s**********e
发帖数: 2888 | 1 我遇到的问题就是最后一步counting cells计算结果：
直接显微镜counting，我觉得透过膜的细胞的分布不是很均匀的，所以我总觉得选几个
区域数细胞不是很靠谱，虽然很多人都是这也做的，而且我到最后数细胞的时候，染料
残留和细胞经常难以分辨。
我最近开始试着用Calcein AM + cell dissociation solution,比如Trevigen的cell
dissociation solution，很多的commercial kit似乎都是这个办法。但是我总觉得，
会不会细胞不会完全的脱离下来，会不会有细胞死掉，或者膜上面的细胞会穿透膜掉下
来。
谢谢了 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 2 3-NPA does that. 3-NPA directly inhibits succinate dehydrogenase activity.
At sub-toxic doses cells are still viable, but SDH activity could be significantly inhibited.
MTT/MTS/Calcein Am/Resazurin assays are often over-used or somewhat used
incorrectly to measure cell viability/cell number.
your
seen |
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r***e
发帖数: 2539 | 3 MTT/MTS/Calcein Am/Resazurin assays are often over-used or somewhat used
能展开说说吗？谢谢！ |
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m*********n
发帖数: 158 | 4 一般大家都用多少浓度？incubate多久？
在细胞能留几代得样子？谢谢 |
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k***g
发帖数: 4904 | 5 Calcein, AM
这个用在细菌上能只染活的么，效果如何
dye
400 |
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d****i
发帖数: 2346 | 6 google "calcein am staining bacteria" |
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k***g
发帖数: 4904 | 7 太感谢以上两位了！我目前用着PI呢，我再买个Calcein AM |
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k***g
发帖数: 4904 | 8 我不是学生物的是个外行，不过还是要研究一下这个问题。。
大致是这样的，我有个cell sorter，能把某种特定类型细菌抓住，不过可能对细菌有
些损伤。我希望抓住细菌后，用某种dye染色，看看抓住的菌是否有原本是alive的。也
就是说，不管我的sorter对它产生了什么damage，只要进入sorter前是活的，我就希望
输出positive结果。
不过听说live/dead stain机理有好几种，有的依赖膜完整性，有的依赖内部的代谢反
应，我不知道选哪种对我的要求更契合，请大牛给指点一下，多谢了！我目前考虑
Calcein AM，不知道这个适合我的要求么？谢谢！ |
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j******n
发帖数: 941 | 9 Calcein依赖代谢 别的不知道是否符合你要求 |
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k***g
发帖数: 4904 | 10 谢谢，我知道Calcein依赖代谢，我就是想知道，如果膜受损之后，是不是代谢还会维
持一小段时间才会彻底停止 |
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j******n
发帖数: 941 | 11
Vialight和Celltiterglow是ATP依赖的 即使膜受损 还是会维持一段 据说Calcein好些 |
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