b*********e
发帖数: 870 | 1 lz列的这仨FPs，假设是用的最常用的那几个，激发、发射光谱几乎完全不overlay，别
说用confocal了，就是普通的荧光显微镜都能分清楚的啊。尤其是在每个channel单独
照，emission filter足够好的情况下。
我觉得lz可能没有搞清楚这三个颜色是不同的channel，是分开来照的。。。。 |
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h****u
发帖数: 618 | 2 多谢建议。
这个显微镜是全新的。我们实验室就打算买一个简易的看看实验瓶里面的细胞，如果结
果比较好，可以去学校的影像中心用confocal microscope照高质量的照片. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 3 if can share instrument to do high throughput sorintg
pls try
BD Fortessa Flow Cytometer
//www.fluofarma.com/pageseditos,89,left_2354BC5D,high,throughput,flow,
cytometry,automated,confocal,imaging,laser,scanning,cytometry,high,
throughput,fluorometric,imaging.html
>Spec:
► Functional measures using an automated 384-well plate flow
cytometer
► Multiplexing analysis: measures up to 18 parameters simultaneously
in single cells
► Large Capacity: acquisition of 40 000 events per s... 阅读全帖 |
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d******g
发帖数: 2060 | 4 求 审稿 cell biology and cancer biology
The specific keywords about my expertise:
mTOR signaling; Tuberous sclerosis complex (TSC); Autophagy; Apoptosis;
Ataxia telangiectasia mutated (ATM), AMPK; AKT; Reactive oxygen species (ROS
); Mitochondria/Peroxisome biogenesis; Protein ubiquitination; Confocal
microscopy
请站内短信，需要cv再email。包子感谢。 |
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m****n
发帖数: 116 | 5 明年初我们家要relocate到Boston，帮老婆求明年三月开始的Boston地区lab
technician的工作。老婆复旦遗传工程硕士毕业，在University of California做了8
年的staff research associate和lab manager。大多数分子生物学，组织学和形态学
工作都可以胜任。我们有绿卡，因此大学，研究所，医院和公司的机会，我们都想试试。
请板上的热心网友帮忙。谢谢。鞠躬。
请回复邮件至edwardsun123 at gmail.com
Lab Skills
Proficiency in molecular biology
DNA/RNA extraction, Plasmid extraction, Gel electrophoresis, DNA/RNA
quality and quantity analyze
PCR primer design and PCR (Standard PCR, Long-Range PCR, Quantitative
Reverse Transcription-PCR, Real Time PCR... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 6 Yup, even two photon, the image could still be horrible and need a lab doing
that all the time to help. |
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c****f
发帖数: 5 | 7 本研究组主要以转基因及基因敲除小鼠动物为模型，应用细胞生物学、生物化学/分子
生物学和光/电（patch-clamp/confocal microscope）生理学等方法，研究细胞离子运
动的分子机制、相关蛋白质分子的功能及其与一些严重疾病发生、发展的关系。另外，
胚胎干细胞生物学也是我们研究的重要组成部分。因工作需要，诚聘副研究员。
要求：具有博士学位，研究方向为干细胞或代谢类疾病，有高质量的论文在国际一流杂
志上发表，具较强的英文写作能力；
有意者请与姬广聚或吴艳云联系：Tel：010-64846720，64889873
E-mail:g**[email protected]，w*********[email protected] |
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x*****e
发帖数: 309 | 8 他可能给你更多的选择，我以前已用flow做过胞吞。我是消化下来，荧光标记的蛋白和
细部一起37度30-60min,用酸性的buffer洗掉表面接合的荧光标记蛋白，然后用flow定
量一下荧光强度。不过我同时结合confocal检测的胞吞后的亚细部定位。
Cytometry |
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s******a
发帖数: 472 | 9 我说的是通常的fluorescent widefield 或者 confocal显微镜，不算fancy的超分辨率
或者单分子显微镜技术。
因为细胞通常有一定的autofluorescence，一个细胞表达多少GFP分子才能使GFP荧光超
过自发荧光被检测到。 |
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H*******N
发帖数: 108 | 10 在投一篇文章，该杂志要求彩色图片是CMYK格式的。可是我的图是RGB格式的。用
photoshop转换后发现文件变得很大，要命的是图像质量严重下降，甚至颜色也变了,尤
其是那些用confocal取得图，惨不忍睹。哪位前辈教教我怎么做？多谢了。请尽量教得
详细些。因为返修回去的时间已经迫近了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
哪个公司了。 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 14 我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
1. 两边或者四边贴胶带
2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
我经常用
4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 16 parafilm 能被mounting medium粘住吗，四周还是照样指甲油封？会不会干掉了？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 17 好经验！
贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
实验室的产品？
同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 19 modeling clay应该是橡皮泥一类的。 |
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z*******6
发帖数: 679 | 20 我做动脉的whole mount staining，就用的sunnyday的方法，结果发现太厚了... 估计
下次就不用parafilm了... 估计动脉没那么厚... |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 能。
不要剪太大一张，小小的一张能够被盖玻片盖住就行了。
如果发现可能太厚（刚才有个网友说的），可以先拉一拉，拉薄了再剪就好了。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 23 好办法，下次厚的试试parafilm，薄的试试胶带 |
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a*q
发帖数: 2109 | 24 Grace Biolabs有spacer卖。
另外双面胶的厚度大概130微米左右。 |
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s******e
发帖数: 370 | 26 我用过金属螺丝垫圈，英文是叫washer。就是要用能干的mounting medium
再厚的sample，比如整个embryo，我曾经自己用玻璃做holder，里面盛BABB
很简单的，裁几块slide，super glue |
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b******s
发帖数: 1089 | 27 要是你觉得很多垫片不容易封片的话，可以试试撒几粒arabidopsis seeds(要是你有朋
友做植物，可以要一管，够你用十年的）。可以垫高盖玻片。 |
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s******e
发帖数: 370 | 28 E11不透明是肯定透不过去的
现在围绕这个透明的技术越来越多，但是都不好做……
最简单的还是染色，然后脱水，BABB，荧光强的话还是可以的
要不然就只有扒开tissue暴露你要的部分，我从前做过很多脑神经的microdissection
，只是花时间，image下来还是很好看的 |
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D*a
发帖数: 6830 | 29 我的sample E11的爪子下面就看不着了，估计那肯定没有100 micron吧.. |
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m******5
发帖数: 1383 | 31 Confocal Image，观察一个transcription factor的relative dosage和其output的关
系。
不知哪位前辈有经验的能不能介绍一个protocol?最好是用image J的
另外，哪个二抗linear range比较好？ |
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s*****j
发帖数: 6435 | 32 ImageJ is WAY better than any Confocal software. |
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s******a
发帖数: 472 | 33 切片做living tissue confocal的，
听过microtome，vibratome，不知道是不是合适的？ |
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s******y
发帖数: 17729 | 34 植物本来就很惨，最惨的就是植物分子生物学，不知道有没有之一
比如做个基因相互作用，又不是热点的那种基因或者分支
所会的技术就是各种PCR，southern/northern/western，confocal等堆体力不需要动脑的
上不沾天（数据库分析，各种新式测序相关的DNA/RNA的数据分析处理）
下不接地（作物相关的mapping，breeding）
基本上就跪了 |
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n******g
发帖数: 662 | 35 只是细胞膜表面染色，染料没有到细胞质，请问在一般荧光显微镜下（not confocal）
应该看到的是什么？是只有细胞边缘有颜色，还是整个细胞边缘加实体有颜色？ |
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a********n
发帖数: 844 | 36 我们实验室按庄晓薇的技术在做细胞成像。
样品制备跟confocal基本一致，但最后不用封片，而是把coverslip泡在imaging
buffer里边放到显微镜上照相。
现在我们从外地的实验室要一些细胞样品，对方可以帮我们做到二抗完这一步，但不管
自己去拿还是快递也需要一两天时间才能送到我们实验室，我想知道到底细胞固定之后
哪一步实验能停下来一两天而不影响细胞的形态。
如果牛人能给我些建议，我不胜感激。先谢过！ |
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X*******8
发帖数: 3895 | 37 不太明白你怎么把图片之类的合在一起的。如果是数据之类的我们一般要求再重复用新
的数据作图。如果是WB, confocal, 等要选出不同的有代表性。总之，同一样的数据不
能在一篇文章出现两次。 |
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j*****9
发帖数: 716 | 38 EVOS® FL Cell Imaging System能满足常规用途，高质量的图片还是得上
confocal |
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c****u
发帖数: 584 | 39 WE没做荧光。那个是 M. Orrit做的。Betzig最早引入生物。sunny，S_chu, T.Ha,
Zhuang 把它发扬光大。其实现在所有人用的都是Axelrod 发明的TIRF和Minsky的
confocal. Zare引入。可惜这几位都插肩而过。
, |
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s******y
发帖数: 17729 | 40 就是用排枪加也不至于吧，矫情，加个样都这样，让你看半天confocal或者电镜，你不
口吐白沫啊 |
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P*******D
发帖数: 523 | 41 请教一下大家，我们最近develop了一个能在live cell里面定量glutathione的
fluorescent probe，大家有什么建议，可以回答什么important的biological
questions？
Invitrogen卖一个叫thioltracker violet的probe，但是这个不能定量，只能定性的看
一下GSH的变化。尽管GSH probe的文章都发烂了，也没有一个能在live cell里面定量
的。
我们develop了一个probe （ThiolQuant Green）可以很好的定量细胞里面的GSH (
reduced form only)。我们把这个probe用于confocal microscope和flow cytometry，
能很好的和cell lysate GSH measurement correlate.
相比起来redox GFP or YFP，ThiolQuant Green是直接测量reduced form GSH，而不是
measure GSSG GSH ratio。我们的probe potentially和roGFP c... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 42 I think confocal microscopy with organelle specific dye (i.e. mito-tracker)
together with your probe will be able to tell if mitochondrial GHS is
depleted in mitochondria.
not
use
. |
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l**********2
发帖数: 307 | 43 Position Description
A research associate position is available immediately in immunology and
cell biology in a multidisciplinary, well-funded research group in the
Department of Oral Immunology and Infectious Diseases (Dr. Richard Lamont).
Highly motivated, hard-working, and technically skilled applicants are
welcome to apply. The project involves neutrophil responses to oral bacteria
and the signaling pathways that regulate the intensity of inflammation.
Experience with neutrophil biology, wes... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 17729 | 44 会西方杂交和南方杂交的还好点，至少还会配个溶液涮涮管子
最悲催的是那些对着confocal和EM看了好几年眼睛都看瘸了的除了会拍几张谁也看不明
白似是而非的照片，就没有了。 |
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C****n
发帖数: 79 | 45 是很悲催，但是别忘了，人家好歹可以申请去confocal 公司卖显微镜啊 |
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r******g
发帖数: 600 | 46 看到 很多大牛们出来讨论 那个克隆的问题～ 我也来征求一下大家的suggestions～
我们实验室 研究一个 mitochondrial protein的功能。 是一个mitochondrial
transmembrane protein。我的实验目的 是，克隆表达 这个蛋白的 5'-HA tag-Nter
region-Transmembrane-3' (缩写HA-Nter clone) 和 5'-HA tag-transmembrane-C-ter
region-3' (HA-Cter clone) 两个truncated protein.
clone挺简单，因为 克隆cDNA，并且，蛋白很小，只有200氨基酸。我克隆的片段也挺
小的，没有经历太多难度。我把 Nter clone 和 Cter clone 都克隆到 一个
retroviral vector，coding region后面有一个IRES-GFP。plasmid 8.6kb。
接下来,我把这个HA-Nter clone 和HA-Cter clone，用293 cell 表达（CaCl2
transfection）.
... 阅读全帖 |
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T****i
发帖数: 15191 | 47 多年以前在国内的时候，用过国产离心机和eppendorf tube。离心机还行就是噪音太大
。eppendorf tube就太差了，加热90度以上会很快漏水。后来买进口的，就没这个问题
了。PCR仪，confocal和电镜自然是进口的，连最常用的parafilm，加样枪，HPLC柱子
，TLC板也是进口的，电泳仪倒是国产的。请问现在国产的器材和耗材怎么样了？可以
生产parafilm了吗？质量如何？ |
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x**e
发帖数: 163 | 48 国产的PCR仪，包括Realtime PCR仪已经很多了，朗基，博日，东胜什么的，外形功能
基本和进口的biorad看起来一样高端，效果和稳定性上略次，但不影响使用。价格约进
口货的1/3，且定期回访，报修反应快速，在国内取代进口PCR仪应该只是时间的问题。
摇床，水浴锅之类如无特别精确要求，国产的足矣。
各种塑料耗材，如果还用江苏海门货，质量基本如前。但也有不少在做中端产品的，质
量上接近进口货，价格约进口货的70%。
但高端的仪器如所说的confocal，电镜，nanodrop等基本还是进口，国内的nanodrop替
代品价格虽然只有正货的半价，似乎精确度也同样打了半价。
在淘宝上随便搜搜都能找到各种国产货的身影。 |
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s******y
发帖数: 17729 | 49 我也是电池啊，不是踩，真心的，我只是说实话
比如，看confocal，开始的时候还不是不会用，然后人家手把手的教，看会了，嫌恶心
，也不好好看，你让个厂妹来，最多多教她几次，她就干这个，看得比我们好，拍照也
好，反正不懂原理，还不会倾向性造假。养细胞就更是了。
分析数据，就不说了，一堆博士都哭晕在厕所里，就算手把手的教几个简单的命令行，
还是不行。
看看埋头在水槽里捞活儿的，其实有时候数据真不错，可惜自己解释不了，还是只能捞
活儿。所以，与其这样，不如这些真的就让厂妹来干，反正也解释不了数据。这样这个
行业就盘活了。 |
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l**********2
发帖数: 307 | 50 A postdoctoral research associate position is available immediately in
immunology and cell biology in a multidisciplinary, well-funded research
group in the Department of Oral Immunology and Infectious Diseases. Highly
motivated, hard-working, and technically skilled applicants are welcome to
apply. The project involves innate immune cell responses to oral bacteria
and the signaling pathways that regulate the intensity of inflammation.
Experience with neutrophil biology, western blotting, qua... 阅读全帖 |
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