w**f
发帖数: 38 | 1 Hi all,does anybody know where to get the Muller version MMTV-Cre (FVB)
except Muller lab. I have finished the MTA with Dr. Muller for months,
however, the strike at McGill is going on for months and we don't know when
it can be done. I am hoping that I could get the mice from other labs (Dr.
Muller has agreed). Please let me know if you have some information on this
strain. Or you can recommend any good Cre mice (in FVB background) for
breast cancer study. thanks a lot! |
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h********n
发帖数: 4079 | 2 我有三个转基因老鼠: A(+/-), B(+/-), C(+/+) & C (+/-)
其中A(+/+)不能活, B只需要(+/-)
A和B老鼠都是B6, C是FVB
cross breeding 步骤:
1. A(+/-) X B(+/-) --> A(+/-)B(+/-) in B6
2. A(+/-)B(+/-) X C(+/+) --> A(+/-)B(+/-)C(+/-) in B6/FVB
3. A(+/-)B(+/-)C(+/-) X C(+/-) -->
(1) A(+/-)B(+/-)C(+/+)
(2) A(+/-)B(+/-)C(+/-)
(3) A(+/-)B(+/-)C(-/-)
最终要比较(1)(2)(3)的phenotype, 但是由于A&B是B6, C是FVB, 最终三组会出现背景
不一样的情况, 比较结果可能不可靠. 有人告诉我只要数量够多应该可以.
不知道我说清楚了没有,
各位有什么建议吗?
谢谢. |
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h********n
发帖数: 4079 | 3 我做的mice breeding,
B6 x FVB ---> FVB/B6 hybrid gray mice in bred
FVB/B6 hybrid gray mice in bred --> white, black and gray mice, about 1:1:2
老鼠毛色是单一基因吗?
谢谢 |
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h********n
发帖数: 4079 | 4 你是说杂交下来一窝老鼠没有任何两只一样吗? 这个我可以理解.
但是, 比如说, FVB X B6, 我们通常说得到的老鼠50%FVB;50%B6, 类似的情况下, 那么
有没有可能通过查很多gene/microsatelite/SNP看看一个大概的情况, 比如FVB为主还
是B6为主. 我的老鼠的phenotype(metastasis)的程度跟background相关的, 所以我很
关心这个.
谢谢. |
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发帖数: 1 | 5 我倒不那么认为，我不觉得作者会那么low。问题是人家就那么随随便便一测就能发现
如此多的随机突变，这个从概率上来说，已经可以说明问题了。不要因为不喜欢别人的
结果而坚持要推翻别人的结论。
在supplementary的数据中写道：FVB/NJ mice, which are inbred and homozygous
for the retinal degeneration 1 (rd1) allele of Pde6b, were purchased from
The Jackson Laboratory, (Bar Harbor, ME). Co-housed FVB/NJ mice without
CRISPR-mediated correction were used as the functional-deficient control.
Briefly, an sgRNA- expressing plasmid had been coinjected, into FVB/NJ
zygotes, with the single-stranded oligodeoxynucle... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 6 A是transgene, homozygous的A++老鼠发育有问题. 我写成A+/-, 不知道合适不合适.
最终的mating 是 FVB/B6 X B6, 好像后代的background不太一样. 我打算每组用20只
老鼠. 当然phenotype强才好.
有没有啥办法知道FVB/B6 X B6后代的背景情况, 比如测一些gene?
谢谢.
所以跟自然生物界的更接近blablabla，
样的background用的老鼠都是10只以上，8只就是没办法了，四五只就是实在没办法了 |
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h********n
发帖数: 4079 | 7 几年前我在phd实验室做的mouse lung cancer cell line, 从transgenic mouse肺癌上
分出来的. 后来我把这个细胞从尾静脉注射到wt FVB老鼠(跟细胞来源的老鼠相同
strain), 可以长肺癌. 注射100万细胞in PBS.
现在他们用同样的细胞打同样的FVB老鼠, 大多数老鼠会立即出现"瘫倒"的症状, 但不
死; 几周以后没有肺癌. 下面一段是他们的描述:
5-10 seconds after the injection, mice would become paralyzed: they lost
their balance and lied on their sides, some with legs kicking. Most of them
won't die and will recover within a few hours. About one in ten mice will
die on the next day or two, and no one died within the first few hours a... 阅读全帖 |
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d********1
发帖数: 1269 | 8 以前是可以写信的，我写信要回过好多次fvb，今年发现突然没这个选项了 |
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w****a
发帖数: 84 | 10 用你的CROSS方法得到的三组背景都是B6/FVB。但是严格地说，由于发生重组，背景基
因型并不完全相同。增加每组的数量的好处是提高POWER，另外由于每个个体的重组型
不同，增加每组的数量提高了组内背景基因型的差异性， 如果在此基础上仍能发现组
间差异， 这种差异性更可能来源于转基因的影响。
(1) A(+/-)B(+/-)C(+/+) |
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h********n
发帖数: 4079 | 11 有没有啥SNP array可以查一下?
我现在做FVB and B6, 如果背景不一样可能reviewer有意见. |
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w**f
发帖数: 38 | 12 有没有做breast cancer的同学？我正在找MMTV-Cre和WAP-Cre (both in FVB
background). Do you know where to get them and the best one that I can use (
JAX does not have)? I want to delete floxed gene in mammary gland. thanks a
lot. |
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D*****l
发帖数: 554 | 13 干掉我的这个老鼠基因能促进癌基因诱导的皮肤癌，我现在已有足够的老鼠数据下这个
结论。
我今天又发现了一个有趣的现象。
和FVB交配三代后，发现KO老鼠比同一窝的对照（同性别）小一号，就把+/+， +/-， -
/- 三个老鼠一起麻醉，放在一起，拍照片，准备向老板报喜。+/+， +/- 老鼠用
isoflurane麻醉一分钟后，就苏醒然后奔跑，ko老鼠要三分种左右才能苏醒但不能动，
再需要二分钟才能缓慢走动，步态很艰难，大约十分钟后，就正常了。这个或许与神经
肌肉相关。我现在不知道下一步怎么做？ 请大家帮帮忙，出出主意。谢谢你的帮助！ |
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s******y
发帖数: 220 | 14 本人老鼠新手，菜鸟上路就要cross三个转基因。
起始条件是：三个蛋白，蛋白C KO，蛋白S overexpression, 蛋白R point mutation
Knock in.
我杂交了 male （C het，S overexpression） 和female （R homo）。
现在第二代开始得到我想要的 Cnull, S overexprssion, R homo.
但是我的这些老鼠的genetic background很不一样，我拿到的 breeder male就是很
mixed 的背景，据说主要是FVB/N, 那个breeder female好点，是C57BL/6, 所以这后代
也杂得很厉害。back cross回去，耗时间太久，请教老鼠达人们我不back cross 老鼠
，OK不？
如果是OK的，那我的control就要很严格的match了，现在需要的control 至少是wt，
Cnull S overexpression。 如果我从cross的后代里， 比如说第二代， 得到了这些
control （wt， Cnull S）， 我能不能单独把他们设定为contro... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 220 | 15 谢谢。
主要是那个公鼠比较杂，是个disease model， 给我的人自己好像都是用很mixed的老
鼠做的，杂交进去另一个基因是为了rescue这个病老鼠，现在杂出来的结果初步表明有
了新的基因病老鼠有救了，而且同一背景下的病老鼠还是要死。
如果我需要弄纯的话，需要back cross几代呢？
而且，像这样，male是个mixed（fvb/n为主）， female 是C57BL/6， 我要cross到哪
个strain呢/
我听说要弄纯的话，要两三年呢， 有没有快点的办法？
多谢。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 17 哪个实验室有不是应该他知道的么。直接问他吧。
或者搜搜他署名的文章 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 18 Materials and Methods
Mice
FVB/N mice carrying the human DTR transgene under control of the CD11c and
CD11b promoters obtained from Dr. R. Lang (Divisions of Ophthalmology and
Molecular and Developmental Biology, Children’s Hospital, Cincinnati, OH)
were backcrossed onto NOD/LtJ mice (origi- nally purchased from The Jackson
Laboratory) for 10–12 generations to produce CD11c-DTR/NOD and CD11b-DTR/
NOD mice;
DTR transgenes were identified by PCR on tail DNA using primer se- quences
for DTR-1 (5'-A... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 220 | 19 多谢指教！
其实我们最初的double mutant disease model 就是mixed 的， （主要是FVB/N）, 后
来又转了个C56BL/6的磷酸化基因。我的确发现在这个新的mixed的背景下，老鼠病的没
那么严重了，死的慢了不少，虽然还是有病。 更让我担心的是，的确有一部分老鼠，
好像都不怎么病，也不知道为什么 （比如 兄弟两老鼠，哥哥1个月就挂了，弟弟活了
一年多）。 不过在这样一个相似的大背景下，很明显triple mutant中有S_A mutation
heterozygous的死的更快。
所以我觉得很明显genetic background 有影响phenotype，但是并不至于dramatic到让
他消失，（只是让penetrance 或expressivity 变弱了）。
根据你第一段，我应该证明在一个pure的background 下，这老鼠有病，我们的model相
关的基因是重要的，
但是根据最后一段关于back cross的 理论，我要是把这老鼠们backcross了，性状可能
会变弱，或者丢失，我到底该怎么半呢？
如果出现了丢失的状况，是不是就证... 阅读全帖 |
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s**********e
发帖数: 2888 | 20 我一直用的都是c57bl/6 male mice，但是后来发现公老鼠打架很厉害，好几次出现老
鼠死亡的事情。想问一下female mice是不是好很多？
没有用过c57bl/6 female mice，母老鼠只用过fvb female mice，非常的温顺。 |
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p*******7
发帖数: 134 | 21 最近玩弄各种strain的小鼠，感觉和人类的种群很象啊
FVB/N, 白人
BL6 黑人
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还可以各种杂交。。 |
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