e****s
发帖数: 1125 | 1 加DTT或者TCEP有什么不好吗？
既然在DTT/TCEP的条件下稳定，就这么提啊。我们实验室提取蛋白一般Buffer都放1-
5mM DTT。如果DTT对下游试验会有干扰，用以前脱盐或者Dialysis就好了。 |
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s****a
发帖数: 436 | 2 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: sevana (dreamer), 信区: Biology
标 题: 请教问题：DTT在T4 ligase， ATP中的作用是什么？
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 17 21:16:26 2010, 美东)
最近做DNA ligation. 请问大家，DTT在T4 ligation 中的作用是什么？查了资料，DNA
ligation中主要起作用的是ATP 和 Mg2+. DTT是不是起到保护ATP，防止其被氧化的
？请问有专门的文献介绍DTT的作用么？Thanks. |
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M********t
发帖数: 5032 | 3 瑞典科学家的神研究
驱蚊只需要床头放只鸡?
新浪科技
ugmbbc
13小时58分钟前
关于如何预防疟疾，科学家们可谓是绞尽了脑汁。最近，来自瑞典和埃塞尔比亚的研究
人员提出一个预防疟疾的新方法：床头放只鸡，或伪装成一只鸡。人们早已知道由蚊子
是传播疟疾的主要媒介，如何有效地驱蚊避蚊是防治疟疾的重要一环。瑞典人Paul
Hermann Miller因为发明了为解决疟疾作出卓越贡献的DTT而被授予诺贝尔奖，但后来
人们发现DTT对环境有巨大的破坏而放弃了。
此后人们一直在寻找安全有效的避蚊方法，灭蚊剂和蚊帐是目前主要的方法。
瑞典农业大学（Swedish University of Agricultural Sciences）的化学生态学家
Rickard Ignell领导的一个研究小组最近做了一个脑洞大开的实验。
研究人员先在疟疾高发的埃塞尔比亚的三个村庄中捉了几千只蚊子，这其中绝大部分（
98.5%）都是阿拉伯疟蚊（Anopheles arabiensis）——一种在撒哈拉沙漠以南的非洲
传播疟疾最厉害的蚊子。
他们分析了这些蚊子吸食的血液，发现在室内捕捉的蚊子吸食的大部分（69%）... 阅读全帖 |
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s****a
发帖数: 436 | 4 最近做DNA ligation. 请问大家，DTT在T4 ligation 中的作用是什么？查了资料，DNA
ligation中主要起作用的是ATP 和 Mg2+. DTT是不是起到保护ATP，防止其被氧化的
？请问有专门的文献介绍DTT的作用么？Thanks. |
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o****e
发帖数: 1011 | 5
广义说来，浓度再低，DTT也都有还原能力。
浓度主要影响的是反应速率。一般情况是浓度越低，反应速率越慢。
除了反应物(DTT，-S-S-)的浓度，影响这个反应的因素还很多，反应时间几分钟、
几小时都有可能。比如pH对DTT的还原性能影响很大，pH10一般要比pH7要快很多；
另外比如小分子的disulfide bond一般比"包在里面的"、大分子里的要容易反应。
当然，条件许可的话，升温也能加速反应。 |
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f**********r
发帖数: 91 | 6 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: flyingwisher (flyingwisher), 信区: Chemistry
标 题: 请问：DTT 还原/断裂二硫键（disulfide bond）时反应条件，谢谢了。
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 8 12:53:37 2011, 美东)
PH>7. DTT如果浓度在0.5mM，有还原能力吗？这种还原/断裂反应一般需要多长时间
？谢谢了。 |
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k******0
发帖数: 1073 | 7 试图纯化protein phosphatase PP1 复合体，蛋白质在1mM DTT （含Mn离子），但过了
3，4天，蛋白质开始沉淀，此时加入更多DTT，蛋白质又稳定了。发现Pp1有13个
cysteine，没有双硫键，可能是这些cysteine crosslink蛋白质。
TCEP可以保持蛋白质更长时间。尝试5mM，不知蛋白质能稳定几天。正在检测中。
有没有xdjm有纯化PP1的经验，如何克服这氧化的问题？是否可以alkylate 这些
cysteine？ 多谢解答。 |
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p******h
发帖数: 68 | 8 因为我用这个含有thioamide的化合物做抑制蛋白活性试验， 发现DTT会影响。
所以怀疑是不是它能与DTT反应。这个C=S容不容易被还原呢？ |
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c******n
发帖数: 16403 | 9 thioamide不容易被还原， 容易被氧化。 你的DTT质量好么？ 如果DTT已经形成了二
硫键， 说不定它把thioamide氧化了。 |
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n*****e
发帖数: 40 | 10 DTT是还原剂。一般的DNA ligase都喜欢还原性的环境。DNA ligation的buffer里面一
般都添加DTT是为了ligase的稳定性。
DNA |
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b******e
发帖数: 182 | 11 TO gjbaby, dtt: You shoudn't go to New Haven to water just for mm
TO chord, hahaxiao, etc: Come to Carolinas. We need much more water
than New Haven
TO margie, qso: Disable the above waterer. |
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e*****s
发帖数: 218 | 12 刚刚搬到米州，暑假想回国去，发现DTT到上海的机票都在1700左右。太可怕了！
大家都是这个价格订票的么？ |
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y****g
发帖数: 5 | 13 问题都是大家提到过的
1. 怎样对待不容易相处的同事
2. 怎样在短期中做好某件事，达到别人的期望
3. 短期内你有好多任务，你不可能完成，怎样安排你的时间
4. 怎样说服别人接受一个他/她不喜欢的角色
大概15分钟，闲聊30分钟，主要Manager说她的经历和客户。
Pre-interview的时候，不像social时那么自由，吃饭比较正式. DTT ppl坐一起，没怎
么聊天，吃完饭9点了，他们就说了下明天谁面，Pre-interview就这样结束了。我觉得
没机会，Nice to meet you. Talk to you tommorrow.是我和Senior说的仅有的两句话。
个人感觉比较幸运吧，希望我这周on site的时候同样好运。
感谢大家在这个版上提供的信息！ |
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d*****h
发帖数: 936 | 14 I started with DTT last Fall. At my local office, three people in my level
got let go today. We all know it would happen after busy season. But it is
only Feburary...It sucks!
I heard HR sent out email last night and asked these people to take computer
back.
So things don't look pretty. Good thing is the firm is still hiring.
Remember, big 4 is like a pyramid. They always need people staying in bottom
and working hard..
Good luck you guys... |
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x***3
发帖数: 1708 | 15 I have to say even partner is not safe. I heard that DTT let some partners
go in past Jan .... |
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i*********y
发帖数: 226 | 16 你们说的都是dtt吗？
还有下次可不可以明确州和audit or tax？ |
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H********y
发帖数: 45 | 17 DTT Switzerland还好，目前没见裁人，tax还在recruiting
UK office裁了不少，从audit到tax |
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c********e
发帖数: 4 | 18 lol, busy season都需要coffee来撑着~~~
今天email也没来，又迎来了心惊肉跳的下一周，快崩溃了！！！！
估计版上DTT的都会有这样的体会，哎...
雷。 |
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H****3
发帖数: 618 | 19 有认识的朋友在E & Y，DTT(VA)，KPMG(NY)的都被裁了，唉 |
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i*********y
发帖数: 226 | 23 ☆─────────────────────────────────────☆
dttfish (dttfish) 于 (Fri Feb 6 23:41:28 2009) 提到:
I started with DTT last Fall. At my local office, three people in my level
got let go today. We all know it would happen after busy season. But it is
only Feburary...It sucks!
I heard HR sent out email last night and asked these people to take computer
back.
So things don't look pretty. Good thing is the firm is still hiring.
Remember, big 4 is like a pyramid. They always need people staying in bottom |
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i*********y
发帖数: 226 | 24 ☆─────────────────────────────────────☆
ygking (ygking) 于 (Sun Oct 14 18:18:56 2007) 提到:
问题都是大家提到过的
1. 怎样对待不容易相处的同事
2. 怎样在短期中做好某件事，达到别人的期望
3. 短期内你有好多任务，你不可能完成，怎样安排你的时间
4. 怎样说服别人接受一个他/她不喜欢的角色
大概15分钟，闲聊30分钟，主要Manager说她的经历和客户。
Pre-interview的时候，不像social时那么自由，吃饭比较正式. DTT ppl坐一起，没怎
么聊天，吃完饭9点了，他们就说了下明天谁面，Pre-interview就这样结束了。我觉得
没机会，Nice to meet you. Talk to you tommorrow.是我和Senior说的仅有的两句话。
个人感觉比较幸运吧，希望我这周on site的时候同样好运。
感谢大家在这个版上提供的信息！
☆─────────────────────────────────────☆
norrington (ABC) 于 |
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a*****e
发帖数: 14 | 25 收到下周五DTT的一个on site，是audit。不知道有没有前辈能指教一下怎么准备，自
己面试一向很烂，很想抓住这个机会。大谢！ |
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M*******e
发帖数: 1633 | 26 拿到了2个offers，
EY是DSG
DTT是GES
有没有知道的jms，那个tax比较好一些？比如客户，工作量，跳工业界什么的，多谢啦
！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 27 DTT是还原二硫键用的，一般用来保护蛋白不形成oligomer。在这里估计是用来保护T4
DNA ligase的。 |
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s******e
发帖数: 1073 | 28 4 度情况下，
大肠杆菌表达的蛋白，可能形成了蛋白间二硫键， 以至于在柱层析时表现不好，我想
得到均一的蛋白，不想让蛋白变性，求教如果加入DTT的话，可以打开已形成的二硫键
吗？ |
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s******e
发帖数: 1073 | 29 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带，说明是二聚体吗？二聚体是不是会比
较容易打开？DTT的浓度多大为好呢？
谢谢！ |
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g*****p
发帖数: 451 | 30 这个基本上不太可能是蛋白表达时生成的(如果你真的发现蛋白间有二硫键的话）
E.coli在细胞胞质里有thioredoxin,glutathione等还原系统
除非你的蛋白是membrane protein或者secret 到periplasm才会有DsbG等系统把二硫键
形成
如果是因为aging形成的缘故，加0.1-0.5mM TCEP/1 mM DTT/5-10mM belta
mercaptoethanol
(价格由高到低）就可以了 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 31 if you don't add dtt in loading buffer,
you could see dimer.
I AM doing this experiment now... |
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d*******d
发帖数: 1341 | 32 ■求助：DTT（Dithiothreitol）粉末在室温放了一天左右，期间会被氧化多少？粉末
在瓶子里，有盖。多谢各位！ |
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d*******d
发帖数: 1341 | 33 多谢两位啊，DTT是用来做蛋白质聚沉实验的，也算requires accuracy吧，不知道影响
会不会很大啊，比如超过5%之类的？ |
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b******y
发帖数: 627 | 34 Not sure what is 蛋白质聚沉实验? What is DTT there for? Just for a reducing
environment? If so, no problem. |
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k******0
发帖数: 1073 | 36 没有不好，我只是想蛋白质能够稳定更长时间，在金属离子存在的情况下DTT很快就被
氧化了。蛋白质氧化了引起聚集沉淀。
蛋白质在结晶过程不好不断加还原剂。 |
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b******y
发帖数: 627 | 37 DTT and BME are intrinsically unstable in aqueous solution. They will die
out within days. Use TCEP as it is more stable. After crystal trial is setup
, the system will be isolated in terms of O2. Further oxidation is prevented
. If you use high concentration of TECP, make sure to pH it right as it is
very acidic. |
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p******h
发帖数: 68 | 38 就是说这个thiomide键能够被DTT打开么？C=S之间？ |
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p******h
发帖数: 68 | 40 不是的。dtt 对蛋白没影响！
我的问题就是想问问化学家们： thioamide中的C=S能被强还原剂还原么？不考虑其他
的因素 |
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h*****t
发帖数: 1226 | 41 not so easy to be reduced by DTT
what's the concetration of FTT, whether it could affect your protein? |
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p******h
发帖数: 68 | 42 DTT: 5mM,
thioamide compound: 10uM-1mM |
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p******h
发帖数: 68 | 43 谢谢啊，这个可以考虑一下。检查一下stock的1M的DTT会不会氧化 |
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c******n
发帖数: 16403 | 44 啊， 这个dtt你们都是用stock的solution？ 我当年都是现配。 |
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u***l
发帖数: 2997 | 45 可能是形成二硫键了。溶液除氧了么？Thioamide可以异构化，双键移到氮上，变成烯
胺上接一个巯基。有氧的情况下，可以自身成二硫键，也可以和DTT成二硫键。加点
TCEP试试。 |
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f**********r
发帖数: 91 | 46 PH>7. DTT如果浓度在0.5mM，有还原能力吗？这种还原/断裂反应一般需要多长时间
？谢谢了。 |
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s**********4
发帖数: 82 | 47 加点碱， TEA或者DBU啥的，半小时就够了，只要你DTT量够。 |
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j***i
发帖数: 61 | 48 看氧化还原电势啊
DTT的如果我没记错是-330mV
蛋白的二硫键很少有低到-300mV的
pH 7.5-8.0室温一小时足够了
不放心就37C |
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o********t
发帖数: 1655 | 49 [环球动向] 美国Edmunds.com网站日前统计了美国市场上销售速率最高的十大热门车
型，2014年款路虎揽胜 (详情 图片 报价)折桂。
Edmunds.com将周转天数DTT（Days To Turn）作为衡量标准，即一辆车在经销商处
需要经过多少天会被售出。今年11月份，平均每辆路虎揽胜交付经销商后9天即交付买
主。路虎揽胜运动版也同样热销。
十大销售最快热门车型中，宝马、梅赛德斯-奔驰、奥迪、路虎等豪华车占去一半
席位，而Jeep自由光凭借新车势头进入前三，通用汽车旗下雪佛兰科尔维特跑车也位居
前列。其余席位被日系车瓜分。
行业平均DTT天数为59天，平均折扣比例为10.54%。而十大热门车DTT均不到平均水
平的三分之一；由于热销，折扣也不及平均水平的一半。路虎揽胜甚至需要加价提车。
所有车型平均售价为32,852美元，而十大热门车中只有三款低于该数值。路虎揽胜价格
为108,367美元，达到平均水平的三倍。
以下是这十大热门车盘点。
第十名：三菱Mirage
DTT：18天
售价：15,430美元
折扣率：5.20%
第八名（并列）：奥迪Q5 (详情 图片 报价)
DT... 阅读全帖 |
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a*****f
发帖数: 8 | 50 再简单说说我岳父母的签证过程:
其实他们条件不错.我岳母来过2次美国,一次99年公务到加拿大开会,在美国呆了
一个礼拜,第二次2001年底来参加我LP的毕业典礼,由于工作忙,只呆了一个月.
岳父为一个单位的技术负责人,没有来过美国.现在2人都退休了,但还都在干活.
岳父返聘,岳母在一个协会任职.
第一次为今年3月15号,可恨的是又碰上了DTT.
DTT: 去美国干什么?
MOM: 去看我女儿女婿.
DTT: 你有几个子女?
MOM: 就一个女儿.
DTT翻材料,岳母说翻着翻着就看他皱了下眉.
DTT: 你哪年退休的?
MOM: ..年.
DTT: 有房产证吗?
MOM: 有.. (递上)
DTT: 我不能给你们签.
MOM: 能告诉我理由吗?
DTT: 我自己就能决定你们去了美国就不会回来了. (NND)
分析: 1. 碰上DTT,简直就是希望渺茫.
2. 材料顺序很重要.无关材料不要放进去. 象我们的情况,转过身份
J-2 --> F-1 --> H-1 还把原来J-2时的I-94也包括进去了.
估计DTT就是看到I-94上大大的J |
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