j****x
发帖数: 1704 | 1 不见得，PEI也算是homemade，从公司（一般推荐sigma吧）买粉末自己回来配，调一下
pH就可以用了，这点和Calcium Phosphate倒是很像，但是一来配制的pH的要求没那么
严格简单很多，二来毒性小一些，细胞谱也似乎更广一些，在不少细胞上效果据说可能
好一些，三来DNA/siRNA通吃，效果都不错。目前做高通量转染可以算首选，除非细胞
特殊。
Tranit的试剂其实是抄的Fugene的专利，成分其公司的技术支持直接告诉我和Fugene6
一样，所以用法用量都不用再作优化如果之前用的就是fugene6。价格相对Fugene6便宜
一些，但如果用量很大，还是不够经济。
Calcium Phosphate转染效率低基本就一个原因，complex形成的不够好。假如混匀之后
看不见雾状浑浊，那就可以直接扔掉不必浪费时间和细胞了。原因自然有很多，核心前
面大家都提了是pH的问题，有时候公司的KIT也信不过，我有同事就被promega坑过，换
了Invitorgen才正常点，再后来就再也不用了，因为价格也很贵，自己配又不是放心。
Roche最近新推了真正自己的转染试剂X-treme... 阅读全帖 |
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c**A
发帖数: 1474 | 2 TranitLT1和fugene6的关系说反了。
fugene6买的mirusBio的专利。
Fugene6 |
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a****d
发帖数: 1919 | 3 293 cells are easily detached from the dish. I normally didn't wash 293
cells if using superfect or Fugene6. Sometimes I used Ca2+ Phosphatase
method and had to wash the cells with PBS, I washed the cells very gently
and quickly.Try not to leave the cells without liquid for too long and add/
remove the PBS very gently. Coating the dish with Gelatin can prevent cell
detaching too. |
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t******8
发帖数: 478 | 4 for 293, fugene6 is better. |
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S**********e
发帖数: 1789 | 5 我用Roche 的 FuGENE6 转。我在转之前的确换液了，要除掉抗生素，但操作很小心，
还是掉。大家说得对，干脆种的时候就不加抗生素了，这样就不用换液了。大家觉得行
吗？ |
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l********e
发帖数: 636 | 6 antibiotics does not matter if you use fugene6. I remember the company state
it in the protocol. |
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w*********n
发帖数: 439 | 7 本人最近刚开始学作JurkatT细胞的转染.网上有说拿电转的,也有说拿Fugene6转的,请
问有哪位大虾有经验做过转染JurkatT cell,麻烦贴个protocol.多谢了. |
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c******g
发帖数: 49 | 8 请问PEI应该选择多大的分子量的? 3x
Fugene6 |
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n******u
发帖数: 418 | 9 只用过10T1/2
看你transfection后做什么了，luc assay的话，用ca2+-mediated transfection都可以
一般的话，用fugene6好了 |
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S*****s
发帖数: 287 | 10 我转过 170kb 的 BAC DNA 都没问题，用 Fugene6 转的,Lipofectamine 2000 也还行
但是效率低一点。你可能还是 DNA 的问题。 |
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S******e
发帖数: 393 | 11 很佩服，我转的plasmid和LZ大小差不多，也一直存在困难。
还没用过Fugene6,下次试试，就按公司提供的protocol吗？
你转的什么细胞？表达高么？ |
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h******n
发帖数: 221 | 12 最近作转染实验,感觉Fugene6的转染效率不高,大家都是用哪种试剂做转染的? |
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S*****s
发帖数: 287 | 13 不用担心，都是一样的东西。本来是 Roche 卖的，马上专利要到期，所以 Roche 不卖
了，换成了更新的 XtremeGene 9。我们实验室用 Fugene6 很多，每次买都是 25 瓶一
起买，然后拿一个 volume discount。所以 Roche 的 sales 专门到我们实验室来做过
Seminar 介绍这个新产品，希望我们也换过去。最近我们发现 Roche 不卖了 Promega
反倒开始卖了，所以也不担心没得用了。XtremeGene 的效率比 Fugene 高。如果你以
前没用过 Fugene 的话建议从 XtremeGene 开始用，要是一直用 Fugene 的话建议不要
贸然用 XtremeGene，transfection efficiency 和 maximum transfection 都不一样
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a****d
发帖数: 1919 | 15 FUGENE6 from Promega
or Xetreme HP from Roche |
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