S*****s
发帖数: 287 | 1 何必用 Kit，直接 CsCl 纯化吧。产率高很多，而且样品也很纯。我用 Clontech 的
kit 纯化出来的 BAC，如果再 setup CsCl 的话还能看到有很多杂质和 linear DNA。 |
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S*****s
发帖数: 287 | 2 我用两种 Kit，Clontech 的 BAC100 和 Qiagen 的 Maxiprep，纯化出来的 DNA 纯度
都不如 CsCl 的高。我用 CsCl 纯化的 BAC 放很久都不会有降解，跑电泳也不会看到
smear，但是 kit 纯化的 DNA 就不行，放两三个月跑个胶就能看到降解的 DNA smear
了。 |
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g****g
发帖数: 1828 | 3 地震后对日本及其国民的一些历史回顾和思考 2011-03-22 18:28:18
日本岛屿多地震，老百姓是忍者神龟，其政府在美国的庇护下，有发展核武器
与中国叫板的冲动和可能行动。这次地震和海啸以及核泄漏给日本国民自己和全世界的
平民百姓，带来很多危害和不幸。日本东部由于有CsCl同位素的环境污染，对日本有
300年的潜在威胁，让全世界的人都害怕，更不要说日本本国。这其中有多少政府行为
和企业行为，只有联合国相关部门在没有美国干涉下进行调查才能搞清楚。
日本在美国的帮助下，依靠自己的勤奋和努力，国家进步很快，人民生活不错
。中国有许多移民在日本幸福生活，这都是事实。他们对两国之间的历史和现实恩怨，
不太会上心，因为跟他们日常生活没有多少关系。这就是“只缘身在此山中”的原因。
尤其日本还保留大量中国唐代的建筑和习俗（譬如茶道，佛教和一些文学绘画的保留和
继承），给中国人很亲近的感觉。但是中国在日本人心目中的地位，在清朝及以后，慢
慢变得很低下；尤其是近代日本的脱亚入欧，和清末中国国力的没落以及日本侵华，中
国及其国民在日本人心目中更是没有地位。... 阅读全帖 |
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l******e
发帖数: 3426 | 5 拿到一份报价，现在打算先试试散货，
深圳到波特兰的散货报价：USD60/RT+CFS:RMB40/RT+DOC:RMB300/BL+CUS:RMB320/BL+
AMS:USD25/BL+DDC:USD28.1/RT 1截6开 3截2开 4截3开 预配CSCL/MOL /CMA LA转
大概20-22天到
头程1CBM=1000KGS 2程1CBM=363KGS
美国还有一个ISF费用（10+2），费用是USD35/BL,如果交我们申报的话，要收取USD35/
BL,客户自己申报就不用收取（建议客户自己申报）
运费是60美金/rt 进仓费是40rmb /rt 文件费 300/票 报关 320/票 ams usd25/票
没看特别明白，大牛们，看看这个报价有没有不靠谱的地方。
出了这些费用，我是不是还得自己找清关行，然后自己交码头的钱提货？ |
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u*******n
发帖数: 2396 | 6 CARGO NAME :Benzyl ALCOHOL（NO DANGER）
1*20GP （20T)
HS CODE :2906210000
船公司：CSCL/PIL
集装箱拖车 |
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m********5
发帖数: 509 | 7 这是我今天看到用China Shipping:
Vessel: CSCL PUSAN V.0083E
Closing date: 11/02/12
ETD Ningbo: 11/04/12
ETA LAX: 11/17/12
Rate: US$2,465.00/40', US$2,515.00/40'HQ & US$3,090.00/45'HQ via China
Shipping. |
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h*******0
发帖数: 14 | 8 那你用什么方法大提质粒的？我用Qiagen的柱子却大提不出来，小提没问题，后来用
CsCl的老方法，提倒是提出来了，产量还是不高。请教一下。谢谢。 |
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p*****y
发帖数: 44 | 9 Transfect HEK cell to produce retro virus. 260:280=1.9 Qiagen大提的质粒
效果不怎么好，尤其试用VSVG做envelope protein, 请问有没有别的方法提高DNA纯度？
文献说CSCL最好，但是太麻烦。试过醋酸钠重新沉淀，酚，氯仿抽提一下，纯度没见到
变化，再转染，不产生病毒了！
求其他纯化方法！ |
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h****n
发帖数: 2552 | 10 对,CSCL获得的quality是最好的，其次用传统手工大提-也就是酚氯仿。最不建议用kit
，提出来的质粒不stable而且quality也不好。 |
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a***e
发帖数: 1010 | 11 我做过 5 年的 CsCl 大提, 没那么烦.
度？ |
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p*****y
发帖数: 44 | 12 搂主能不能发一份CsCl 大提的protocol到我的邮箱? 先谢了。
我就是看要离心OVERNIGHT就没去做了。 |
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j****g
发帖数: 406 | 13 看你的目的了。如果只是为了做PCR的template,那么很简单，Qiagen kit里的p1, p2,
p3buffer加后直接加isopropanol沉淀，再用ethanol洗两次就可以了。保证不会丢。这
个方法可以在CHORI的网站上找到。
我们实验室一般用来打老鼠，这就需要CsCl纯化。虽然步骤挺多，但是做熟了也很简单
。而且质量会好很多。 |
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S*****s
发帖数: 287 | 14 年轻人说话不要太刻薄。我的帖子里写的蛮清楚，这个 Tech 是作为 Tech I 收进来的
。我在美国呆过三个学校，Tech I 都只要是有生物类专业的本科学历就可以，不需要
有任何技术背景，招进来之后再教他具体的技术。这样的背景和 lz 帖子里的这位小弟
应该差不多。仔细看看 lz 帖子里的描述我手下的这位还要强一点，起码他刚开始做
western 就能做出结果来，犯错误大都是因为粗心。我带他一年他 Western blot,
CsCl Purify, Immunohistochemistry, BAC recombineering 都能独立做，结果都是可
以拿出来发表的档次。Real-time PCR， Confocal Microscropy 和 Flow Cytometry
我也让做过几次，结果也还说得过去，就是不能稳定重复而已。如果不是因为实验室内
部的 Politics 按我的计划现在应该让他做动物实验给小鼠记脑电图了。这样的进步速
度再有半年应该能让他升级到 Tech II。我发帖不过是和 lz 分享一下怎么样带小弟而
已。你最后一句的水分太大。我这里把我徒弟的能力描述的... 阅读全帖 |
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S*****s
发帖数: 287 | 16 我的 BAC 是 CsCl Purify 的，不过最后一步用 Pierce 的 dialysis cassette 对 TE
做透析，然后用离心柱缩小体积到 500 微升左右，浓度大概在 500 ng/ul 左右。如
果沉淀之后再融解浓度可以更高，不过容易把 DNA 搞断掉。 |
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a*****s
发帖数: 838 | 17 Need to separate some virions with Sucrose ultracentrifugation (PI said we
don't need to do CsCl :( - that would have been easier to search for
literature if so). Anyway, I did some trial runs. My goal is to separate the
samples to several layers (if there is different shape of viral particles).
Then collect the layers and run on western blot to see and compare.
take I : 17300 rpm at 4C, x 90 min --> no separation
take II: 30000 rpm at 4C, x 90 min --> no separation
take III: 30000 rpm at 4C, x ... 阅读全帖 |
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b******s
发帖数: 1089 | 18 Kit好用，但是很贵。一个盒子里没几个柱子。
我要做BIFC，有很多组合，需要提很多plasmids。想自己提纯。网上搜了一些protocol
，基本上都是盐沉淀之后酚氯仿纯化。试过发现转染效率都极低。我用的系统是植物的
protoplasts，有实验室用CsCL离心效果很好。想问问有没有更清洁安全的protocol？
谢谢 |
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k****l
发帖数: 279 | 19 cscl centrifugation if the GC content is different |
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m*********D
发帖数: 1727 | 20 考虑一下比较老的方法：Traditional Methods for CsCl Isolation
of Plasmid DNA by Ultracentrifugation |
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n****0
发帖数: 696 | 21 If I have a solution of multiple components (CsCl, MgCl2, CaCl2, Hepes-Tris,
EGTA and sorbitol) and I know their concentrations (mmol/L), how to
calculate its somolality (mmol/kg)?
Thank you so much. |
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h****y
发帖数: 77 | 22 谢谢回复，刚发的时候来看了几次结果发现没人回就没怎么来看了。
我是在voltage clamp条件下（－80mv及＋40mv）记录EPSC，溶液用的是大部分都用的
胞外溶液外加picrotoxin以block掉GABAergic neurotransmission，那个我们实验室一
直用，应该没什么问题，osmolarity 在305－310之间，电极液用的是CsCl溶液，加入
了TEA, QX-314，以便block K＋和Cl－通道，然后用了比较高的EGTA做Ca buffer，因
为我不需要看plasticity，实际上是希望能避免掉plasticity发生。osmolarity是275
，ph7.3，这些也是文章上用的配方，我感觉应该没什么问题。
我的记录方式是，现在－80mv条件下刺激产生一个清晰稳定的EPSC，过数分钟感觉比较
稳定了之后开始降低刺激强度（调整刺激输出电流），知道到某个点刚刚刺激产生一个
单个的突出反应，或者没反应，连续刺激就会有时候产生反应（通常是单个的），有时
候完全没反应，这样我就可以计算failure rate，记录完成后把voltage clamp... 阅读全帖 |
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