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C**S
发帖数: 522 | 2 Ficoll的密度是定好的。percoll买来是纯的，根据自己需要稀释。 |
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C********4
发帖数: 308 | 3 用 Ficoll
一种溶液 铺5ml在15ml试管里面，上面小心地铺上1ml你的悬浮细胞（原来的体积太大
，先离心一下，去掉一部分上清）。1500rpm 离心5min，注意选择离心机最慢速停止的
那种
死细胞沉淀在下面 ，活细胞在溶液里面。再pbs或者培养基洗涤一下活细胞，因为活细
胞不喜欢ficoll。
继续培养即可 |
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C********4
发帖数: 308 | 4 对的 我的意思就是 ficoll， 这是一种溶液，多聚蔗糖之类的大分子....实际上就是
密度梯度离心。常用来分离血液细胞们的。
我一般就用这个，快速又便宜。注意离心刹车速度，要选无档的
貌似还有一种kit Dead Cell Removal Kit # 130-090 101 MiltenyiBiotec公司
可能比ficoll贵或者更好 ...我看有人用过，但是我自己没用过 |
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f******s
发帖数: 440 | 5 我们用EDTA in HBSS to obtain cells
然后数
你还要继续分的话，用Ficoll-Paque gradient?
再要提macro的话，FACS sorting？ |
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s*****g
发帖数: 7857 | 7 在细胞量大而死细胞多时用Ficoll centrifuge分离.得到悬浮的活细胞.
而量少时就要耐心等待.慢慢长多了,再传代.否则有限的活细胞会丢失很多. |
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s*****g
发帖数: 7857 | 8 Ficoll solution SIGMA 就有卖的.我们就用它. |
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g*********5
发帖数: 2533 | 9 请问您用的是sigma的F4375 Ficoll® PM 400 - Type 400吗？
溶液浓度是20%吗？溶液配好后是autoclave还是filter？谢谢 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 10 请问您用的是sigma的F4375 Ficoll® PM 400 - Type 400吗？
溶液浓度是20%吗？溶液配好后是autoclave还是filter？谢谢 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 12 Please go to
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2518226/
>Overall, our results suggest that PUB22 and PUB23 coordinately control a
drought signaling pathway by ubiquitinating cytosolic RPN12a in Arabidopsis.
Subcellular Localization
The sGFP cDNA clone was fused in-frame to the 59 end of the full-length
PUB22 and PUB23 coding region and ligated into the pBI221 transient
expression vector. The sGFP-PUB22 and sGFP-PUB23 fusion constructs
were transformed into protoplasts prepared from wild-typ... 阅读全帖 |
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d****i
发帖数: 2346 | 13
你这里说的“一种溶液”就是FICOLL吧？非常感谢！ |
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i*****g
发帖数: 11893 | 14 多谢了，Ficoll能去除
一般都是dilution了事 |
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S*********l
发帖数: 783 | 15 借宝地吐一下槽，也求安慰！
我最近才转到一个小实验室，一个tech，一个临床fellow，但是在实验室呆了2-3年了
。tech为白女，很精明很bossy，fellow为犹太女，每周五在临床，其他几天在实验室
晃，没有多少实验经验，但是很能说。这两人已经共事2-3年吧，看上去很关系很好。
大家可能会说这样的实验室我也会去？唉，苦逼博后，已经EB1a拿到绿卡，但是想到东
岸机会多，而且小孩还比较小，不想太快搬家。所以在急着找位置的时候就进了这个地
方。
新实验室有不少protocol跟我以前的都有些细微的差别。比如Ficoll之后不用ACK
buffer，或者小鼠spleen 用ACK 只用2分钟（但是我看她们的flow 确实看到有RBC的
population），或者染细胞的时候buffer 用100ul 而我通常用50ul。我觉得也没什么
大的区别，抗体浓度以致就可以，也没有特别的重视。
结果昨天我在这边做第一个比较大的实验，我也轻车熟路地按照自己脑子里的步骤在操
作，结果旁边看的犹太女问我加了多少buffer，我也没有和她顶，心想你看到了那我就
再加50ul吧，结果犹太女马上就说“... 阅读全帖 |
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