l**********1
发帖数: 5204 | 1 就象1000 美刀 human whole genome NGS 3.0
Ion Proton Sequencing
商业化后的 2017前后
说不准
一只flox的老鼠跟不同的cre和疾病gene交
做0.5年就做完的 NGKnock in/out technique 出现( possible)
那以后 做mouse and monkey 的都是相亲相爱大家庭 lol |
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D*a
发帖数: 6830 | 2 site-directed mutagenesis不是也要打ES，生老鼠？
为啥不做个flox的老鼠呢，指哪个组织打哪个组织。
当然楼主做的话基本上是后人乘凉了。。。如果能说动老板花钱买最好，当然我也不知
道那些号称做老鼠的公司靠谱不靠谱。 |
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m***i
发帖数: 4637 | 3 Floxed line
Wiki cre/loxP
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.5 |
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G********e
发帖数: 528 | 4 麦克马洪2002dev bio的文章应该是最早的，我读了好多遍
不过后来的各路ER出现之后，条件真是千变万化
浓度跨越20倍
最搞笑的莫过于myh启动子的Cre+2Mer
各路神仙发了一堆文章之后发现这个老鼠没有flox的情况之下
他摸细分是会诱导急性心肌病
然后就有如何调控剂量的文章，或者采用raloxifen替代tamoxifen
死活就没人做tam的药代动力学和cre的关系
我认为低剂量长期给应该是一个比较好的办法
土土的想的，没试过 |
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g***s
发帖数: 60 | 5 谢谢这么专业的回答，
简单的说B细胞是mosaic在A细胞之间的，
好处是有分别的Cre line available，不过都不是inducible的。
本来想法是用B cre + floxed dephtheria toxin receptor，这样
用toxin杀死B细胞，看看B细胞会不会新生，毛病是没法知道是不是
A细胞起源的。用A cre也是一样的问题。
不知道有没有什么巧妙的办法来解决这个问题.
reporter |
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b*****n
发帖数: 55 | 6 向各位同学同行请教。Inducible Flox/Cre 体系把小鼠心脏一蛋白敲除之后，H&E染色
见心肌细胞核变得巨大、有些胞核似乎与周围胞浆脱离，而另一些心肌胞核处已呈现空
泡。请问胞核与胞浆之间有什么连接或锚定的结构吗？细胞核变大提示了什么呢？叩谢
！ |
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j****z
发帖数: 67 | 7 实际上我认为这种情况下， 应该只有的delete的条带，不会再有flox条带了。 |
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a***3
发帖数: 45 | 9 兄弟，你得回去再读读ZP3 那篇文章，要用ZP3 CRE+ FLOX/+ 和WT MALE 杂过才行 |
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R******n
发帖数: 33 | 10 花了几个月用albumin-CRE的老鼠做了一个KO鼠，结果realtime发现肝脏floxed基因表
达完全没变，为啥原因啊。。。 |
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R******n
发帖数: 33 | 11 今天看了realtime primer的序列，确定在floxed位点以内，然后做了个western看到
cre在肝脏里面表达了，而且提了DNA做了个genotyping看到被切掉的带，好像cre是
work的。。。正在做western检测蛋白表达。但还是没办法解释为啥realtime做不出来
。。。很奇怪，那对引物用了n久了，做sirna过表达都能做出来没问题。。。 |
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t**l
发帖数: 109 | 12 这个技术能做cre-flox，或者+GFPtag吗 |
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s******d
发帖数: 795 | 13 如果cre老鼠的background是B6， flox基因老鼠的background是129. Breeding后得到
的conditional knock out是混合的background。如果没有时间crossbacking得到纯的
B6 conditional knock out，怎样用一定数量的对照老鼠来覆盖genetic
heterogeneity，从而和conditional knock out进行phenotype的比较？不知道版上有
哪位同胞遇到过同样问题或是知道怎样解决这个问题？谢谢回复。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 14 这个难道不是你选定一个研究的target基因的flox老鼠和Cre老鼠杂交以后就得到的？ |
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C**S
发帖数: 522 | 15 我如果是评审，我希望看到一些关于此基因的背景介绍。而且申请基金都要求申请者有
研究基础（青年基金除外），如果你在此基因上发过SCI文章，对申请来说是加分的。
如果你手里没有该老鼠（比如说你已经有cre老鼠和flox老鼠，只需要cross一下），而
是准备做自己做，我建议不要把此目标写在申请书里面，写了可能有副作用。
你的这种写法只对青年基金和暗箱操作的基金有用。这是我的建议，供参考。 |
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a****l
发帖数: 125 | 16 现在用 tail vein injection 在老鼠里表达adenovirus－Cre, 想用这个方法在 flox
animal 上做肝脏里的knockout. 打了两次knockout efficiency 只有 40%－50%。 觉
得远远不够。看不到phenotype. 有什么方法可以增加knockout 的efficiency 吗？
多谢 |
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t******k
发帖数: 599 | 17 thanks楼上二位。所以也就是说tamoxifen的作用不光是跟cre是否入核有关了？因为我
一直的理解是有tamoxifen结合cre就会入核所以反之没有tamoxifen cre还是会正常表
达却不会入核，但仍可以在胞质内作用于带有floxed的质粒。不过现在根据两位的回复
看来貌似tamoxifen的作用还要更加复杂？ |
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z****u
发帖数: 1007 | 18 CreERT 总是多少有leakage的。依不同组织，不同stage, 甚至不同的flox allele都有
区别。
得仔细检验。 |
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t******k
发帖数: 5617 | 19 直接ROSA 26A位点knock in 做出flox mice，然后再和tetrocyclin或者tamoxifen
inducible cre cross.需要induce的时候打taboxifen或者喂dox就可以了 |
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z****u
发帖数: 1007 | 20 不知道你试过Wnt1-Cre cross with reporter没。因为PNS全部来自于neural crest
cell. 所以Wnt1-Cre 标记PNS非常不错。我正好拍过肠子上的照片。这里贴几张供你参
考。这是Wnt1-Cre;R26-ZsGreen flox reporter ， mesentery上面伴行动脉静脉的神
经fiber 以及glial cells. |
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m*p
发帖数: 226 | 21 我已经有flox 的line, 准备用一个cre line 去杂交后得到一个global knockout. 有
什么比较好的 cre line 可以推荐吗？ 谢谢 |
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t******k
发帖数: 5617 | 22 We use HPRT-Cre for whole body KO
Some other strain also should be OK like:
ROSA26-Cre
ACTB-Cre
。。。。
If you want to avoid any possible mosaic expression, you should cross the
flox mice with cre mice to generate heterozytous F1. The deletion will also
happened on the sperm and egg of the F1 mice, then you can cross the +/-
mice with +/- mice to get the real global KO mice. |
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l*********y
发帖数: 12 | 23 How many pups have you screened? What are the genotypes of the parents? If
the gene is X chromosome linked you will be able to see only one band in
male pups, either wt or floxed, depending on the genotypes of the parental
animals. So first check if your gene is located on X chromosome, and screen
more female pups.
Good luck! |
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s*****c
发帖数: 5202 | 25 跟cre有啥关系？flox带应该能检测出来啊，只是那个recombination带不一定tail能检
测到（cre可能不表达） |
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q******i
发帖数: 457 | 27 你的老鼠拿到手就是whole body Het，因为在exon前面插入了几千bp的片段，干扰了
target gene的表达，如果你直接breed het to het， 理论上可以得到 whole body KO
，当然你需要检测protein level以确认。如果你想要得到conditional KO, 就必须先
和flp的老鼠交配，去掉两个FRT之间的部分，得到的就是一个正常的flox老鼠，这时候
再和不同的cre交配就可以得到conditional KO。这种方法可以更快的得到whole body
KO，因为给你的就相当于Het了。 |
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a*******g
发帖数: 33 | 28 新手刚接触chip seq, 请教大家一个试验设计问题。试验目的是找出老鼠肺CLUB上皮
细胞中某核受体的基因结合位点。因为老板不喜欢细胞系，所以要用primary cell.
从老鼠肺中分离足够多高纯度的club细胞也比较困难。
实验室有ccsp cre 该核受体FLOXED老鼠。能否通过比较这种老鼠和
WT老鼠全肺中的chip seq信号来推断该核受体在club细胞中的基因结合位点？谢谢 |
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z****u
发帖数: 1007 | 29 我来设计个。
以某个stem cell specific marker X 为例,做一个tetra-alleles model
X-CreERT;Tdtomato flox;X-rtTA;TetO-H2BGFP
在开始时候同时加以tamoxifen和Doxycyclin短暂诱导。 前两部分做lineage tracing.
后
两部分作为初始标记。H2BGFP是个long live protein .只要细胞不分裂，其能在细胞
内维持一年以上。 |
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j*******8
发帖数: 933 | 30 呵呵， 就知道俺这种外行问的问题都不知所云。 多谢楼上二位的回复， 感谢你们的
时间。
其实就是IP那个蛋白再做质谱不成功，所以想接个flag之类的东西在那个蛋白上， 然
后再IP flag来拿到那个蛋白及其结合物。
那看来还真是只能再造一个老鼠， 没办法将就现在的老鼠进行改造了。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 31 你这个想overexpression还是knockdown啊？
做flox老鼠吧 |
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x********e
发帖数: 35261 | 32 LOF的情况下WT allele被floxed就可以了吧？
locus
V12 |
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K**R
发帖数: 193 | 34 那换句话说，为什么Cre 伤害表形？是因为插到基因组里？ 还是表达出的重组酶？ |
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m**********e
发帖数: 1045 | 35 新子准备用crispr 设计conditional KO, 第一个外显子只有79个核苷酸，如果成功
flox掉，那就将30个信号肰中的26个敲掉了！可能包括前面的UTR一同敲掉！
请问这样设计可以吗？还是从第二个exon开始敲会对避开对promtor的伤害？
谢谢 |
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a*******g
发帖数: 33 | 36 是lysm cre吗？有效果不佳的，可能跟蛋白本身half life太长有关。其他的原因比如
，flox设计不合理，导致部分敲除，其余部分蛋白还能表达；被敲除片段过长，形成
episome。也可能产生了变化，但是变化比较小， wb要细心一点定量 |
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发帖数: 1 | 37 谢谢你的建议。
我的flox mice 是别人给的，发过文章的。不过他们用的其他组织的cre
而我们用的另外一个组织的cre. 我们的cre也应该没有问题（和其他癌基因cross后能
成瘤） |
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z*******o
发帖数: 1794 | 38 PMI酶本身就在自然界大量存在，从细菌到动物都有，用的又是内源promoter，安全上
有什么问题？如果剂量上有担忧，技术上可以通过构建flox序列和携带重组酶植株多代
杂交去除，或者CRISPR敲除。种痘这个东西经历了那么多年可以慢慢改进，转基因作物
就不能慢慢改进，非得一步到位？我支持严格和科学管理，但对于崔永元那种逢转基因
必反的态度相当厌恶。很多时候不是政治问题，是农民的经济问题，东北种的非转基因
大豆怎能拼过转基因的进口大豆？中国农民几千年来只认一样东西：如何在少投入的前
提下更多的生产能够果腹美味和有经济效益的粮食。这个不用政客和公知瞎吵吵，对于
是否种植转基因作物农民自然会有选择，以后作物是转基因的天下还是非转基因的天下
市场也会自己决定。我只是希望学生物的可以用自己学的知识理性分析转基因这个客观
存在，不要人云亦云。 |
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h****g
发帖数: 439 | 39 楼主不要误导别人了。 经过大量（上千例的病人）的临床实验证明，5-FU+ 奥沙利铂
组成的FLox化疗方案对于3期或者4期胃癌病人是有效的。中医也就可以调节调节病人的
体质，起到辅助的作用。劝楼主，赶快让你母亲继续做化疗。同时，每三个月定期复查
。胃癌在头一年里复发率很高。
其实，影响胃癌生存率最主要的因素是手术中的淋巴结清扫。不知道你母亲的手术共找
到多少淋巴结，多少是阳性的。
还有，劝楼主，不要在这里误导群众了。不是说中医不好，而是中医没有一个科学的体
系去评价。
关于胃癌的治疗，即使在日本（全球治疗胃癌最好的国家），也没有大夫去推荐中医，
都是去做化疗
愿你母亲早日康复 |
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h****g
发帖数: 439 | 40 楼主不要误导别人了。 经过大量（上千例的病人）的临床实验证明，5-FU+ 奥沙利铂
组成的FLox化疗方案对于3期或者4期胃癌病人是有效的。中医也就可以调节调节病人的
体质，起到辅助的作用。劝楼主，赶快让你母亲继续做化疗。同时，每三个月定期复查
。胃癌在头一年里复发率很高。
其实，影响胃癌生存率最主要的因素是手术中的淋巴结清扫。不知道你母亲的手术共找
到多少淋巴结，多少是阳性的。
还有，劝楼主，不要在这里误导群众了。不是说中医不好，而是中医没有一个科学的体
系去评价。
关于胃癌的治疗，即使在日本（全球治疗胃癌最好的国家），也没有大夫去推荐中医，
都是去做化疗
愿你母亲早日康复 |
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n*p
发帖数: 1253 | 41 ☆─────────────────────────────────────☆
qingxi (作为兔子一定要长得呆) 于 (Fri Jul 16 17:37:01 2010, 美东) 提到:
引言：
我曾经在mitbbs论坛发了有关妈妈的信息，http://www.mitbbs.com/article/ChineseMed/12563569_3.html 说西医正在谋杀我妈妈，受到很多人的指责，现在就让事实来说话。
我的妈妈胃癌晚期手术后化疗吃的东西全部呕掉，连水都喝不了，我们明智的放弃了痛苦的西医，转为中医治疗。在中医的治疗下，我妈妈再没有受任何罪，既不痛苦又恢复超快。一个月就能够逛街，做全家人的饭，两个多月诸症俱消，心情舒畅。最近看到买买提上很多绝望的人在发
兹瞬×饲笾急富ǖ羲谢睿以埠退且谎淖叩搅巳松淖畹凸取Ｋ煌氖牵笔蔽矣兄幸骄憷植康呐笥衙歉业闹С趾妥８＃易约阂布嵝胖幸侥芄话崖杪杈然乩础Ｎ艺夥菪⑿奶炜闪梦矣龅搅撕靡缴以说淖吖戳恕Ｎ腋庑┤朔⒐ㄒ樗强粗幸剑
有人搭理我，因为没有人相信。所以要把这个帖子发出来，让大家看一看我和妈妈共同经历的这个真实的故事。
我经妈妈同意，贴... 阅读全帖 |
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