t******k
发帖数: 599 | 1 问一个很脑残的问题，如果我有7个样品，4个control和3个ko来作qpcr比较基因a的表
达。我先算每个样品中a相对于reference gene的deltaCt，然后计算出control中a的
deltact平均值和sd，跟ko中a的deltact平均值和sd。根据abi的protocol我可以用
deltact的sd到deltadeltact中，那么最后我计算的power2里面sd怎么算呢？作柱状图
的时候显示的error bar又是啥东西哎？
这个问题想了很久了，看了网上各种材料也没用。如果是开始就control和cko配组的实
验我最后会计算每组power2在一起的sd,可是现在不能配组就不会算了。。。。。 |
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s**********r
发帖数: 1120 | 2 我用SYBR做QPCR检测细胞中shRNA的表达．因为对照细胞的CT没有数值（ＮＴ），所以
只能算deltaCT,(用U6miRNA做control)．我的shRNA的CT分别是29.43,31.56, U6 CT分
别是29.84,29.74，deltaCT就分别是-0.41, 1.82，对吧？那做图的时候直接用这个数
值就行了，还是要计算2(-deltaCT)？有明白的同学给解释一下吧，非常感谢． |
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l***s
发帖数: 841 | 3 DeltaCt以后就晚了。因为是测量误差，应该首先address。 我们的做法是：对于每个
基因，取duplicated Ct平均值，然后算deltaCt。因此最终只有一个deltaCt值。 |
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u*******g
发帖数: 224 | 4 是个新试剂盒, 碰到的问题似乎 tech support 的人也支支呜呜不太懂…
Manual 里说的 3 个实验条件之二 “The deltaCt between the undigested
reference gene and the undigested control gene is <=1.5” 这可能实现吗? 因
为 reference gene 和 control gene 的 primer sequence 不同, 它们的
performance 肯定不一样, 他们的 Ct 值怎么可比呢? 除非公司特意选了perform一样
的 primer sequences . 但我的实验中 这两个Ct 值相差很大.
Any experience? Many thanks! |
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m***o
发帖数: 272 | 5 对照组是wt老鼠，在wt组内有1-3倍差别。在run另一块96孔板时，又有另一组的wt老鼠
，怎么可以把这两块板上的数据放一起统计呢？是不是下次再跑realtime PCR的时候加
一组以前做过的wt老鼠，就有一个对照了？
另外同一个cDNA，已经跑过normalization gene，需要测别的target gene，可以把上
次的normaliztion gene的ct值直接拿过来跟这次的target gene 做delta deltaCT 计
算吗？
请指教，谢谢！ |
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