s*********y
发帖数: 579 | 1 我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
到ERT2 site。 |
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s*********y
发帖数: 579 | 2 我把两个feamale（一个是Cre,一个是Cre-ERT2）在一个cage 里harem breeding。结果
两个的Ear tag 都丢了，我现在需要知道哪个是ERT2 的。所以想用tail genotype.
这个上面http://www.addgene.org/14797/
只给出了cre site，没有说哪个是ERT2. |
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i*********0
发帖数: 915 | 3 bro, 你的sunday算是毁掉了。不同的line，你居然可以在一个cage里面。一王二后也
不是这么玩的。
cre的female和cre-ERT2的female的offspring你还是要做genotyping。
Cre-ERT2的parental plasmid可能都是一样的，你去google 一下做个引物看看吧。
要是老鼠怀孕，没有生产的话，赶快分开！ |
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f*******a
发帖数: 671 | 4 有人发现cre/ERT2 在成熟的male和female里面效率不同吗？我发现雌老鼠老像比雄的
效率高很多。是我的老鼠特殊吗？ 有人发现同样问题了吗？是因为ERT2和雌激素作用
了吗？ |
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m******5
发帖数: 1383 | 5 addgene找两个带ert2的plasmid 找addgene测的序列 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 6 qPCR mouse tail tissue extraction DNA
pls refer,
>The SM22aCre-ERT2 mice (Kuhbandner et al. 2000) were generously provided by
Robert
Feil (Interfakulta¨res Institut fu¨rBiochemie,Universita¨tTu¨bingen,
Germany). SM22a protein binds actin and contributes to
smooth muscle contractility ( Je and Sohn 2007; Assinder
et al. 2009) and is expressed specifically in adult smooth
muscle cells of the vasculature and viscera. Genotyping
primers used are listed in supporting information,Table S1.
Genotyping ... 阅读全帖 |
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t******k
发帖数: 599 | 7 我有一个line是cre-ert2 A／gfp reporter。现在需要cre－ert2 B／gfp reporter／
floxed gene。因为lab里已经没有gfp reporter老鼠，那我可以genotyping cre-ert2
A／gfp reporter，用cre-ert2 A negative／gfp reporter的老鼠去和cre－ert2 B／
floxed gene直接cross么？所有老鼠都是b6 background，那我还需要考虑cre-ert2 A
／gfp reporter会有background问题么？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 8 不谢 都考古未名买买提 Bio 版的最近旧贴 得到的启发 没那些帖 俺就是一个Cre
mice 科盲
比如
楼主可以 结合楼下的跟贴
和以下的贴主 交流下 ERT2-Cre Mice genotyping Tips...
发信人: supersunday (Linda), 信区: Biology
标 题: ERT2怎么genotyping?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 15 18:54:44 2013, 美东)
我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
到ERT2 site。
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31772553.html |
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z****u
发帖数: 1007 | 9 ERT2 。。据说比ER 好。更强效，更特异。
tamoxifen induce的问题在于不会彻底，比如K14-Cre ERT2 在身体不同部位皮肤的诱导效
率就不一样。从30%到 60不等。所以这个诱导后更像是生成一个mosaic.当然了，有人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
tamoxifen有毒性。剂量需要optimize。我目前做的一个Cre-ERT2 就遇到这个麻烦，在E18
.5打标准剂量Tamoxifen后所有embryo都会在出生后一天内死掉。 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 10 这个东西pcr是不是很tricky?
试了两对primer, 都出来一条1kb的，难道PCR的时候出现重组了？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 11 不能一棍子打死，现在同一个promoter-Cre的line有好几个实验室在做，每个实验室又
有好几个line，有一个或者几个line不管用很正常。
我们实验室用的一个cre ERT2就挺好的。我们隔壁实验室的cre用了三个没有一个好用
的。
tamoxifen induce彻底不彻底主要还是看tissu和cre的 line，我们在相关部位的KO达
到90%以上。
选line的关键就是知道自己具体想干什么，多看paper，认真比较不同的line。这最后
一句是老板说的。 |
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i*********0
发帖数: 915 | 12 就genotype cre就可以了。大部分的cre的primer序列都是一样的。Jax lab的网站上有
。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 13 non-inducible 和 inducible的Cre检测的方法没啥差别，对于systemic和VE-Cadherin
都是一样的检测方法。
但是如果是Lyscre，PDGFb Cre，CIVE Cre， Tie2-CRe都是不一样的。 |
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s*********y
发帖数: 579 | 14 I alreeady seperated them. But don't which is which now. |
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D*a
发帖数: 6830 | 15 问作者要，如果作者没有，就查这个老鼠的文献的引用文献的引用文献的引用文献，总
能找到plasmid的构造的，然后分别设计引物就行了。
其实既然你们有两只老鼠，最好是用能区别开两只老鼠的genotype的引物，否则你不知
道一阵子之后是不是还有这种问题。有时候老鼠房给你们弄混了也不是不可能。所以也
不算浪费时间。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 16 我的经验是，cre- ERT绝不是文献里那样说的理想的，depends on tissue type,age,
reporter efficiency. 我用的某个line, 在毛发里就有leakage expression. 在我研
究的组织里没有。 然后如果用很敏感的fluorescent reporter就能看到leakage ,但如
果用rosa26-LacZ reporter就看不到。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 19 leak or not跟第几代ER有关的，早期的就很不好。 |
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f*******a
发帖数: 671 | 20 Thanks. Have you seen differences between males and females?
, |
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S******9
发帖数: 2837 | 22 adult和P1打针的male mice生殖外观有区别吗？
我最近做的P1打针的外观和以前成鼠差异还颇显著的，不过是小数量的几窝，还在观察
中 |
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发帖数: 1 | 24 不能是所谓“前瞻性造假”吗？
[在 jiaokeshu (SB-ERT2-Cre) 的大作中提到：]
:有的人评价自己不懂的东西真有底气
:cMyc和Smad的相互作用也敢说没用。
:这篇文章的大结论也被很多更牛的lab用更solid的方法验证了
:funding， |
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s*********y
发帖数: 579 | 25 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
经完全代谢没了？
2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
谢谢！ |
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S**********e
发帖数: 620 | 26 tam只要和ert2结合就可以马上带领cre去咬loxp，其实都是一次搞定，不要太久不要太
多，否则副作用大，5天其实偏多。
还有tam必须通过肝脏变成4oh-tam才有效果，所以通过皮肤必须用4oh-tam |
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y**h
发帖数: 3093 | 27 说明根本没重复实验
否则早该发现了
还鸡巴表彰
[在 jiaokeshu (SB-ERT2-Cre) 的大作中提到：]
:看起来像是自己发现可能是artifact撤稿的
:这种retraction应该鼓励表彰 |
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