o******t
发帖数: 68 | 1 干吗不试试MgCl2法？
CaCl2转化效率就是低。 |
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C********n
发帖数: 6682 | 2 生石灰和盐 CaO + 2NaCl +H2O == CaCl2 + 2NaOH ?
CaCl2 沉淀 ，然后结晶？
化学学的不好
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C*****h
发帖数: 926 | 3 Buffer的pH值，非常关键。pH值相差0.02，转染效率可能相差几倍。
所以，不能自己配buffer，要买现成的。
而且，buffer一买来，就要0.2 um filter，然后每1 ml分装到一个管子，－20度保存。
这样，才能保证每次实验，buffer的pH值都是一样的，连0.02的误差都没有。
plasmid的量，跟CaCl2的比例，要保持好, 每125mM CaCl2，15-25ug plasmid。 |
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b**********8
发帖数: 349 | 4 最近开始自己包装慢病毒shRNA，用的是之前组里师姐的protocol，基本上是基于TRONO
LAB的protocol。之前师姐包装的病毒，效率很高，基本上能KD八成到九成。最近我自
己包装了两次，浓缩后根据之前师姐包装的病毒用量感染肝癌细胞，细胞生长速度明显
延缓，形态改变也跟之前的相似。但是做western却只能看到很marginal的蛋白水平降
低，在有的细胞株甚至完全看不到KD。我用GFP质粒转染HEK293FT，效率很高，24小时
至少看到90%的细胞有GFP表达，然后我收集这些上清直接去感染肝癌细胞，24小时候也
能看到至少80%的细胞表达GFP，说明包装过程中所用的包装质粒，试剂以及细胞应该没
有问题。我现在有两个疑问，请有经验的战友指点：
1）师姐留给我的protocol上，转染HEK293FT的方法如下，以10cmdish为例：
prepare the following transfection mix:
10.0 ug GFP(or other gene of interest)
10.5 ug pLP1
10.5 ug pL... 阅读全帖 |
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G**********s
发帖数: 74 | 5 rt。
看了几篇paper，是关于potassium depletion的。 其中potassium depletion buffer
的地方，我不太明白. 几篇paper中，buffer的组成是：Hepes, NaCL, CaCl2, MgCl2,
glucose (PH 7.4)，对于不同的paper（都是HEp-2 cells），组成和concentration都
不不一样，比如有的不含MgCl2 和glucose，但共同点是都有Hepes这个buffer。其中一
篇paper解释加入CaCl2是因为他们实验中的某种protein binding需要Ca+，但关于其他
成分，没有说明。
我的问题是：如果我做一个不同cell line的实验，那么这个potassium depletion
buffer我应该怎么做？比如能用PBS代替Hepes吗？要怎么加入各种成分才能最大程度上
保持和普通实验的一致性呢？（普通实验就是incubated with growth medium， RPMI
1640）。
没有什么头绪，有点乱，让大家见笑了。谢谢！！！ |
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w********h
发帖数: 12367 | 6 制造低温的方法
1、 利用冰在溶解过程中的冷冻混合物（冰盐冷剂）产生低温：
碎冰： 0~ -5℃；
3份冰+1份食盐：-15~-18℃；
3份冰+3份结晶氯化钙（CaCl2?6H2O）：-40℃；
3、 4份冰+5份结晶氯化钙：-40℃~-50℃；
2份冰+1份浓HNO3：-56℃。 -----------???
无论用哪一种冷冻混合物，先决条件是须将冰和盐很好地粉碎，而且要混合均匀。用两
种冷冻混合物时，须先将CaCl2?6H2O或浓HNO3在冰箱中冷却，才能达到上述温度。
2、 用升华过程来产生低温：
固态二氧化碳（干冰）：-78.9℃;
固态二氧化碳+乙醇：-72℃；
固态二氧化碳+乙醚、氯仿或丙酮：-77℃。
由于固态二氧化碳的导热能力很差，应将它混合在一种适当的液体中使用，譬如丙酮、
酒精等。三氯乙烯特别合适，因为固体二氧化碳能漂浮在三氯乙烯面上，因此混合物就
不会发泡沫而溢出。
3、 利用蒸发过程产生低温：
在实际应用中液氮有一定的优点，它是一种无色、无臭、无味的液体，微溶于水，对热
电传导不良，稍轻于水，不产生有毒或刺激性气体。同时不燃烧亦不自炸，与钠、钙或
镁结合，形成 |
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l********k
发帖数: 14844 | 7 说话别想当然。Cl和F虽然是同一族，化学行为可以很不一样。CaCl2喝了顶多拉稀，
BaCl2你敢喝么？ |
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发帖数: 1 | 8 纯度99%的CaCl2不是氯化钙，那是什么？
难道你买的加碘NaCl不是食用盐，是碘？ |
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发帖数: 1 | 9 不是毒品。是化工原料。
阿里巴巴上有卖，25kg一袋。
CaCl2更是按吨卖。 |
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t*******6
发帖数: 215 | 10 可以，腐蚀率 NaCl（食盐） ~<=CaCl2
你家没花没草地的话无所谓。 |
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n***s
发帖数: 10056 | 11 There are two types of water hardness:
temporary and permanent.
temporary hardness, caused by Ca(HCO3)2, can be removed by boiling the water.
permanent hardness, caused by minerals like CaCO3, CaSO4, CaCl2, cannot be
removed by boiling the water.
check this:
https://zh.wikipedia.org/wiki/%E7%A1%AB%E9%85%B8%E9%92%99
"硫酸哪里来的?" -- it's not 硫酸 but 硫酸钙. Just like H2O cannot be called
hydrogen and oxygen. Agree?
"你不知这东西不溶于水的吗"
微溶于水. Otherwise, we are in trouble with underground water. |
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N****n
发帖数: 4179 | 12 恩，tums吃了是胀气
CaCO3 + 2HCl = CaCl2 + CO2 + H2O
Tums不行，上zantac算了。 |
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t*m
发帖数: 4414 | 13 why?
there are roof ice melt chemical selling at home depot. CaCl2 |
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x**u
发帖数: 8 | 14 今年波士顿是ice dam重灾区，2015年二月是史上有记录（1872年）以来降雪最多
的一个月
ice dam具体行程原因就不细说了，网上大量资料：
总的说来解决方法是从预防与除冰两个方面来，预防的话主要是1）attic
ventilation增加，让attic的温度降下来，屋顶的雪不化，也就不会形成ice
dam了，2）屋檐装heating cable，通过加热把凝固的冰化掉
这里介绍急招我试过的除冰方法，供大家参考。
我家roof比较高，又没有roof access，这是找专业人员来除冰的架势：
首先除冰柱子，这个最简单，锤子绑个棍子就行，可以减少冰重量对gutter的压力
，但是对ice dam本身没有任何改善
试了把heat gun加延长线用棍子来化冰：
结果：
把heating tape绑在tube然后用其来化冰：
用棍子棒锅然后往屋顶撒盐（最好用roof salt，CaCl2)：
视频，两个手法，一个是把盐洒在ice dam后面（更重要），一个是把盐洒在ice dam上
面：
尖锤子（比一般锤子给力很多）：
砸： |
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h**w
发帖数: 4510 | 17 blossom end rot spray.
前一阵lun版斧说有个干燥剂也行，我猜应该是含CaCl2的。反正你能弄到可溶的钙盐都
可以。 |
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y*****8
发帖数: 18140 | 18 请问行家妹妹sea salt 或者 ESPON SALT是不是可溶的钙盐？盐水浇地好不好？
blossom end rot spray.
前一阵lun版斧说有个干燥剂也行，我猜应该是含CaCl2的。反正你能弄到可溶的钙盐都
可以。 |
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f*****g
发帖数: 3086 | 19 跟硅胶放在一块，封在ziploc里面，保持80 F左右两天就干透了。
强一点的，用CaCl2干燥剂，可以把手机里面的indicator都干燥，
店员检查都看不出进过水，还可以去保修，哈哈。
包子~~ |
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w**********1
发帖数: 154 | 20 中科院院士段振豪包养二奶，小三，小四，养私生女（有图有真相）
来源： 陈文的日志
先介绍一下人物背景，这么多头衔，多么有名气的一个人：
姓名： 段振豪 性别： 男
职称： 研究员 学历： 博士
电话： 010-82998377 传真： 010-62010846
Email： d*********[email protected] 邮编： 100029
地址： 北京朝阳区北土城西路19号，中科院地质与地球物理研究所
更多信息：
【English】 地球深部结构与过程研究室 The_Duan_Group
简历：
段振豪
学历和工作经历：
1982年，学士，中国地质大学(武汉) ，地球化学专业;
1985年，硕士，中国地质科学院，地球化学专业;
1988年，博士，中国地质大学(北京) ，地球化学专业;
1988-1991年，博士后，美国加州大学，物理化学专业;
1992-1995年，助理教授，美国加州大学(圣地亚哥) ，地球化学专业;
1995-1999年，副教授，美国加州大学(圣地亚哥) ，地球化学专业;
1999-2004，教授级研究员，美国加州大学(圣地亚哥) ，地球化学专业;
2002-... 阅读全帖 |
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n****n
发帖数: 492 | 21 The delivery room became hectic again. I can imagine how they were
talking about, rushing from room to room, trying to save me and
comfort my mother. That obstetrician told me they finally decided
to inject an almost lethal dose of Calcium Chlodride(CaCl2) to get
my heart pumping again.
My mother was awake, lying in bed, hoping the anticipation of being
the first time parents wouldn't be crushed by an accident.
Lucky me -- It worked. I cried out loud and hard after few seconds.
My mom told m |
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p***r
发帖数: 4859 | 22 CaCl2是可溶的吧， CaCO3才是不溶的。 |
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c*****t
发帖数: 1084 | 23 still use calcium phophate? according to my limited exp on this method i think
the following things should be taken care
1. quality of your CaCl2
2. quality of your buffer (PH is important)
3. DNA quality
4. mix well by short vortex
5. let complex form for about 20-30min
6. no single transfection method can apply for all different cell lines. do a
proper control to begin with. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 24 CaCl2 + H2O + CO2 = CaCO3 + 2HCl |
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p*****e
发帖数: 560 | 25 是不是pH变了？2M的CaCl2水溶液常温放了一年也没啥变化 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 26 我用的是pH 7.4的20mM Tris Acetate buffer，还含了140mM的NaCl和5mM KCl, 1mM
CaCl2, 1mM MgCl2
这个recipe应该是从这篇paper来的：Bock et al. Nature 1992. (355)564-6. 这篇
paper不是用biotin-streptavidin interaction，但是我们就用这个条件做好像没啥太
大问题，至少bind得貌似挺好。
你有没有做个positive control看看是不是你的nanoparticle或者labeled oligo本身
的问题啊？biotin-avidin的binding应该是不太挑条件的，要不然就不会应用那么广了
。 |
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a***a
发帖数: 40617 | 27 什么山寨厂MgCl2里会混有10%的CaCl2？
还有我哪里说过越不纯越好？
我的point是，很多时候>99%就够了，结果大家非要从sigma买>99.95% |
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s******r
发帖数: 2876 | 28 Sigma也有从不同公司贴牌的吧。
什么山寨厂MgCl2里会混有10%的CaCl2？
还有我哪里说过越不纯越好？
我的point是，很多时候>99%就够了，结果大家非要从sigma买>99.95% |
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C*****h
发帖数: 926 | 29 1. Seed 1.5x106 293T cells per 10 cm plate in 10 ml growth media (
DMEM + 10% FBS). Usually, one T-175 flask of 293T cells at 90-95% confluency
is split to 12 plates (10-cm).
2. Incubate cells for 24 hours (37 °C, 5% CO2), or until the cells reach 40
-50% confluency (no more than 70%).
3. One hour before transfection, replace old growth media with 9 ml fresh
growth media (DMEM + 10% FBS).
a. Prepare plasmid mixture at 23 °C:
430 ul H2O
20 ul plasmid (1 ug/ul)
50 ul CaCl2 (2.5... 阅读全帖 |
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y****l
发帖数: 1 | 30 大家好，我最近拿到了一个十二个跨膜结构膜蛋白的晶体，正在做SeMet标记晶体。
我用的菌株是：B834（DE3）
培养基：M9+19个氨基酸+0.5%glycerol+ 5%glucose +Thiamine+1mM MgSO4+0.1mM
CaCl2+0.05mg/ml selenomethionine+amp
温度：37°
培养时间：24小时
用这样的方法，没4L菌可以大概拿到3毫克的蛋白。
现在问题是3毫克蛋白根本不够我用来长晶体。
问题：
1.在养细胞的时候我发现离心以后上清还是很浑浊，还有大量的菌在上清中无法被离下
来。我
加大了离心的速度和时间，还是无法离下来。有好多菌附着在离心管壁上。不知道这是
为什
么？
2.离下来的菌有一些黄黄的东西，而且是比较多的。通过我的纯化，我发现这些黄黄的
东西是
不能被detergent溶解的，里面没有我的目的蛋白。不知道这些黄黄的东西是什么？
3.离下来的菌在悬在buffer的时候，我发现很粘稠，和我用与表达非标记蛋白用到的菌
的时候
是完全不一样的。是不是菌破裂了，dna跑了出来。很奇怪。
4.长SeMet derivative pro... 阅读全帖 |
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r**a
发帖数: 121 | 31 最近在做组织的FACS，用Trypsin和collagenase处理
我用的是10X Trypsin EDTA，后来发现EDTA是Trypsin和collagenase的抑制剂
Trypsin Inhibitors:
* Pancreatic-, soybean-, lima bean-, and egg white- trypsin inhibitors (
see section on Trypsin Inhibitors)
* DFP
* Aprotinin
* Ag+
* Benzamidine
* EDTA
Collagenase Inhibitors:
* EDTA, EGTA
* Cysteine, histidine
* DTT
* 2-mercaptoethanol
* o-phenanthroline
* Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+
* Not inhibited by DFP or serum
(White and White ... 阅读全帖 |
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n******2
发帖数: 971 | 32 No, my sonicating buffer is slightly different from lysis buffer.
They both contain low concentration of Tris, NaCl, MgCl2, CaCl2, however,
sonicating buffer consists of higher amount of IGEPAL4% (compare to 0.5% in
lysis B) and 0.8% SDS.
I'm following the protocol developed by Affymatrix. It worked well on mouse
cells performed by another lab, but bothers me very much on my human cell
line. |
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n******t
发帖数: 1281 | 33 FYI:
http://www.bacillusbbs.com/
Bacillus subtilis strain with inducible super-competence.
Zhang, X. Z. and Y. H. Zhang. 2011. Simple, fast and high-efficiency
transformation system for directed evolution of cellulase in Bacillus
subtilis. Microb. Biotechnol. 4:98-105. PMID: 21255377 read online
枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。
2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养
过夜。
3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。
4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养9... 阅读全帖 |
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j****t
发帖数: 1663 | 34 恩，293是长得比较快。下次铺细胞是计一下数，确定你铺的是70-80%confluence
另外，还有你也可以试试其他的transfection reagents 来提高转染效率，例如CaCl2
， PEI (Polyethylenimine），Turbofect from Thermo-Fermentas |
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r******g
发帖数: 600 | 36 看到 很多大牛们出来讨论 那个克隆的问题～ 我也来征求一下大家的suggestions～
我们实验室 研究一个 mitochondrial protein的功能。 是一个mitochondrial
transmembrane protein。我的实验目的 是，克隆表达 这个蛋白的 5'-HA tag-Nter
region-Transmembrane-3' (缩写HA-Nter clone) 和 5'-HA tag-transmembrane-C-ter
region-3' (HA-Cter clone) 两个truncated protein.
clone挺简单，因为 克隆cDNA，并且，蛋白很小，只有200氨基酸。我克隆的片段也挺
小的，没有经历太多难度。我把 Nter clone 和 Cter clone 都克隆到 一个
retroviral vector，coding region后面有一个IRES-GFP。plasmid 8.6kb。
接下来,我把这个HA-Nter clone 和HA-Cter clone，用293 cell 表达（CaCl2
transfection）.
... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 37 常用的 0.25% Trypsin with 1 mM EDTA
DMEM里含 2.4mM CaCl2, 0.8mM MgSO4, 干掉残存的那一丁点EDTA绰绰有余。
莫非alternatively那句话暗藏玄机？做不出来的赶紧去给培养基加点儿Mg试试。。。 |
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n****0
发帖数: 696 | 38 If I have a solution of multiple components (CsCl, MgCl2, CaCl2, Hepes-Tris,
EGTA and sorbitol) and I know their concentrations (mmol/L), how to
calculate its somolality (mmol/kg)?
Thank you so much. |
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e****2
发帖数: 2723 | 39 有机化学家的故事
1 ．贝格曼（ T.O.Bergman ， 1725--1784 ，瑞典化学家）
贝格曼是舍勒的友人，研究过有机物如甘油等。他是著名的分析化学和矿物学家。编写
过一些书。
2 ．葛梅林（ L.Gmelin, 1788--1853 ，德国化学家）
葛梅林是海德尔堡大学教授。发现铁氰化钾（ 1822 ）、牛磺酸（ 1824 ）、克酮酸及
玫琮酸（ 1825 ）、血红素和胰酶（与 Tiedemann 合作， 1826 ），引入酯和酮的名
称（ 1848 ），编写过大部头的《化学手册》。葛梅林说， " 只有碳是有机化学物的
基本元素。 "" 将有机化合物简单定义为碳化合物。 " 凯库勒说： " 因此，我们把有
机化学定义为碳化合物的化学。但这个定义没有表示出无机物与有机物的真正区别。对
于我们这门学科，人们给了它有机化学这一个历史悠久的名称，而我们把它称为碳化合
物的化学则更为方便。 "
3 ．舍勒（ Carl Wilhelm Scheele, 1742--1786 ，瑞典化学家）
舍勒索 742 年生于当时瑞典波莫瑞尼亚的首府施特腊尔宋特。他生活在错误的燃素论
在化学界盛行... 阅读全帖 |
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f*********e
发帖数: 1144 | 40 Really really weird...
but it looks large precipitation happens if I dilute the buffer containing
100mM Tris.HCl(pH8) + 10mM CaCl2 with PBS (pH7.4)
Only thing I can thinki off is some sort of calcium phospate compound formed
.... is it possible???
Need help from Niu Ren |
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L*******r
发帖数: 5448 | 41 多容易验证啊，弄点CaCl2和Na3PO4放水里看看不就行了。。
formed |
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b**s
发帖数: 589 | 42 除去水分应该在添加CaCl2,分子筛，Na等的情况下减压蒸馏，靠蒸馏除去里面的水份和
杂质，效果肯定不佳
有气体通过，抽真空下的气压计没有任何变化说明--老有气体产生，不奇怪 |
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N*******f
发帖数: 339 | 43 干燥氮气：CaCl2 H2SO4组合。
drying tube: 可以做一个三通（N2，真空，聚合管），需要加热，真空，氮气组合（
这个是土办法） |
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h*****u
发帖数: 19 | 46 赛，有爱尔文和北卡的高手给偶支招，多谢了。偶还以为这里
都是数学系的呢。其实偶是替偶的mm问的，偶自己作transformation
的时候，盘子上的细菌多的象满天星斗，可这个笨妞就是作不出来，这
回又重作了一把，只长出两个菌落，还不知是否假阳性。把她的老板都
气乐了，给了句评论：ridiculous。mm在电话里向偶哭述，偶赶紧给
分析：insert fragment和vector的比例是多少？有没有留出时间让
risistance gene表达？vector切口平端有没有去磷酸化？有没有作
control experiment？都是按分子克隆上作的，没错呀，competent
cells也是买来的，偶就有点搞不懂了，只想对她说：这么简单的
实验都做不出来，不要再读下去了吧?过来跟偶过吧。又怕mm将来见面
的时候锤我，没敢。 |
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s**********i
发帖数: 711 | 47
hehe, then how many colonies she got from positive control?
if she got expected number of colonies from positive control, then
she did the transformation part correctly. and problem would be
from plasmid construction. try doing one experiment known to work.
if no colonies from positive control, and she tried different batch
of cells, then quit the school and join you... |
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m****e
发帖数: 161 | 48 【 以下文字转载自 Singapore 讨论区,原文如下 】
发信人: mymike (反应器), 信区: Singapore
标 题: Re: [转载] help!!!!!!!(Chemistry)
发信站: The unknown SPACE (Fri Apr 21 08:27:46 2000) WWW-POST
我们也这样认为
可是在与其他无机盐溶液混合则无此现象
当溶液中有其他组分:
K2HPO4
KH2PO4
NaNO3
(NH4)2SO4
MuSO4.H2O
CoCl2.6H2O
CaCl2
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O
H3BO3
Na2MoO4.2H2O
AlK(SO4).12H2O |
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a***u
发帖数: 72 | 49 既然是科学版,当然要科学讨论.
当初是哪个大侠说是三价铁的?
记得说了三价铁水解是红色,盐是蒸馏来的话,容器带铁,最终产生三价铁.
天,撒的是什么?NaCl, CaCl2?杂质成分?总不能因为氧化铁红,就说红的都是氧化铁.况且
这里说的粉色,红色再稀好像和粉色不一样呀,最好你有光谱证据,看出Fe2O3的特征谱.
个人认为三价铁一说难以服人,因为要少量就能显色的,象是高吸光度的色素,Fe3+比吸光
度很小(除非有显色的配位).细菌一说似乎有点意思,细胞色素的比吸光度特别高.比如高
等动物的血红素含铁,红色,
.
这种和嗜雪藻(正文所论述的--chrr)以及嗜盐菌有亲缘关系的单细胞藻类，Dunaliella(
湖和盐湖中，时常把湖水(注意，是水而不是冰雪--chrr)染成朱砂(就是硫化汞--chrr)般
黄
，
所
缠
铁
寒
的
你这段话笑得我差点儿没把眼睛打了。照你这么说，如果A成立且B成立，那么A+B |
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