Q**********r
发帖数: 214 | 1 真的比FITC, alexa fluor什么的好吗？
如果好的话我就order一批quantum dots标记的2nd antibody了 |
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s****l
发帖数: 395 | 2 看cell death的话，一般发文章有annexin V的数据就够了，买个FITC conjugated的，
很好用，7-AAD或者PI搞multi-color staining有点难度 |
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w*********n
发帖数: 439 | 3 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
然后做FACS。
发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
多谢， |
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m******5
发帖数: 1383 | 4 有一个protocol是用FACS-Gal一个荧光底物，被LacZ催化后释放出FITC，
看着不错，而且针对活细胞，不过确实在细胞suspension后多了一步处理，而且背景可
能会比较大 |
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m*********n
发帖数: 215 | 5 见链接页最下面的Compatible Secondaries for GFP antibody
我们用的是goat anti-chicken FITC
conjugated
IgG |
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L***s
发帖数: 133 | 6 链接打不开，
是这个么 Goat polyclonal Secondary Antibody to Chicken IgY - H&L (FITC)(
ab46969)
用上面推荐的1:250？
Thanks！ |
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X******n
发帖数: 24 | 7 想做两种荧光抗体染色。抗体一有FITC标记，抗体二没有荧光标记,要用secondary
goat-antimouse IgG APC.现在担心secondary goat-antimouse IgG 会不会结合抗体
一（hamster IgG）造成非特异染色。多谢指教！ |
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E*C
发帖数: 1629 | 8 PE conjugated 的特异性抗体， 检测时，处理的细胞应该不表达相应抗原蛋白。
PE channel确实看不到细胞，但FITC channel，看得也太清楚了吧，如下图。
盼哪位高人给我讲解一下！多谢。 |
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E*C
发帖数: 1629 | 9 谢谢楼上俩位的回复。
我因为想用FITC标记另一个抗原，结果发现，没标记前就这么亮：（
等下次实验我看看是否是自发荧光。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 10 同样的一抗拿488，568都没有问题。
就是对excitation wavelength很迷惑。
我们的fluorescent microscope上面3个filter 对应DAPI, FITC 和 TRITC。能否用
DAPI filter用于405，423？ 照理该看到蓝色或者蓝绿色的signal啊。
另外对于647，是不是肉眼无法直接看到？ |
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z****u
发帖数: 1007 | 11 同样的一抗拿488，568都没有问题。
就是对excitation wavelength很迷惑。
我们的fluorescent microscope上面3个filter 对应DAPI, FITC 和 TRITC。能否用
DAPI filter用于405，423？ 照理该看到蓝色或者蓝绿色的signal啊。
另外对于647，是不是肉眼无法直接看到？ |
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g*********5
发帖数: 2533 | 12 FITC, Alex, etc?
thanks. |
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x*****d
发帖数: 704 | 13 我个人的经历是PE/FITC 比较好用，PerCP不太好用，经常compensation失败。如果做
sorting尽量一个用Ch1一个用Ch4. |
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f*****f
发帖数: 195 | 14 pseudocolor怎样都无所谓，都可以接受，看你主要想显示哪个通道了，因为人视觉原
因，最无关紧要的弄到blue，这样merge看得更清楚些。三色一般 red, green,blue，
四色一般magenta,red, green,blue |
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s******9
发帖数: 283 | 15 太感谢了！还想问两个问题：
关于四色，ImageJ四色默认为red/green/blue/gray。是不是magenta比gray要更受欢迎
？blue在黑色背景下有点暗，用cyan代替好不好？ |
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I***a
发帖数: 13467 | 16 抗体是FITC标记的，在普通荧光显微镜下，看得挺好的，想到共聚焦上拍点漂
亮的照片
，结果照片很差劲，模模糊糊的。比普通荧光显微镜下都差很多，是什么原因？
共聚焦用的比较少，没经验。
zeiss LSM 510
先谢谢。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 17 FITC labeling CLSM adjustment method
看图 |
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v***a
发帖数: 1242 | 18 谢谢提醒！我的滤镜上显示有FITC，CY3，还有TRITC，代表680无法用吗？
558 |
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t*****P
发帖数: 36 | 19 很多ANX V-FITC试剂盒效率很低
可以考虑ANX V-EGFP |
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I***a
发帖数: 13467 | 20 今天翻出n多带标记的二抗，做western blot的，HRP标记的
还有FITC标记的，
估计10年都用不完，有些放在4度，好几年，有的在－20度，
一抗也不少
不知道还用么？
有用的话，怎么长期保存，
吐槽一下，真他妈的汗，多少年没人做western blot，试剂一大堆。 |
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s******r
发帖数: 2876 | 21 一般加成50%甘油，-20C可以放个3-5年
今天翻出n多带标记的二抗，做western blot的，HRP标记的
还有FITC标记的，
估计10年都用不完，有些放在4度，好几年，有的在－20度，
一抗也不少
不知道还用么？
有用的话，怎么长期保存，
吐槽一下，真他妈的汗，多少年没人做western blot，试剂一大堆。 |
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s*****g
发帖数: 87 | 22 最近要检测一个蛋白的表达量，但是这个蛋白在细胞内的表达量很低
请教各位达人，以下哪个方法更灵敏，或者说更有可能检测到蛋白的表达？
1. Flow cytometry after treatment of FITC-conjugated primary antibody.
2. Western blot analysis using primary antibody and HRP-conjugated secondary
antibody
谢谢！ |
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s******r
发帖数: 2876 | 23 比如说，1st Ab, rabbit-anti-mouse, Digoxin labeled,
2nd Ab，可以用mouse monoclonal anti-Dig, FITC label, 吗，
mouse来源的2抗，用在mouse tissue上，背景会不会很高? |
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s*****i
发帖数: 315 | 24 CD4的抗体很成熟，做T Cell常用到的抗体应该就行，但是注意颜色 biolegend公司的
就行
因为你做 IF，不是Flow，建议你买 biotin-conjugated primary，用srepavidin-FITC
，Cy3，Cy5， 或alexa系列的荧光染料显色 |
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k******y
发帖数: 236 | 25 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
90％
用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家! |
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d***s
发帖数: 1062 | 26 不知道你的分得很开的定义是怎么样的，但是igd就是比igm要分的开。igm的在细胞表
面的量比较不均一。可能fix and perm以后会分的比较开，这样测的就是表面和细胞内
的total igm了。我们用的biolegend rmm-1 FITC和PEcy7做出来的图（surface stain
）和别的文章里的都差不多。 |
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n*****k
发帖数: 69 | 27 想合成一条多肽（10氨基酸），FITC (or FAM)标记的。
多谢多谢！ |
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r******g
发帖数: 600 | 28 我给的连接是随便给的啊，好像都是fitc channel的，你弄两个不同channel的就行~
关键是，你要去问问公司，或者看看别的公司有没有用于IF比较好的～
你既然考虑可以用western blot，也就是说，你没有把两种cell line混在一起culture
撒～ 所以，你直接去做一个mitoDNA PCR不就行了，又快又准～ |
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r******g
发帖数: 600 | 29 我给的连接是随便给的啊，好像都是fitc channel的，你弄两个不同channel的就行~
关键是，你要去问问公司，或者看看别的公司有没有用于IF比较好的～
你既然考虑可以用western blot，也就是说，你没有把两种cell line混在一起culture
撒～ 所以，你直接去做一个mitoDNA PCR不就行了，又快又准～ |
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f*c
发帖数: 2726 | 30 我不是做southern,我做immunofluorescence, 放到显微镜下看的，DNA 上有标记（
biotin)，再用streptavidin-FITC去识别biotin, 相当于western |
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s*****t
发帖数: 107 | 31 各位大侠，我现在的实验室需要做一些flow cyto的染色。 但是我们实验室只有没有
conjugated的单抗。请问版上有没有大虾会自己conjugate的？我需要conjugate
Biotin或者FITC，PE等。请问你们都用那个公司的Kit？有没有好的protocol?
10个伪币的报答。 |
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c***r
发帖数: 1132 | 33 这跟开几个laser没什么关系啊，一般的不是默认laser全都开的吗？
影响也不应该是laser有影响，而是不同颜色之间的spill over。但是apc是很好的，跟
fitc、pe、pe-cy7都几乎不存在spill over，几乎不用做compensation。我觉得apc跟
pe-cy5的spill over应该也很小，大概可以忽略不计。 |
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s*****e
发帖数: 1905 | 34 FITC is very unstable reagent, may be you should try to use Fam-OSu. |
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b***2
发帖数: 348 | 35 荧光显微镜，用GFP或者fitc-bsa这种便宜货色吧，如果你对protein没有特殊要求的话 |
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d********w
发帖数: 1110 | 36 请大家帮忙出出主意。
我做一个反应，是用 5-FITC 与 Hydrazine (NH2NH2) 反应制备hydrazide. 结果后处
理完后走hplc发现一个很大的副产物的峰，lc-ms显示分子量多了整40,像是free的NH2
和 acetone反应了。请问谁知道怎样才能把这个副产物还原成我的产物吗？ 我现在正
在试验用 1N 的盐酸看能不能把它水解掉。 |
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A*r
发帖数: 2253 | 37 M + K(39)?
and be careful hydrazine could react with your FITC. |
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d********w
发帖数: 1110 | 38 谢谢大家的建议。FITC 那个羧基位阻很大，活性特别差，应该不会与NCS反应，而且
hydrazine是大过量。其实我反应结束后就走了一个hplc，产物很纯的一个单峰。甚至
之后我用HCl中和
hydrazine,然后立即走个 hplc也很纯。但是一旋蒸浓缩就完蛋了。
BTW,我是重复现成的成功路线，这个方法人家是做成了的。。。。 |
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o****n
发帖数: 25 | 39 FITC-dextran 不好么？
有分子量到2×10^6，挺大了 |
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