l*********i
发帖数: 332 | 1 ssDNA oligo as donor, puro screen, should be easy~ |
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M*****n
发帖数: 16729 | 2 楼上二位能不能多分享一些经验？
具体讲讲要注意点啥 |
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l*********i
发帖数: 332 | 6 zhang feng的nature protocol写的如此详细，看看去啊 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 8 Thanks a lot! Just assigned by my boss to develop this technology for the
lab. |
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j******i
发帖数: 939 | 10 转染效率跟哪种细胞有关。CRISPR+ssDNA要拿到想要的克隆还是挺费劲的。可以考虑
CRISPR+piggybac＋puroTK的结合来筛选克隆。 |
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s*****g
发帖数: 87 | 11 不需要antibiotic selection的方法。
Isolation of single-base genome-edited human iPS cells without antibiotic
selection
Yuichiro Miyaoka, Amanda H Chan, Luke M Judge, Jennie Yoo, Miller Huang,
Trieu D Nguyen, Paweena P Lizarraga, Po-Lin So & Bruce R Conklin
Nature Methods 11, 291–293 (2014) doi:10.1038/nmeth.2840 |
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d****u
发帖数: 1553 | 12 哺乳动物细胞里做genome wide crisper screen的就那么几篇吧，都在大牛杂志上呢。
至于Cas9和sgRNA是不是在一个载体上，根据我们的经验，目前最好用的是Zhang Feng
lab的version 2 all in one vector。
有几个实验室载体分开的，必然会有某一个载体的滴度特别低。过这个情况也因为细胞
的不同而异，我们用的是原代细胞，不见得有普遍性。
不过我完全不能理解为什么CRISPR要分成两个载体然后再搞一个inducible system。
从screen的角度来讲，crispr library的数据明显要比shRNA library的数据信噪比高. |
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t******k
发帖数: 599 | 13 其他几个又不是做crisper的
[在 brite2010 (brite) 的大作中提到：]
：人还是多了些，诺奖不够分啊，内行再给 浓缩浓缩？ |
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d****k
发帖数: 2738 | 15 这个vector多大，你的insert多大？这个2kb insert怎么回事？sorry，完全没明白你
的问题？ |
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l***y
发帖数: 638 | 16 测序，能连进去的都是一个方向的
另外clone之后的质粒不应该再有BsmBI位点 |
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d****k
发帖数: 2738 | 17 能不能切完走胶看size变化，或者直接点，测序，象楼上说的？ |
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y*********u
发帖数: 183 | 19 这个听起来太片面的。
Crisper技术出现前那些搞cas9的人的工作该有多无聊啊，还不是修修补补修修补补的
。 量变到质变就草机变凤凰了。
iPS出现前那些搞 ES transcriptome 的人也是够无聊的，全是大量低级积累的信息。
不过没有那些信息yamanaka也圈不出最初那数百个candidate. |
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c**********n
发帖数: 177 | 20 她就是想拿炸药奖吧，如果炸药奖是颁给gene editing的话，她和张峰都没戏，如果是
颁给crisper系统，她有希望和Emmanuelle一起拿吧。呵呵，说老实话，她在这个领域
也就算一个follow up的人，虽然她做CRISP机制还可以。现在疯狂利用媒体造势也是给
自己拿炸药奖加加分，给瑞典人施施压吧，她知道自己在这个领域不是开天辟地之人。 |
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发帖数: 1 | 21 这是个crisper guy，表示怀疑
: 笨
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发帖数: 1 | 22 小张，教堂和稻那都没出声吧？他们组的博后加起来快百人，这几个月下来，有质疑早
跳出来了吧？也许人家道行深，正默默地赶实验发文章，或者给NB发要求retraction的
信？他们三人没闹，大家还是洗洗睡了，净观后期发展吧！ |
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发帖数: 1 | 23 方舟子同这3个组都联系了才写那篇韩春雨是骗子的文章。 |
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发帖数: 1 | 24 方舟子在文章里有提吗？
: 方舟子同这3个组都联系了才写那篇韩春雨是骗子的文章。
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发帖数: 1 | 25 方的文章中根本沒说这三位大爷联系他了，应该是中国的研究小组有人联系他求考证，
那三位大爷级人物还需要方来打假？不要在这传讹了
: 方舟子同这3个组都联系了才写那篇韩春雨是骗子的文章。
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g*****a
发帖数: 1112 | 26 静观发展我同意，但是你以三大牛实验室不公开质疑为理由就说不过去了。
韩国干细胞，日本小包房，有大牛出来公开质疑吗？一个没有。
这是我觉得学术精神日益退化了的理由之一。老一辈的成名科学家可以为一些争论公开
打赌，并不在意自己的“名誉”。物理学曾经有“上帝之鞭”泡利。我们这一代还能看
到吗？ |
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发帖数: 1 | 27 小保文章发表两三周后就被自然杂志开始调查，众多大佬开始群欧，最后科学杂志也发
声质疑，小保文章发表三个月内撤了稿。不知仁兄怎么开口就说大佬没有出来搞小保？
回去查查新闻，看看事件timeline，韩的文章还没被杂志社开启调查，所以要等待，不
能光喷口水和传讹
: 静观发展我同意，但是你以三大牛实验室不公开质疑为理由就说不过去了。
: 韩国干细胞，日本小包房，有大牛出来公开质疑吗？一个没有。
: 这是我觉得学术精神日益退化了的理由之一。老一辈的成名科学家可以为一些争
论公开
: 打赌，并不在意自己的“名誉”。物理学曾经有“上帝之鞭”泡利。我们这一代
还能看
: 到吗？
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发帖数: 1 | 28 不好意思，记错了，是四个月的时候撤了一篇，然后再撤的另一篇
: 小保文章发表两三周后就被自然杂志开始调查，众多大佬开始群欧，最后科学杂
志也发
: 声质疑，小保文章发表三个月内撤了稿。不知仁兄怎么开口就说大佬没有出来搞
小保？
: 回去查查新闻，看看事件timeline，韩的文章还没被杂志社开启调查，所以要等
待，不
: 能光喷口水和传讹
: 论公开
: 还能看
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g*****a
发帖数: 1112 | 29 我是说没有哪一个成名科学家读完小包房的论文在线预印本后敢立即公开说－－我敢打
赌这文章基本结论错误。
像我这样的无名小卒到敢于说这样的话，显然不是因为我比他们更高明。 |
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发帖数: 1 | 30 不是一天，大佬们也是两周内就有反应了，相当快了，现在韩的文章都发表两个月了？
: 我是说没有哪一个成名科学家读完小包房的论文在线预印本后敢立即公开说－－
我敢打
: 赌这文章基本结论错误。
: 像我这样的无名小卒到敢于说这样的话，显然不是因为我比他们更高明。
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发帖数: 1 | 31 方舟子清清楚楚写到国内外实验室私下同他联系：
“ 然而六月下旬开始，国内外有多家实验室在网上公开以及向我私下反映他们
重复不出韩春雨论文的实验结果，有的能重复出图3，但是那可能是假阳性，而
最关键的图4没有一家能重复出来” |
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j****n
发帖数: 3370 | 32 看完文章就立即公开说文章结论错误的
基本科学素养都没有
成名科学家怎么会犯这种错误
心中怀疑很正常 但公开说肯定要等到有确切的证据 |
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l*******1
发帖数: 16217 | 34 看你们这二道贩子文章 不如看底下英文UC伯克利是怎么耍臭不要脸的
专利局都说了张峰的专利在真核生物中有效 是一个separate case
UC 伯克利还在那意淫要所有细胞类型中的专利 你让美国专利局自己抽自己的脸吗
Appeals board clears way for UC Berkeley to receive patent on CRISPR-Cas9
gene editing
By Robert Sanders, Media relations | FEBRUARY 15, 2017
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y******m
发帖数: 143 | 35 不如写一个千年博侯老拿不到NIHfunding，一怒之写和整个科学界做对，重新编译
genomic code，从中发现地球其实是修真星的一个失败的实验场，用来研究发现提高人
体潜能的对象。而且哈佛和MIT等从多大牛主导的理论就是误导丛生的，博侯一怒之下
用crisper等基因改造技术对自己重新改造，从此走上了
人见人爱，花见花开的从地球打到宇宙的逆天修行的道路 |
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h*****s
发帖数: 153 | 36 看publication感觉也不是特别强，一作只有一片science，一片NC。。。而且都是PHD
阶段跟张峰发的。
是因为这个领域很火吗？
不是crisper这个领域的，所以不懂乱问问。。。轻拍 |
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h*****s
发帖数: 153 | 37 谁来科普下 crisper这个领域还有什么问题要解决 感觉这个领域太好发文章了 换个系
统就是cns 有点作弊的感觉 LOL
: 同类工作向来就是第一个人拿走大部分credit，这就是创新与跟风的本质区别。
那他个
: 人几年的成果和施一公整个团队几十年的成果比太不公平。
: 场，运
: ，也不
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h*****s
发帖数: 153 | 38 我们领域博士 薄厚期间各一篇nature methods/biotech/chem 基本上前20就能找到职
位了 别给crisper 和结构的那帮牛人给吓到 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 39 1st post be gentle please. checked not posted yet.
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w*******y
发帖数: 60932 | 41 Linking to BestBuy is always problematic for me. Go to bestbuy.com and
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Water line kit
Owner's manual
Product Features
Electronic controls
Quickly and easily adjust the internal temperature.
Twin Cooling system
Uses 2 evaporators to promote ideal storage conditions in the frozen and
fresh-food compartments.
Spill-proof shelves
Contain small spills and messes for e... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 42 Fry's B&M has the LG 47LW5600 for $799.99 plus tax. The price expires
tomorrow (6/2) so get in on it while you can. I bought this TV on Sunday for
$899 and just got 100 back for the price match.
Comes with 4 passive 3D glasses + Magic Remote + WiFi adaptor
Specs
Product Features
Enjoy amazing depth along with smoother, crisper images, and a clear picture
from virtually any angle with lighter weight, less expensive and more
comfortable glasses with LG's Cinema 3D (Included: Four Pairs of 3D Glass... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 43 LG 47" LED 3D TV 47LW5600 - $799 Fry's B&M (NOT in the weekly AD, could even
be regional)
Fry's B&M still has the LG 47LW5600 for $799.99 plus tax since last Friday
06/10. It was not on their weekly ad, but when you check it at the store,
it should show $799. I called again today (bay area) and was told this
hidden sale will end on Thursday 06/16.
This is the PLU #6535413 for this TV
I posted this in the middle of the other thread last week, but forgot about
making a new one, still new to ... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 44 to help promote their new fries, BK is giving out free fries at on December
16. Haven't been able to find an official announcement but it's on news
sites.
Burger King launches thicker fries amid competition:
http://www.reuters.com/article/2011/11/29/burgerking-idUSN1E7AS
(Reuters) - Burger King Corp, the second largest hamburger chain, has
changed its french fry recipe for the first time since 1998 as competition
from upstarts and traditional fast-food rivals mounts.
Burger King said it made th... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 45 Newegg has the ViewSonic PRO8200 HD 1080p 1920x1080 2000 Lumens Home Theater
DLP Projector:
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projector warranty and 1 year lamp warranty, whereas ... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 46 Seen this deal on sale before, but I think this is the lowest I've seen it!
Normal price is $949.00, and it's currently on sale for $300 off in cart -
and it comes with the free WiFi adapter ($60 Value).
Linky:
http://www.newegg.com/Product/Product.aspx?Item=89-102-546
About the UN40D6300:
Smart TV with Web-Connected Samsung Apps
Samsung Smart TVs allow you to easily search for movies, TV shows, browse
the web, explore Samsung apps, chat with friends and find many other types
of new interactive ... 阅读全帖 |
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w*******y
发帖数: 60932 | 48 Sears has this refrigerator with in door ice/water on sale Until Monday:
Kenmore 25.1 cu. ft. Side-by-Side Refrigerator w/ Ice/Water Dispenser
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Freezer Capacity (Cu Ft): 9.9
Height to Top of Case (In.): 68.87
Height to Top of Hinge (In.): 69.62
Overall Capacity (Cu Ft): 25.1
Refrigerator Capacity: 15.... 阅读全帖 |
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