没有
路上看到一辆总裁 想一想听听声音 恩不错是V6的 切2档7300干他
路上又看到一辆总裁 想一想听声音 恩不错是V6切---等等是V8的 看到边上一辆出租车
切2档7300干他
路上看到一辆STI SAY HIIIIII
路上看到一辆 Z4 靠到边上 恩不错20I 切到2档7300干他
路上看到一辆 SLK 看看屁股 恩不错 不是AMG 切到2档7300干他
路上看到一辆保时捷CAYMAN 想一想还是算了
路上看到一辆保时捷BOX... 阅读全帖 |
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