m*********D
发帖数: 1727 | 1 类似的情况下，我们会加BSA（Roche的比较好，也比较贵）。另外，stock solution总
是高浓度一些，要用的时候再dilute。有些protein,还用silanized tube来长齐-70度
保存的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 对，应该配在0.2% BSA/PBS里。
而且楼主配的stock solution浓度也太低了，我们一般至少也要搞个5ug/ul stock.
20ng/ul 太过分的低了 |
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x******3
发帖数: 111 | 3 现在正在做WB 检测GFP-Tagged的目的蛋白的表达，尝试了6种GFP 抗体，发现在人的细
胞中都能够检测到GFP 表达，但是在鼠的细胞中只有ABCAM的AB13970检测到GFP 表达（
但有其他一堆杂带），其他的抗体都能看到一堆bands，唯独没有GFP 的bands，主要是
砸带太多，曝光不能爆太久。
有大神能帮忙介绍一下在小鼠细胞中WB检测GFP 表达的经验吗?
不能用目的蛋白的抗体因为做的目的蛋白的truncated protein。
那个abcam的ab13970是鸡抗体，不知道怎么样去优化？（4%BSA block， 400mA/2hrs
transfer）
非常感谢！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 4 我看到有一篇文章，就是反驳另一篇文章的，原因是BSA是不同公司的，做出来结果就
不一样，一个有一个无，就这么简单。 |
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c****u
发帖数: 584 | 5 NHS ester label BSA 效率应该很高啊。你都有30％了. 会不会是biocore灵敏度低.
或非特异高？
positive |
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n********e
发帖数: 1630 | 6 感觉大家都用NHS label 就是一个反应 就是重复性差 只要有一点蛋白被label了
就可以结合到chip上。。
我现在想找个蛋白做positive control 先把label的问题结决。。BSA label后也一直
load不上去。。。可以我用仪器公司的人提供的label的 carbonic anhydrase
loading 非常好。。所以我怀疑还是label发生了变化。 |
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r******k
发帖数: 446 | 7 好 谢谢
我做了 我的抗体是识别特异位点的一个tyr磷酸化抗体，用牛奶block， 然后直接
tbst incubate一抗，没啥问题。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 8 would you please talk about "sample处理／冻融上面处理"? thanks
在 |
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x********e
发帖数: 35261 | 9 谁说用western定量了？我说的是定量上样后western。照你这么说用BSA定量是
bullshit? |
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s******y
发帖数: 17729 | 10 BSA定量本来就是看看还凑合，就像用lambda DNA点样定量DNA一样，你看现在发文章，
谁还把lambda DNA定量往出端？ |
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O**********a
发帖数: 317 | 11 直接在细胞培养皿上，PBS洗过之后加裂解液＋磷酸酶抑制剂，30s内移到冰上。封闭膜
和抗体要用BSA溶液，4度过夜。 |
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D***a
发帖数: 516 | 12 从一篇文章上抄来的：
cDNA encoding 'artificial' SUMO-2 'polymers' was generated by ligating PCR
products encoding DeltaN11–SUMO-2 while simultaneously digesting with
restriction enzymes specific for BamHI (N-terminal site) and BglII (C-
terminal site) in T4 DNA ligase buffer, 150 mM NaCl, 0.1 mg ml- 1 BSA at 22
°C for 5 h (enzymes and buffers from New England Biolabs). This created a
range of cDNAs encoding DeltaN11–SUMO-2 cDNA 'monomers' and 'multimers'
that were separated by agarose gel electrophoresis ... 阅读全帖 |
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M******g
发帖数: 152 | 14 After glycine 0.1 M pH2.5 striping twice, I normally just use TBST to
briefly rinse the membrane twice, and use 5% milk or 3% BSA to re-block the
membrane. |
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f********1
发帖数: 367 | 18 我们用的RPI #A30075-100 (>98%)来做ELISA,很好用。
96%的不知道。 |
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s******5
发帖数: 293 | 19 Thanks a lot.
We used #A30075-25, similar to yours. It is much cheaper than other company. |
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D**A
发帖数: 311 | 20 没有看到有其他isoform的。
最让我不能理解还有一个，是他们做了一个instrument performance results, 用的
BSA, 测到19个peptide，33%coverage, 这个太低了吧？ |
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D**A
发帖数: 311 | 21 没有看到有其他isoform的。
最让我不能理解还有一个，是他们做了一个instrument performance results, 用的
BSA, 测到19个peptide，33%coverage, 这个太低了吧？ |
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i******g
发帖数: 90 | 22 55% coverage 问题不大， 因为你不能确定有哪种蛋白修饰， 另外还有样品准备方法
， 上样量等。 不过15% coverage on bsa 是比较低呀， 怎么也得80%以上吧。我感觉
是样品没做好， 叫facility重新制样 ， 在跑一下质谱吧。 |
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K******S
发帖数: 10109 | 23 在做一次之前让这个地方search一下modification. 反正raw data已经有了，就是重新
设定一下数据库检索的参数。另外他们用什么仪器? 我做qc只用几个femto mole的bsa,
5分钟的lc gradient,出来就是30%的coverage. 那种上巨多的量得出几乎100%的qc一点
用没有。 |
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D**A
发帖数: 311 | 24 他们用的是nano-lc LTQ linear iron trap，我搜了下，这个仪器挺老的。不知道仪器
新旧是否会有影响
样品已经送去了另外一个地方。
bsa, |
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发帖数: 1 | 25 谢谢。
今天重新做了1-2小时的fpg incubation，最后得到了很好的预期的结果，就是（fpg -
mock）和 （fpg+ 样本）在qPCR后Ct有明显的3-4 cycle的差别。
然后把这些genomic DNA都跑了1%的gel ,如图。lane1（mock）和lane2（+fpg）是切一
小时的结果；lane3和lane4明显什么都没有，lane5是positive ctrl。
还是很惊讶nebuffer+BSA incubate genomic DNA overnight会导致DNA degradation；
另外如图里lane1和lane5都是标准的gDNA gel pattern就是有个23kb的sharp bands，
而lane2中因为fpg treat所以high-molecular-weight band都被切没了。不知道这解释
对不对 |
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b******s
发帖数: 1089 | 26 首先国内基因组测序完全外包，交钱华大全帮你搞定，华大收钱外加挂共通讯。
大佬只负责出钱，几百万，加出材料即可。
我见过文章一作完全不懂文章内容是什么的。
这又什么技术含量，有了这个文章再去忽悠更多的钱，做更多的测序。
另外，凭什么说测序更有技术含量？离开了实验，测序什么都不是。
国内现在大量的GWAS，BSA定位，结果都只发到3，4分的杂志，这种完全公司帮着做，
出钱出材料就好。这些文章看着我就心痛，多好的材料就这么浪费，本来可以做出很有
意思的东西。
这篇cell就是GWAS定位，定到启动子区域一个突变，一直不敢确定结果。
后续实验才搞清楚了调控的原因，确定了影响的模式和途径，未来crispr做一做，应用
价值很大。
农业里面很多都是强调genetics，都是做整体表型的，实打实的结果。
跟你们养细胞，做老鼠不一样好不好。
来宣 |
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e****n
发帖数: 165 | 27 请问有什么便宜或常用的蛋白的isoelectric point 是5 或者9的？除了BSA,
lactoglobulin,(pI=5), Rnase A(9). |
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s****a
发帖数: 436 | 28 Thank you. Your suggestion is very helpful.
I agree the strong affinity between Fe2O3 and ZnSe-COOH.
I think I have two options:
1. try B-casein or BSA to block the surface of MNP-COOH.
2. Increase the surface DNA density to prevent the non-specific adsorption.
your
Did
to aggregate. |
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b*******g
发帖数: 1309 | 29 方法：QCM SPR 比较常见
带荧光的protein，可以搞GFP 这类的proteins
或者自己用ｄｙｅ修饰ｐｒｏｔｅｉｎ
一般用BSA比较多，便宜量有足，容易修饰 |
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b***2
发帖数: 348 | 30 荧光显微镜，用GFP或者fitc-bsa这种便宜货色吧，如果你对protein没有特殊要求的话 |
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y***l
发帖数: 1095 | 31 谢谢，那DIGEST的部分只能TA提前帮学生做了？？如果学生LAB只有三小时的话。。。
除了BSA还有别的蛋白推荐吗？因为你说一个已知，一个未知。。。 至少需要两种蛋白
吧。 |
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b**********t
发帖数: 353 | 32 我做过呀，双盲主要是要排除主观因素影响（比如很多疾病的状况不能完全量化，要靠
医生判断病情，这里面有医生的主观因素影响），好不好做要看具体的实验，比如以前
做过一个尖锐湿疣的外用药的临床双盲实验，超级简单，3个人搞定，我、我老板、我
师兄（他是临床大夫），我负责做药，我老板分组，我师兄拿去给病人抹（其实我们是
偷着试试看看这个东西好不好用，没有正经的临床批文什么的），这个药是个外用药，
又不用临床批文，我师兄自己就有很多患者，他自己也可以判断病情，所以简单的很，
虽然结果证明抹这个药跟抹BSA效果是一样的，呵呵。后来做一个抗癌的药，这个就超
级麻烦了，要临床批文，药物制备要GMP，临床试验要搞一大堆专家开会制定临床方案
，还要攒病例，还要负责患者所有的相关检查费用（比如CT什么的），这个就不但麻烦
还巨费钱了，研究制备工艺就搞了3年多才符合了国家标准，之后的临床试验还要3-5年
，现在这个还在继续中。
双盲原理很简单，技术上要看具体情况决定这个实验好做不，不过结果是比较可靠的，
新药上市这个是必须的。 |
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a********e
发帖数: 3771 | 33 谢谢指点。
您说的是blocking buffer里的牛奶浓度吗？我用的是5%
我在dxy上看到几个回帖，说p38用BSA稀释比牛奶稀释一抗更容易作出来。 |
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m****a
发帖数: 287 | 34 是的，不过我觉得跟抗体有关系。可以重新试试别的批号的。实在不行就用BSA。如果
还不行，就换整个提取的系统。我没煮过15min，不知道有何后果，觉得其他问题都不
大。这两个都算是强信号，tissue里面酶比较多，有时候相对不好做。 |
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a********e
发帖数: 3771 | 35 好的，暂时排除vortext和多次离心。
我下次实验尽量缩短提取时间，全部冰上低温操作。换BSA稀释抗体。 |
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d***g
发帖数: 9 | 36 很多年轻人到美国都想要申请大学的护士专业，也就是英文所说的Nursing，因为几乎
每个人都说护士可以在美国申请到绿卡，可以赚年薪起薪6万，那为什么有人说简单，
有人说复杂，这其中究竟有什么诀窍呢？
那么下面整个介绍一下在美国做护士的步骤，以及申请绿卡的条件。
这篇文章会介绍几个部分的内容，
包括：
1 申请护士职业移民最基本的条件和优点。
2国内护士专业毕业，人在美国，或人不在美国，如何申请美国大学的护士专业或申请
护士执照考试和如何进行职业规划。
3国内高中毕业，有高中毕业文凭，人在美国，如何申请美国大学的护士专业。
4国内大专或本科毕业（非护士专业），有高中和大学文凭，如何申请美国大学的护士
专业。
5 已经有身份（有绿卡或是美国公民），但是想申请护士专业，如何申请美国大学的护
士专业。
6 通过考试后，取得美国护士执照，通过托福考试后，如何找医院面试谈判，如何找律
师递交移民申请，如何关注职业移民配额，最终申请绿卡。
7 注册护士考试的英文名称和考试内容，那里可以买参考书，网上有哪些资源。
8 申请过程中常见的困难和困扰有那些
9 托福考试的复习与报考准备
10 附录 护士注册... 阅读全帖 |
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i*******8
发帖数: 1 | 37 我想做个实验，把便宜的蛋白固定在凝胶里面，期待它跟某些溶液接触会膨胀。只有血
清蛋白便宜，想看看它跟药物接触胶能否产生物理变化。。
希望各位给个建议
MSN: m******[email protected] |
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J********i
发帖数: 8 | 38 Could anyone please answer the question -
Do I need to remember the following formula/equation for the NAPLEX?
1. CrCl (cockcroft-gault equation)
2. Calories/gram for TPN
3. BMI
4. IBW
5. BSA
6.Henderson-Hasselbalch equation
7. T1/2
Thank you so much! |
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l*******d
发帖数: 572 | 39 Derived from Strategic Transactions, Elsevier Business Intelligence’s
premium source for tracking life sciences deal activity, the Recent
Financings Of Private Companies column provides a comprehensive monthly
review of emerging life science companies that have received venture funding
, including companies within the In Vitro Diagnostics, Medical Devices, and
Pharmaceuticals sectors.
Recent Financings Of Private Companies, April 2013
Article preview from Start-Up - April, 2013
Singapore-based c... 阅读全帖 |
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yf
发帖数: 272 | 40 What I meant was the dose divided by days is different. That's why one is
called dose DENSE. Because you give the dose in less time. But you need to
give nebula sat for blood cell support. Google Citron 2003 paper.
I don't know why doxorubicin was given 140mg. Your mom's BSA is 1.7, 60x1.7
=102
By the way, your mom is overweight. BMI is 27. |
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发帖数: 1 | 41 总是有人们问什么是BA/BSA（Business Analyst/Business System Analyst)? 很多人
们认为Data Analyst就是Business Analyst. 其实这是两种完全不一样的职位，技术技
能也不尽相同！
所以求职路上混淆了这两种职位，自然求职的成功就难了。因为两种职位要求的软硬技
能，工作职责虽有重叠，但毕竟不一样；两类工作，市场职位多多，可能你不缺面试，
但少了成功！
【看看下面视频详解】
https://www.youtube.com/watch?v=9ORUI0SR1w0 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 42 quote
Trajectory compensated scopes for target and varmint shooters. Designed for
the .22 bullet, the trajectory is compensated from 50 to 175 yards. Features
a quick change turret system with 3 drums included for 36, 38 and 40 grain
bullets.
FEATURES:
Fully multi-coated precision lenses
Waterproof, fogproof, shock proof
Adjustable objective for parallax
Baked on rubber shadow black finish
1 main tube with quick change turret system
SPECIFICATIO NS:
Magnificatio n: 6 - 18X
Obj. Lens Diameter(m |
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