m*p
发帖数: 226 | 1 They did not say how long they pulse label the heart with BrdU. But, since
their data indicates the percentage
of BrdU positive cells is almost equal to Ki67 percentage, that means the
BrdU labeling time will be more than
24 hours. When you label an E14.5 hearts with Brdu for 24 hours, more than
half of the cardiomyoctyes will be
positive if you know how fast the embryonic cells proliferate in vivo,
however they only found about 20% cells
were positive.
Their Ki67 staining is not the right sta... 阅读全帖 |
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w*********n
发帖数: 439 | 2 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
然后做FACS。
发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
多谢， |
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w*********n
发帖数: 439 | 3 多谢大虾
我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
阳性细胞
如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
有。 |
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y*****o
发帖数: 1011 | 4 刚做了BrdU，用20ug/ml prok消化10min，效果很好。
现在要开始做TUNEL了（同一咱tissue），用的是Roche的in situ cell death detection kit，里面提到15ug/ml proK在25-37度下5-30分钟。
想知道如果知道了brdu中，用20ug/ml prok消化10min可以的话，在TUNEL中也用这个条
件行吗（20ug/ml会不会太harsh）？还是试比如15ug/ml proK 37度下 15-20min？
我觉得20ug/ml prok消化10min 应该可以，不过实验室的人不是很同意，说还是用15ug
/ml.。
新手，请指点一下吧，谢谢！ |
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F*****e
发帖数: 182 | 5 请问BrdU标记是在小鼠出生前注射怀孕母鼠，还是直接注射新生小鼠？BrdU标记的量和
时间是多少？荧光下看得是切片？ |
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w*********n
发帖数: 439 | 6 实验过程如下
1. 怀孕母鼠皮下埋BrdU Pump. 或者 新生鼠腹腔注射BrdU
2。胰酶消化新生鼠心脏，得单细胞悬液
3。FACs染色，一切按BD 的kit说明书进行
请大虾指教 |
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n**********s
发帖数: 228 | 7 3D Matrigel culture of cancer cells,BrdU immunofluorescence
总是得不到好的染色（核染色很少），请问固定后用HCL 处理是最好的方法吗，也看到
有人用Ethanol 固定，不知哪个更好些？另外BrdU incorporation 有的人用3个小时，
有的文献是overnight，从来没试过overnight，不知道对3D culture, 后者是不是更好
些？
烦请有过经验的牛人帮忙解惑一下，不胜感激！！ |
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s********g
发帖数: 20 | 8 Can anyone please share a protocol for staining cell culture? And which
antibody to use?
I've tried several times but the background is very high. I can see staining
even without added BrdU :( |
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y*******3
发帖数: 71 | 9 I used ABD serotec: MCA2060, rat anti brdu.
you need to treat your sample first by 1N HCL followed by 0.1 M boric acid (
pH8.5). |
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F*****e
发帖数: 182 | 10 没做过相关的实验，不过可以考虑使用EdU代替BrdU，效果会好一些，而且实验步骤更
简单。 |
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B******o
发帖数: 496 | 11 你现在既然已经看到有BrdU阳性的细胞。那么只可能是你染色过程中的问题
你又说一切都按BD的kit说明来的，
那唯一的解释就是抗体不好。找BD要不同batch的来试一试
我是你的话，先把各个步骤查一遍，是不是完全和protocol一致。通常都是小疏忽造成的 |
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b*****l
发帖数: 9499 | 12 没看懂。。。是说同一套 kit，镜下没问题，FACS 有问题？两者的 denature 方法一
样么？还是用的不同的 antibody/方法？另外，镜下和 FACS 可以交叉验证的：FACS
染色后可以 mount 到片子上镜下看，而为镜下染色用的 kit 也可以尝试做 FACS 来对
照。还有，这个 brdu-kit 在你手下曾经 work 过么？如果第一次用，是不是先找个类
似的 cell line 做个 in vitro 的 positive control 先？ |
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m*p
发帖数: 226 | 13 That makes sense a lot! In P0-P7 hearts, very few cells proliferate, and
after P7, there is almost no cell
proliferation, unless you damage the heart. However, when you isolate cells
in the culture, the situation will
be different as more cells proliferate.
BrDu |
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b*****l
发帖数: 9499 | 15 是啊是啊。建议 lz 做一个 in vivo positive control，也就是说，用一种一定能够
使心肌细胞 prolif 的方法处理一下，比如说人为造成心肌损伤，然后做 FACS 看看是
否能看到 brdu 信号。
cells |
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w*e
发帖数: 740 | 16 完全可能，因为用PH3只能捕捉到很少一部分增殖的细胞（刚好在很短的M期）
而BRDU可以连续注射，注射次数越多，你标记到进入S期的细胞就越多。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 17 hello,
询问一下大家BrdU一般是从哪里买？Sigma?
那好用的抗体呢？能有直接label的最好。
谢谢！ |
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z****u
发帖数: 1007 | 18 是的， BrdU一定要denature才能染好。HCL处理或者heat antigen retrieval.
具体incubation time得自己琢磨，看不同体系时间肯定不一样。
要是不缺钱就用EdU吧。要好用的多。染色不用denature, 半小时搞定。 |
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g*****n
发帖数: 250 | 19 可能不是染色方法的问题，是细胞分裂太慢。要试试增长brdu处理的时间。
HCL 处理是最好的方法. |
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l*********i
发帖数: 332 | 20 五.抽丝剥茧 中
这个补充数据是标记1周后学习，仅仅隔一天就进行测试，应该是学习最强的了，结果
水迷
宫数据仅仅为25％！而Fig1a第5行，标记8周后，隔1周进行测试，能达到42％。我们可以
想象，如果标记一周后学习，隔一周进行测试，水迷宫数据还会更低！如果把标记1周
后学
习，隔1周进行测试，和标记8周后学习，隔1周进行测试的数据放在一起，我们完全可
以得
出另外一个与本文毫不相关的结论，在一周内注射BrdU造成了某种创伤，显著抑制小鼠水
迷宫任务的学习。
Fig1a第1行的为什么后来还能达到33%呢？因为学习后小鼠休息了9周才进行测试。大脑自
己修复了？
那作者列那最后一个补充数据是想说明什么呢？他们的supp fig7的标题是，一周年龄
的新
生成神经元不能被加入到空间记忆网络中。
将他们的核心观点放到现在说真是搞笑，他们认为，brdU就可以标记新神经元，注射后一
周，这时候你看到的brdU阳性细胞就是一周年龄的神经细胞。在学习水迷宫的时候，大脑
的海马会积极开动，将外界的信息转化为神经信号，并储藏起来。这个过程就可以被c-
fo
s标记，因为神经元在历经这个过程后，神经信号会 |
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f*********6
发帖数: 94 | 21 这个好像不是我想要的，虽然可以用来解决其他问题。我想着的一种方法是creer+
rosa26lacz, tamoxifen 诱导后24小时后，brdu feeding. 那么除了最开始被label上
的是细胞只是蓝色的外，daughter cells 从它们衍生出来的都会有 蓝色＋brdu. 不过
这里有个brdu label efficiency 的问题。
有没有一种东西弄上第一代细胞后不会随着分裂传给下一代？virus? |
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r**********e
发帖数: 587 | 22 很感激。
的确我不知道locus of interest到底是什么damage，我totally外行
我是ChIP data发现这个repeats：
有H3K56ac的enrichment，同时也是BrdU enrichment的地方
BrdU意味着active DNA replication？而H3k56ac也是replication和damage response
相关
所以读了一堆文献，感觉经常看到的就是MMS可以induce DSB所以就先用MMS来下手（说
错了请指正）。敢问内行们，如果你们看到BrdU和H3K56ac这样的marker，会接着怎么
做呢
thx
repair |
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C****o
发帖数: 1549 | 23 通过技术手段将各种细胞逆转回到类似于干细胞状态，应用前景广泛；相关成果已发表
寻找实现“返老还童”的途径，几乎贯穿整个人类历史。当代生物学研究者的实验
室里，这一梦想或将成为现实。
中国科学院广州生物医药与健康研究院（下称中科院广州生物院）研究院裴端卿及
其团队，经过5年时间，研究通过化学方式，诱导细胞回到年轻状态的方法。实验中，
通过制备“魔法药水”，给实验细胞“洗澡”，改变其化学结构，就能控制细胞命运转
变方向。
生物学界认为，裴端卿的研究虽仍在实验阶段，但具有重要的现实意义。目前，相
关研究成果论文已经在国际细胞学核心期刊发表。
裴端卿课题组科研团队合影。本组图片/受访者供图
技术手段逆回至干细胞状态
在中科院广州生物院的研究团队看来，要寻找实现“返老还童”，首先需要明确人
类衰老的原因，以及内在原理。
根据裴端卿的说法，人体所有的细胞，都是由干细胞发育而来。目前的研究认为，
人体的生理性衰老，是由包括干细胞衰退、DNA退化、衰老基因活跃等综合影响的结果。
由于干细胞具有无限增殖和多向分化能力，充满生机和可塑性，在裴端卿团队看来
，干细胞无异于“初生的婴儿”。在此基础上，如果能够... 阅读全帖 |
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b**u
发帖数: 2 | 24 【 以下文字转载自 Money 讨论区 】
发信人: BrdU (BrdU), 信区: Money
标 题: 有包子。急问一个银行帐户的问题。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Feb 2 12:45:16 2010, 美东)
老婆去打工挣来的钱放在她自己的银行帐户上，因为没交税，而且她是F2身份没有社会
安全号，当时开这个银行帐户的时候是用她的中国护照开的，想知道一下，这样把钱放
在银行里会不会被查到，然后扣税或者其他怎么处理呢？谢谢！ |
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l*********i
发帖数: 332 | 25 七.踏上征途
光argue不算本事，人说了，不管怎么说，我做出来了，你说这样做不行，那你说怎么
办？
怎么办呢？不好办，用这种BrdU标记的方法标记的333个新神经元在经过学习记忆任务
后，
撑死也就才16个能表达fos。效率太低！是因为新神经元本身就很难成熟嘛？不是，这
篇文
章也提到BrdU标记的新神经元最后超过90％都能变成成熟的神经元可以被NeuN标记。那么
就是说这个水迷宫的学习任务本身就不能在海马的dentate gyrus内激活很强的神经活
性反
应。在随着作者的思路，企图确定学习活动后，新的神经元和老的神经元，那个更容易发
生反应（“加入空间记忆网络”中去） 之前。让我们回到问题的本源。
说到这，我有一个听上去特土的问题，如果能对学习产生反应的新神经元真是他们记录到
的16个，那么这16个新神经元相对于整个海马DG区能对学习产生反应的7670个神经元，简
直是沧海一粟。这16个新兵对大部队有啥影响？如果没有什么大影响，那我们折腾他们干
什么？
在没有确定新生成的神经元对学习和记忆过程有什么影响之前，研究学习活动可以怎样促
进新神经元
整合到成熟网络中去是一个非常奇怪的问 |
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n***w
发帖数: 2405 | 26 BrdU在水里最多是10mg/ml...然后我用的剂量是100ug/g body weight....
所以得配高浓度的BrdU... 所以就需要用DMSO... |
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l*********i
发帖数: 332 | 27 六.抽丝剥茧 下
从fig1f我们知道，标记后6周，在海马DG区可以留下大概333个被标记的神经元，他们
应该
是标记以及之后才发生细胞分裂而产生的新神经细胞。那么标记6周后，经过学习，他
们中
多少能够对学习诱导的神经活性发生反应呢？从Fig1h中，我们可以看到是4－5％，算
16个
。
好，就是说经过学习，在小鼠海马DG区的总共380000个神经元中，有7670个神经元能对学
习活动发生反应而表达fos，而在学习任务之前的6周之内新产生的333个神经元中，有
16个
可以对学习活动发生反应而表达fos.16/333＝5％>>7670/380000＝2％.所以，新产生的神
经元可以优先的加入到成熟神经元网络中去。
（值得指出的是，所以BrdU阳性的神经元10周后也会表达成熟神经元标记NeuN，而被记入
成熟神经元。见补充图5。）
他们能否自圆其说呢？
在fig1h中，他们画了一条上升的曲线，代表标记后的不同时间进行学习，如果间隔太
短，
新神经元来不及成熟，所以就不能在学习的时候对神经活性产生反应表达fos。所以这
条曲
线当然是上升的，但并不能说明新细胞就优先的产生反应的道理。fi |
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h****g
发帖数: 439 | 29 we use an antibody from roche. Because that antibody is mouse anti-mouse, so
we use MOM kit for staining. It's perfect!
staining |
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f*******e
发帖数: 354 | 30 不知道版上大仙有没有好的方法，冷乙醇处理后的细胞在后续离心中会大量损失，都贴
在壁上，离不下来，越洗越少，在做cycle，flow tunel and brdu labeling 中都有这
个问题，简直到了不可接受的地步。
谢谢啦。 |
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p****l
发帖数: 291 | 31 你可以在培养液里加Brdu吧，过段时间看增殖情况
不过最简单的，数数细胞就好了，多了显然是分裂出来的呀 |
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n********k
发帖数: 2818 | 32 follow a brdu staining protocol may help |
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p****z
发帖数: 31 | 33 最近很是郁闷，做啥都不顺！又碰上一问题，向大家请教。有一个和癌症相关的蛋白，
它的功能最近被发现能促进cell proliferation，这一现象被好几个group报到了并且
在不同的肿瘤细胞中都是相同的作用。他们用的方法都是使用siRNA knock-down这个基
因，然后用MTT assay 或者是thymidine incoporation assay去测cell proliferation
.我为了方便，就用了lentivirus (pLKO.1 based vector, open biosystem)做了
stable cell line,试了两个细胞系，knock-down 效果都不错，从western 上来看，
估计有80%-90%的reduction. 可是一测cell proliferation ,cell proliferation的抑
制效果都不明显，我用了两种方法：promega的MTS assay 和 BrdU incoporation
assay.这到底是怎么回事啊？我看了他们做的方法，最大的差别就是他们是transient
transfection... 阅读全帖 |
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p****z
发帖数: 31 | 34 是啊，这就是我百思不得其解的地方。一开始用promega的MTS assay，怕因为要算细胞
数目导致误差，后来就采用BrdU proliferation assay,结果还是相差不大。当时买的
shRNA sets里面有5个clone,选了一个效果最好的。郁闷啊！ |
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b*****l
发帖数: 9499 | 35 当年俺的 BrdU 突然不 work 了，在这里抱怨，有同学开导俺：research = re-search |
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c****l
发帖数: 1086 | 38 为啥如此做呢？ 看细胞增殖？为啥不直接用DNA燃料，然后根据DNA量sort |
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w*********n
发帖数: 439 | 39 作活体动物的细胞增殖不都是用BD的BrdUkit吗? |
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M*****n
发帖数: 16729 | 40 try EdU.
a bit more expensive, but easier to handle. |
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B******o
发帖数: 496 | 41 也可以用BrdU染色然后计数来看proliferation |
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s**********e
发帖数: 2888 | 44 我还看过一个组发的一系列的cancer research,报道一个分子在各种癌细胞的
proliferation,就是MTT assay做出来的。我就去重复了，atcc新买的细胞，各种浓度
，时间，serum starvation, collagen coating，mtt, brdu,能试的都试了，什么效果
也看不到。
给那个组发信，没有任何回复。给合作小组写信，合作组说他们也什么都没有看到，而
且那个分子理论上应该被cancer research的cell line很快的降解掉，所以应该是什么
效果也看不到。
6
chemical |
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f****y
发帖数: 104 | 45 所谓的tumor suppressor,主要是指gene loss of function的phenotype.
overexpression 不是确定tumor suppressor的好办法.比如,有的tumor suppressors
overexpression 就没有 phenotype.
你可以先siRNA knock down 这个基因,看看细胞增殖有没有增加,如常用的BrdU
labling之类.
此外说不定这个基因tissue specific的tumor suppressor,不一定在所有细胞系里面都
有作用. |
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s**u
发帖数: 9035 | 46 I got from Trevigin, MD state.
But I think anyone is fine, it is quite easy to stain. |
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i*********0
发帖数: 915 | 47 机理方面一样，lrig1 ko 以后，有ISC的proliferation，可能是ErbB pathway
activation， cell paper说的tumor也有理有据。 我说的打擂台是针对lrig1+ cell
的定位和定性方面。 Cell paper说Lrig1+ cell是quiescence ISC， 而NCB说是
cycling和Lgr5+细胞一样。cell的paper说Lrig1+ 细胞在整个cyrpt细胞中比例是2.4%
左右，而0.5%的crypt细胞是Lrig1+ Lgr5+ double positive，这样看来在Lrig1+
single positive细胞中，有25%（0.5% vs 2.4%）左右的细胞也是Lgr5+的，但是cell
paper作者却在文章中说“colocalization of Lrig1 and Lgr5 markers rarely
occurred in the same cell". 在对cycling和quiescence这个stem cell 的状态的描
述上，同样的Brdu chasing的，实验的差别太大了，而且两... 阅读全帖 |
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i*********0
发帖数: 915 | 48 你可以看看他们的brdu chasing实验，两个paper的结果差别可不是一般的大。
我怀疑NCB是用neonatal的mice做的，而在Cell上是成年小鼠做的，不过cell paper的
figure和他们的结论有点察觉。cell paper的lineage tracing做的很sexy，有tumor，
有人的samples，这个也是他们能上cell的一个原因吧。
NCB上的都是一堆真正做ISC， skin SC的牛人，分析简单，统计的东西稍微弱了一点。 |
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b*****o
发帖数: 150 | 49 用brdu PI 分析细胞周期分布
如果看到S期的细胞多了 是不是就是说细胞分裂更快？ |
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P****o
发帖数: 172 | 50 I use pulse-chase of Brdu to show the proliferation rate. |
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