j****x
发帖数: 1704 | 1 HBV X protein (regulatory protein) and HBsAg (HBV Surface protein/antigen)，
two distinct proteins with different functions. |
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f******e
发帖数: 921 | 2 请问HBxAg (Hepatitis B virus x antigen) and HBx protein are same thing or
not? thanks! |
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s****9
发帖数: 932 | 3 For an 50KD protein, there is no reason to keep GST. For some peptide
antigen (e.g. 50 peptides), you might consider keep GST in order to amply
the antibody responses.
For removing 20KD protein from 50KD proteins, the first portion I would
consider is 25KD-30KD dialysis.
和其他蛋白分开，进一步纯化？ |
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t********8
发帖数: 24 | 4 I have been in this field for more than 10 years. They are using a strategy
called "genetically modification of T cells with chimeric antigen receptors
(CAR)". The strategy has been around for >20 years. There are many on-going
clinical trials. Carl June is using "T body" to modified T cells for tumor
treatment. T body is basically a tumor-targeting single chain antibody (scFv
) with transmembrane and signaling domains for activation of T cells. When
transduced into T cells, it allows T cells to... 阅读全帖 |
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d*p
发帖数: 534 | 5 First of all, 6 month extention is a big deal at advanced stage of prostate
tumor.They are testing the therapeutic effect at earlier stage. better
response is ecpected.
By the way, tumor antigen vaccine is different from cell adoptive transfer. |
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d*p
发帖数: 534 | 6 个人观点：tumor hypoxia对T cell不会有直接的副作用，因为lymph node本身就是
high hypoxia。但是会有间接，比如影响cytokine, chemokine 的分泌等。
这里面的机制很多，
TGFb，IL10这类抑制性cytokine,
recruitment and development of Regulator T cell, Myloid derived suppressive
cell, immature DC, suppressive stroma etc.
Lost MHC expression.
总之机制很多，很复杂，不同的肿瘤又有不同的主要方式。
免疫治疗就是三个问题：
1.Immune cell dysfunction, lost the battle against cancer;
2.Cancer cell immune escape, lost tumor antigen.
3.Side effect: auto-immune, cytokine storm etc. |
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i*****g
发帖数: 11893 | 7 是，我也希望未来能搞清楚一些，这些tumor specific antigen
不过我很怀疑
就是这个CD19，其实也是非特异的，它清理了全部B； 我认为其实只有少数B clone疯
狂长出来
大。 |
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d*p
发帖数: 534 | 8 这就是高通量的优势了，先找出关键通路，再一个通路用一个分子，疗效就上来了。
肿瘤抗原分集中，一般叫做tumor associated antigen.
1 突变产生的不同蛋白，这个最好，但是数量太少，
2 不同发育时期表达，比如只在胚胎表达，这类也很好，数量也少，
3 只在免疫细胞达不到的组织表达，数量同样很少
4 肿瘤高表达，这类很多，有auto-immune风险。 |
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c***o
发帖数: 35 | 9 模式生物里的突变不受你说的的那个1和n的问题限制
现在不是有HBV的antigen和GFP嘛，既然preS可以被直接饱吞，不用infection也能做
screen
完了，透露太多，信息熵变，2010-2011的历史被改写了。。。
了上 |
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c***o
发帖数: 35 | 10 模式生物里的突变不受你说的的那个1和n的问题限制
现在不是有HBV的antigen和GFP嘛，既然preS可以被直接饱吞，不用infection也能做
screen
完了，透露太多，信息熵变，2010-2011的历史被改写了。。。
了上 |
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y******8
发帖数: 1764 | 11 Anything extracellular is a potential antigen. Pure pSer antibody in the
animal would develop autoimmune diseases.
So, the pSer antibodies on market are not agaist pure pSer, and are always
context dependent.
If you have a clear target protein, just develop a site specific antibody.
Other wise, p32 is not bad to try since majority of phospho signal comes
from pSer.
are
some
to
with
ourselves
specific |
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j*****d
发帖数: 787 | 12 //地地道道的理想主义者
而且他这篇文章不知道要得罪多少体制内 有共产党头衔的 红色科学家
http://blog.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=2237
共产党员 精选
已有 8220 次阅读 2011-6-28 09:01 |系统分类:观点评述|关键词:剑桥大学 共产党员
诺贝尔奖 科学家
加入执政党的党员，原因不易单一化地叙述。
加入还在奋斗期间的党、或永远不能执政的党，其党员绝大多数是为了理念。
英国共产党（1920-1991）恐怕从来没有执政的机会。英共党员多彩多姿，如结构生物
学先驱（被人称Sage/智者的）JD Bernal（他的学生诺贝尔奖得主Hodgkin不是党员，
但她丈夫曾是）、著名遗传学家JBS Haldane、进化论学者John Maynard Smith，其中
不乏有剑桥大学、牛津大学的教授。他们入党，对自己的学术生涯有影响，可以说基本
是负面的。最简单的是，号称无政治歧视的美国，禁止共产党员入境，无论党员是英国
剑桥大学教授、是世界著名科学家、还是是美国需要征求特定领域意见的皇家学会会员
，都被这样对待。
英国著... 阅读全帖 |
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l*****4
发帖数: 267 | 13 别只说antibody
也说说
其他可行的antigen retrieval 方法 |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 antigen retrieval 没有用的，因为估计根本就没有多少表达量。
因为有一次我们生气了，就把组织提出来做WB, 结果只看到了痕量的带。
估计组织上不喜欢GFP. 但是组织貌似对YFP没有问题。
不要问我为什么，我不能代表组织。 |
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h**********8
发帖数: 650 | 15 深有同感，sgu2000 demoner的贴子大家都该好好看看。
我觉得很多人其实是对未来迷茫，不知道自己在哪里，也不知道自己将往哪里去，所以
就变成了混日子，混毕业，混postdog, 混吃等死一辈子。对科研没有了激情，对人生
也把握不住方向，呵呵，娱乐八卦的成分就多了。
话说回来，前几天细胞治疗的那个，antigen cd19还是狠有些讨论的，学术贴子少，是
否和科研的惨淡有关？
少，大多数时间大家都在八卦。
好看看。 |
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a****l
发帖数: 125 | 16 请问诸位大侠如何immortalize MEFs? 本人试了一次3T3 protocol (3x105 cells 每3
天传一次）. 传了几代后细胞就不长了。不知怎么回事。有人试过large T antigen 吗？
多谢 |
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m*p
发帖数: 226 | 17 Only 1-2% of the total IgG in the supernatant are the ones that can react
with your antigen (I can not remember where I read it). |
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b*****e
发帖数: 288 | 18 只要对研究有一点点贡献，只要各方都认同，那么就可以是作者。
下面这篇文章太夸张了，其中G Mirkwood是第一作者P Matzinger养的一条小狗。
也许是因为作者觉得她的狗陪伴有功，就也给列成作者了。
Published July 1, 1978 JEM vol. 148 no. 1 84-92
In a fully H-2 incompatible chimera, T cells of donor origin can respond to
minor histocompatibility antigens in association with either donor or host H
-2 type.
P Matzinger and G Mirkwood |
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S*****3
发帖数: 720 | 19 “中国百篇最具影响优秀国际学术论文” 评选所选论文代表了我国科技论文发展的最
高水平。论文源为前一年被SCI（科学引文索引）收录的中国论文。评选综合考虑发表
论文的期刊水平（影响因子和单篇引用次数）、论文类型、热点论文、论文的合作强度
、参考文献数和论文的完整性等方面。
其中生物类包括：
论文题目: Acute promyelocytic leukemia: from highly fatal to highly
curable
论文作者: Wang, Zhen-Yi; Chen, Zhu
所属机构: 上海交通大学医学院瑞金医院
来源期刊: BLOOD, 2008, 111(5):2505-2515
被引次数: 29
作者简介：
陈竺
卫生部部长，中国科学院院士，博士生导师
白血病系统生物学研究组组长
论文题目: Sorting of small RNAs into Arabidopsis argonaute complexes
is directed by the 5 ' terminal nucleotide
论... 阅读全帖 |
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L*****o
发帖数: 48 | 20 I myself never tried COUP-TFII antibody, just read about it from papers.
However, about EphrinB2/4 staining, you can try tyramide signaling amplification followed by antigen retrieval.
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z****u
发帖数: 1007 | 21 多谢楼上各位意见。 我可能会尝试COUP-TFII。因为samople是H2B-GFP表达老鼠，需要
GFP+arteriole marker. ephrinB2 staining如果过太复杂或者涉及antigen retrieval
,GFP可能会受影响。
另外我找到一个smoothelin 文献说特异表达在arteriole的SMC里，而不在venule的SMC
.
形态学上动脉和静脉还是很好区分的。但是我想最好还是用多个marker以及形态学一起
来验证我的GFP-expressing cell的位置。所以才在寻找这些marker |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 Sugary' Mutation May Have Led to Humans' Rise
http://www.livescience.com/16480-mutation-led-humans-rise.html
摘要：
动物细胞表面的糖分子的结构通常会介导免疫反应，也常常被细胞寄生虫利用
来感染细胞。
古代非洲猿猴细胞表面的一个糖分子Neu5Gc 会被当地品种的malaria 利用来
感染细胞。在一个突变过程中，有一部分古猿开始表达不同结构的糖分子Neu5Ac
从而获得了减少感染的机会并在进化上出现一定优势。但是同时，这部分古猿因为这个糖分子的结构不同，由于免疫反应原因就和仍然表达这个糖分子的其他个体发生生殖隔离。
于是，这部分古猿就因此成为了一个独立的分支，只能内交不能外交，
这些古猿的后代后来就成为了人类的祖先。
（支持数据：人类不表达Neu5Gc，并对那个特定品种的malaria感染性不高；人类抗体
会杀灭猿的精子）。
Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Oct 10. [Epub ahead of print]
Sexual selection ... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 23 A lot of antibodies for phos-"whatever protein" is generated from phos-
peptide as antigen, and the resulting antibody only recognize the phos-
peptide on the protein. It will also recognize the phos-peptide; therefore,
you can block the antibody binding using the peptide as competitive control
. You probably can do an ELISA if you want to see if the phos-peptide is
there or not. Btw, there are antibodies can even recognize a single
phosphorylated amino acid. Just go to any commercial antibo... 阅读全帖 |
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e***o
发帖数: 344 | 24 HEK293T expresses SV40 large T antigen, amplifying transfected circular
plasmids harboring SV40 replication origin. |
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e***o
发帖数: 344 | 25 但是这家伙（SV40 large T antigen）经常诱发cancer， 不知道能不能在neuron里用
。哎。。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 26 我们有一个蛋白，没有连GFP的时候很容易被一个抗体识别（肯定是特异信号，
因为有纯化蛋白，WT and KO control有非常好的识别），但是连上GFP之后就
没有识别了！换了另外一个抗体，也是一样结果！
大家遇到过这种情况么？我们的初步判断是这个GFP 因为有内部共价键，
所以不能被SDS完全变性，所以可能一大团东西摆在那里挡住了抗原位置。
这个该怎么处理？如果要做antigen retrieval怎么搞？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 27 我们有一个蛋白，没有连GFP的时候很容易被一个抗体识别（肯定是特异信号，
因为有纯化蛋白，WT and KO control有非常好的识别），但是连上GFP之后就
没有识别了！换了另外一个抗体，也是一样结果！
大家遇到过这种情况么？我们的初步判断是这个GFP 因为有内部共价键，
所以不能被SDS完全变性，所以可能一大团东西摆在那里挡住了抗原位置。
这个该怎么处理？如果要做antigen retrieval怎么搞？ |
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v*****s
发帖数: 20290 | 28 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: mutouhui (mutouhui), 信区: Joke
标 题: Re: 麻省科学家发现病毒克星“天龙”
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Nov 13 19:08:54 2011, 美东)
http://web.mit.edu/press/2011/antiviral.html
New drug could cure nearly any viral infection
Researchers at MIT’s Lincoln Lab have developed technology that may someday
cure the common cold, influenza and other ailments.
CAMBRIDGE, Mass. — Most bacterial infections can be treated with
antibiotics such as penicillin, discovered decades ago. However, such drugs
are useless... 阅读全帖 |
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w****s
发帖数: 235 | 29 I'm having a problem to yield sufficient antibody (rab polyclonal)from
the
1st serum bleed (~6ml serum).. 总共得到了100 ug.. but based on the ELISA,
the antibody
tilter is pretty high ~100k; my intuition is that I should get much
more. so I guess either I did not X- link well
the
peptide/antigen( should check with MS though) or simply low yield is
expected for 1st bleed?
有谁做过/有经验么？ 谢谢。 |
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S***a
发帖数: 257 | 30 To fatsheep:
You gave a nice comment. I have the same question here.
If LZ suspect the phenotype is from Asc-/-Dock2-/- compound mutant mice,
then it explained why DOCK2 re-induction can rescue the ASC-/- (Asc-/-Dock2-
/- actually) phenotype.
If LZ have already get pure B6 background Asc-/- mice, then did you check
the phenotype of antigen presentation and DC migration? Does LZ's current
Asc-/- BMDCs have the same phenotype as NI paper reported? If LZ also see
the phenotype consistent with the N... 阅读全帖 |
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D*******8
发帖数: 4 | 31 The NI paper reported that Asc-/- mice phenocopies Dock2-/- mice.
They concluded that Asc regulated Dock2 expression through controlling Dock2
mRNA stability.
They failed to provide Asc complementation experimental data which is
considered critical in a genetic approach.
We have the same mouse strain, but back crossed to B6 for couple more times.
We found that Asc-/- mice are no longer deficient for Dock2 and the defect
in lymphocyte migration and antigen presentation is gone in our mouse strain... 阅读全帖 |
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D*******8
发帖数: 4 | 32 To Sonma,
To answer your question:
Yes we did the same experiment, since the Asc-/- mice we have are sufficient
for Dock2, so there is no defect in lymphocyte migration or antigen
presentation in these mice. We have communicated with the authors already,
they have all the data we have and I would hope that the senior author will
do the right thing out of conscience. |
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b*******l
发帖数: 217 | 33 如题所述，请有关人士给予指教。本人在公共卫生领域，看文献时遇到这个表述，不甚
明白。或者，这句话如果翻译成汉语应该是怎样的？非常感谢！ |
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T****O
发帖数: 407 | 35 1. Polyclonal Abs would be less specific to Ac-K9. Hypothetically, an Ab
could grab AA4-AA8 regardless antigens have Ac-K9 and Ac-K12 or not.
To get Ac-site-specific Abs you'll have to make them, affinity-purify and
confirm them with those peptides. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 36 carbohydrate tumor antigen CA19-9
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21912743 |
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P****o
发帖数: 172 | 37 i did not buy alas2. it is another one, for neutrophil antigen. |
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c********r
发帖数: 189 | 38 用的是Bethyl的抗体，做co-IP,研究的蛋白A主要bind到chromatin上。
用bethyl的方法做的cell lysis, 然后co-IP，work。但是我发现，他们的lysis
buffer太mild，A蛋白主要还是留着pellet中。所以IP下来的只是一小部分，可能是
在cytoplasmic里的A蛋白
于是同时用nuclear extract来做co-IP，input里有很多A蛋白，但是co-IP不work，A蛋白没有pull down下来
所以问题是，为啥同一个antibody，可以pull down cyto fraction里的蛋白A,而不可以pull down nuclear内的蛋白A？
我的解释是，在nuclear extract里，A跟很多蛋白结合，于是antigen被mask了。。。
不知道还有没有别的解释
谢谢各位了 |
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c********r
发帖数: 189 | 39 用的是Bethyl的抗体，做co-IP,研究的蛋白A主要bind到chromatin上。
用bethyl的方法做的cell lysis, 然后co-IP，work。但是我发现，他们的lysis
buffer太mild，A蛋白主要还是留着pellet中。所以IP下来的只是一小部分，可能是
在cytoplasmic里的A蛋白
于是同时用nuclear extract来做co-IP，input里有很多A蛋白，但是co-IP不work，A蛋白没有pull down下来
所以问题是，为啥同一个antibody，可以pull down cyto fraction里的蛋白A,而不可以pull down nuclear内的蛋白A？
我的解释是，在nuclear extract里，A跟很多蛋白结合，于是antigen被mask了。。。
不知道还有没有别的解释
谢谢各位了 |
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g***y
发帖数: 201 | 40 CaM Kinase II alpha subunit (AB-1)，mouse monoclonal, from calbiochem, cat#
NB12
works on 4%PFA fixed paraffin section, need citrate buffer antigen retrieval
though, dilution 1:200-1:500
also works on crysection.
爱卿免跪平身，千万别忘了给我几个包子！ |
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s*****i
发帖数: 315 | 41 HEK293 是人胚肾细胞，应该是间质细胞或是上皮细胞来源的永生化细胞系
293T是经过largeT antigen transform的 HEK293 细胞系 |
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z****u
发帖数: 1007 | 42 Jeff Bush啊 我想标记效率肯定和部位有关。 在我检测的craniofacial region里面都
还不错。 不过确实应该拿多个line做比较，所以现在我们也在找别的line 包括PDGFrb
-Cre 还有Glast1-Cre
我们的NG2-Cre 以及CreERT都是Jax的。
ZsGreen是Allen Institue的Hongkui Zeng建立的，同时她还建立了另外很多个
reporter ，我用过的TdTomato, EYFP, ZsGreen都非常好。
Millipore的NG2 Ab我也在用，感觉不做antigen retrieval染的效果不太好。 |
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i***0
发帖数: 160 | 43 HI,I have a question about Western Blot. We have immunized rabbit and
obtained polyclonal antibody. using the purified antibody from rabbit serum,
we could see specific band toward our antigen. However, with ECL
luminescence, I always have a dirty background, with dots and cloudy smear
that make the image so ugly and not publishable. Do you have any suggestions
? I appreciate a lot for your help! |
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Q**********r
发帖数: 214 | 44 J Biomol Screen. 2010 Aug;15(7):830-9. Epub 2010 Jul 16.
Knockdown of cancer testis antigens modulates neural stem cell marker
expression in glioblastoma tumor stem cells.
please send to a*************[email protected]
不胜感激! |
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g***y
发帖数: 201 | 45 MAP2 from sigma, mouse monoclonal, #M9942
We use it on mouse brain sections all the time.
For paraffin section, it requires antigen retrieval step (microwaving in pH6
.0 10mM citrate buffer).
For IHC on crysections, no AR is required. |
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i*******n
发帖数: 48 | 47 姑且定义bait是membrane protein A， Prey是cytosol protein B
多种可能性
1.假阳性
2.细胞内蛋白B比较abundant,而膜蛋白A比较少。
如果是这种情况，跑western的时候减少input的量，增加IP的量，也许能看到。
3.prey蛋白B抗体识别的antigen region可能是bait A的binding region，导致你用
B的抗体IP下来的只能是不结合A的那部分。
如果是这种情况，给B加个tag或者换个抗体试一试。 |
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a****c
发帖数: 339 | 48 我用primary MEF,理论上只用passage 5之前的，根据实际情况有时候p6也能用，有时
候p3看着就完了。
有些实验室用T-antigen 做immortalization。不过我们老板死活不让用，非常郁闷。 |
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n***3
发帖数: 663 | 49 Nat Biotechnol. 2012 Aug 26. doi: 10.1038/nbt.2344. [Epub ahead of print]
Polyethyleneimine is a potent mucosal adjuvant for viral glycoprotein
antigens.
please send the paper to e*********[email protected]
Thanks! |
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s******y
发帖数: 28562 | 50 有啊。
Proc Natl Acad Sci U S A. 1995 Nov 21;92(24):11259-63.
Signal-induced degradation of I kappa B alpha requires site-specific
ubiquitination.
Scherer DC, Brockman JA, Chen Z, Maniatis T, Ballard DW.
Source
The inhibitor protein I kappa B alpha controls the nuclear import of the
transcription factor NF-kappa B. The inhibitory activity of I kappa B alpha
is regulated from the cytoplasmic compartment by signal-induced proteolysis.
Previous studies have shown that signal-dependent phosphorylation ... 阅读全帖 |
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