t******n
发帖数: 33 | 1 一个荧光（Alexa Fluor 488）标记的antagonist可以抑制细胞表面的分子信号通路，
IC50在100～200nM。但是用这个AF488标记的antagonist染色target高表达的细胞系，
在flow cytometry上面看不见那个波峰向右边移动，请问大侠可能的原因是什么？谢谢
！ |
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b*****l
发帖数: 9499 | 2 我估计你用的是激光。对于一般的灯，excitation wave lenth 也是一个分布，也就是
说，光源不是单色的。
AF488 被 label 成 FITC channel 啊。一个 channel 被 label 成 FITC，是说用来看
FITC 的，这个应该是业界标准。AF488 就是按照 FITC 的标准设计的。
同意你说的 label 成颜色是不对的。
贴个 cube 的图片，你可以看到 cube 上 label 成 FITC 的的确是用来看 FITC 的。
TRITC,
blue","
most
because
最短
明 |
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s******c
发帖数: 331 | 4 如果你确定你的小分子结合你想看的target，那么最大的可能是dissociation太快。小
分子和抗体的结合动力学有时候会差很多，描述小分子作用方式的不能仅仅用affinity
或IC50，小分子哪怕affinity在single digit nM range，可能dissociation都是秒级
的，这样在FACS里当然看不到。 |
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t******n
发帖数: 33 | 5 谢谢回复！ＡＦ４８８标记应该work，高浓度的时候能看见非特异的结合。
请问seraphzc，有什么办法可以解决这个off rate太快的问题？我试了Ｆormaldehyde
fix，对小分子好像不起作用，还有啥其他得可能方法吗？
非常感谢！
affinity |
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