n**m
发帖数: 7872 | 1 "Fats consist of a wide group of compounds that are generally soluble in
organic solvents and largely insoluble in water. Chemically, fats are
generally triesters of glycerol and fatty acids. "
上面的from wiki
fatty acid如果不能转化成TG就不能储存在体内。
我生化专业的。。。 |
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s*******k
发帖数: 3071 | 2 学过生化的人都知道，动物脂肪合成的底物是丙铣辅酶A，不是wiki到的triesters of
glycerol and fatty acids。 你wiki到的是无机化学里指的酯，不是生物里指的脂肪。 |
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n**m
发帖数: 7872 | 3 从化学上，三个fatty acid+一个glycerol生成TG（triacylglyceride）。
从生物体内的反应上说，这个反应需要不能直接进行。fatty acid先要被活化成acyl
CoA，然后才
能继续反应。
你说的，动物脂肪合成的底物是丙铣辅酶A，这个没错，那产物是什么呢？
of
肪。 |
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n**m
发帖数: 7872 | 4 1.简单的回答是，会。
复杂的回答是：食物中的TG在肠子里被分解成fatty acid和monoacylglycerol （MG，
就是连
着一个fatty acid的glycerol）,这两个东西被肠壁吸收，在mucosal cell里面重新形
成TG，
然后和其他一些lipid和protein pack到一起，形成chylomicron，被release到淋巴系
统里
面，最终进入血液。
chylomicron then bind to lipoprotein lipase （这个酶可以把TG分解成fatty acid
和MG，通常在脂肪组织和肌肉里面），然后在insulin刺激下，fatty acid will be
uptake
by the cells and resynthesis TG and store in the cell.
2.fat cell非常不容易死，呵呵。减肥成功，很大程度上是fat cell变小。长期肥胖，
fat
cell负担太大的话，会有inflammation的症状，不好不好。
关于fat cell的develop，原来的研究是说，在青春期的之前， |
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n**m
发帖数: 7872 | 5 除了糖原可以转化成糖以外，糖的一些代谢产物 （pyruvate, lactate），大多数氨基
酸（蛋白
质的代谢产物），还有脂肪里面的glycerol backbone都可以产生糖。其中前面几个比
较容易一
些。
所以如果摄入的碳水化合物不够，蛋白也不够的话，身体会分解自己的Protein以维持
血糖。 |
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p*********l
发帖数: 26270 | 6 Q. One topic that almost always seems to cause debate and controversy is the
issue of calories. Some claim that there is some kind of 'metabolic
advantage' associated with low-carbohydrate diets?
A. Okay, this is going to be a very long-winded answer since there's a lot
to cover. I want to point out that more detailed discussions of most of this
(everything except the more recent studies) are in my first book The
Ketogenic Diet.
The metabolic advantage of low-carbohydrate diets is an idea that h... 阅读全帖 |
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T****r
发帖数: 4006 | 7 重新去调查了，给你update一下：
Gluconeogenesis (abbreviated GNG) is a metabolic pathway that results in the
generation of glucose from non-carbohydrate carbon substrates such as
pyruvate, lactate, glycerol, glucogenic amino acids, and odd-chain fatty
acid.
In vertebrates, gluconeogenesis takes place mainly in the liver and, to a
lesser extent, in the cortex of kidneys.
Gluconeogenesis is often associated with ketosis. |
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w***n
发帖数: 9040 | 8 嗯，应该是因为误差，因为脂肪和糖所占的百分比是从RQ测试值换算出来的，RQ测试值
每档的差距也就0.01-0.02左右，难免出现误差。
The respiratory quotient (or RQ or respiratory coefficient), is a unitless
number used in calculations of basal metabolic rate (BMR) when estimated
from carbon dioxide production. Such measurements, like measurements of
oxygen uptake, are forms of indirect calorimetry. It is measured using
Ganong's Respirometer.
Calculation
The respiratory quotient (RQ) is calculated from the ratio:
RQ = CO2 eliminated / O2 consumed
where the te... 阅读全帖 |
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w***n
发帖数: 9040 | 9 嗯，应该是因为误差，因为脂肪和糖所占的百分比是从RQ测试值换算出来的，RQ测试值
每档的差距也就0.01-0.02左右，难免出现误差。
The respiratory quotient (or RQ or respiratory coefficient), is a unitless
number used in calculations of basal metabolic rate (BMR) when estimated
from carbon dioxide production. Such measurements, like measurements of
oxygen uptake, are forms of indirect calorimetry. It is measured using
Ganong's Respirometer.
Calculation
The respiratory quotient (RQ) is calculated from the ratio:
RQ = CO2 eliminated / O2 consumed
where the te... 阅读全帖 |
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L*******e
发帖数: 2153 | 10 用了以后觉得成分里有太多glycerol，皮肤吸收不下去～ |
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d********e
发帖数: 2221 | 11 you can soak roses (or any other flowers) in glycerol for some time, after
they are completely dry. After this treatment, they stay pliable. |
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x******n
发帖数: 8550 | 12 不是，要用glycerol泡过会像真的一样柔软。
gel弄好，花瓣是干和脆的。自由散漫，是这样么？ |
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p********3
发帖数: 5750 | 13 50， 70， 71； 大家注意一下和这几篇文献相关的话题。 另外， 73-75我本人没有看，确实是谈的印度药材， 我在查阅参考文献的时候在搜索Chinese Medicine的时候， 显示有这些文献，我本人没有亲自看这些文献， 也许其中有讲中药的地方。不过这不影响我要表达的意思。
慢慢看：
INTRODUCTION — Plants have been used for medicinal purposes for thousands
of years. All major cultures including Native American, European, South
American, Asian, and African cultures have used botanicals for healing
purposes. As an example, saw palmetto was used for urinary symptoms in men
from Egypt in the 15th century BC [1]. Hippocrates documented... 阅读全帖 |
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N******t
发帖数: 16051 | 14 grind的好处是确保每样成分都吃进去了，如果不挑食，切成块喂也可以
我有这个，不过不是特别好用，最近都用切块的；将来有钱了可能会进electric
grinder
http://www.amazon.com/Norpro-Grinder-Mincer-Pasta-Maker/dp/B000
配方简单来说就是80％肉（需要一些肥肉比如带皮鸡腿），10％骨头，10％内脏一半心
一半肝，再加上维生素BE鱼油海藻水和一点点磨碎的蔬菜
冷冻可以解决寄生虫的问题；为了控制细菌，不要买绞好的肉，绞过之后要立刻冷冻起
来，绞之前也可以用开水烫一下表面
（另外-80C 冻细菌要加glycerol的阿。。。。。。。不然也冻死了吧）
家禽类的小骨头，比如鸡肋骨或者鸡翅膀，都是不错的骨头来源；不要给任何承重骨
如果不用骨头，也可以用钙或者其他替代物；不过如果用熟的bone meal，有点defeat
the purpose of raw feeding；最理想是冷冻的ground raw bone，不过我土人不知道
去哪找
也可以直接买commercial raw food；我做过计算比喂好的罐头稍微贵一点... 阅读全帖 |
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n**t
发帖数: 45 | 15 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十一）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Mon May 16 14:19:57 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低， |
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n**t
发帖数: 45 | 16 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（五）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:57:06 2005) WWW-POST
本文献给YL
（五）"万金油"buffer
Dr. Burgess 这人特有意思，喜欢吹嘘他发现的小trick。比如，他得意说他是全美国最早用
coomassie blue染蛋白胶的人。据他说，六几年的时候他看到一个澳洲的老兄的一片文章,讲述
一种新奇的染料叫考马市亮蓝, 比当时流行的染料amido black灵敏十倍以上。所以他就写了一
封信要了一些，结果效果奇好。我们听得都目瞪口呆。
不过Burgess最自豪的，还是他的“万金油”buffer。他告诉我们说，他几十年了，总喜欢用这
个buffer的配方，什么蛋白都喜欢这种buffer, 可以说到了包治百病的神奇地步。尽管他吹得神
乎其神，配方却十分简单。这个buffer叫TGE,就是Tris, glycerol 和 EDTA。配方 |
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a*******c
发帖数: 39 | 17 ft 这些 trick 也太简单了，蒙外行的，哈哈
国最早用
章,讲述
就写了一
总喜欢用这
他吹得神
样的:
很多蛋
他的
实验室里干，主要是纯化细菌RNA
放冰
。
活性还
成
们做。
分成两部
孔10微升，
我们有一
试了所有这
glycerol,这四种
以实时监控折
涂，没有
是hampton
果都很好。
还学到的一 |
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l*****g
发帖数: 2087 | 19 中国科学院院士李家洋
生平简介
李家洋（1956.7-）安徽肥西人。植物分子遗传学家，中国科学院院士，研究员。
中国
科学院副院长、党组成员。1982年毕业于安徽农学院（现安徽农业大学），1991年获美国
布兰代斯（Brandeis）大学博士学位，1991—1994年在美国康乃尔大学汤普逊（Boyce
Th
ompson）植物研究所进行博士后研究工作。历任中国科学院遗传研究所所长助理、所长，
遗传与发育生物学研究所所长。
李家洋主要从事植物分子遗传学研究，他利用模式植物拟南芥与重要粮食作物水稻探
索植物生长发育的调控机理。近年来的主要研究工作包括：采用图位法克隆了水稻分蘖控
制基因MOC1，开拓了水稻分蘖控制分子机理研究的新领域；利用水稻脆秆突变体分离了
B
C1基因，阐述了水稻机械强度的控制机理；通过获得的拟南芥胆碱生物合成突变体，初步
明确了胆碱合成与植物温度敏感雄性不育性的关系；通过图位克隆法分离出导致细胞死亡
的基因MOD1，明确了初级代谢途径的缺陷会导致植物细胞凋亡；利用转基因技术，创制出
色氨酸与吲哚乙酸合成量改变的转基因植物，从而提出植物生长素吲哚乙酸生物合成途径
的新模... 阅读全帖 |
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a*****c
发帖数: 3525 | 20 脂肪和油的介绍以及如何选择好的食用油
如果单凭一点脂肪会让人长胖，这么个偏见，那么你可能就无法保证自己身体健康该有
的正确认识了。对脂肪或者油需要有个比较简单和清晰的了解，了解你可能不知道的有
关脂肪的知识，这是本文试图提供的信息。
花了些许功夫在网上搜索一番，找了些资料编译整理一下，其中某些地方可能存在争议
，在所难免，毕竟还没有定论的事情，只能是大体如此了。（转载请注明本文由
agostic所写）
1、脂肪对生命体的重要性
虽然从饮食中完全去除脂肪是不可能，但如果真的完全除去脂肪的话，这么做是不健康
的。脂肪对于保持健康的皮肤和头发，避免身体器官受撞击，维持身体温度和促进健康
细胞功能起到关键的作用。脂肪也是作为身体的能量储备。脂肪在体内分解释放出甘油
和脂肪酸。甘油可在肝脏转化为葡萄糖而被用来作为能量的来源。
维生素A、D、E、和K是脂溶性分子，意味着他们只能与脂肪一起消化、吸收和储运。脂
肪也是人体必需脂肪酸的来源。脂肪对人体的用处许许多多，就不多叙述了。
2、简单介绍脂肪及其相关术语
脂肪（fat）在化学上是指由脂肪酸(fatty acid)和甘油(glycerol)反应组成 |
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n****e
发帖数: 1677 | 21 The salt concentration after the gel filtration should be the same as the
running buffer. I usually use 100mM NaCl to run gel filtration, it depends on
the protein.
I don't know what you gonna do to store the protein you purified. I usually
concentrate the protein down to 10mg/ml, and save it for crystallization.
I save the protein in 5% Glycerol, 10mM DTT, 100mM NaCl and 20mM whatever
buffer. So I usually make the buffer, concentrate the protein down to a
reasonablly small volume, add the buffe |
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r****o
发帖数: 105 | 22 本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低，所以由于渗透压的影响，
hela细胞膜会变得比较脆弱。这个时候呢，把重悬的细胞用Dounce 匀浆器处理一
下,把细胞膜弄破。低渗buffer里头虽然盐浓度很低，但也不是没有盐在里面。主要
有两种成分，一个是10mM KCl ,另一个是 1.5mM MgCl2。KCl没有什么好说的，
可以换成NaCl。MgC |
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m****m
发帖数: 395 | 24 我每次做SDSPAGE胶都很紧张，尽管动作已经非常快了，7.94ML的分离胶溶液要一次性
同时做完两块胶，就是做不好，做一块我还行。分离胶的水平线总是不平整。
下面是我的配方，大家看看哦
1.9ML 49.5% AABis
2.67ml buffer (3M tris,0.3%SDS,PH8.5)
2.67ml glycerol:H20(56:44)
0.7ML H20
APS(10%) 80ul
TEMED 16ul(后来因为凝太快改成了13ul，还是来不及)
（这个分离胶水封后，我看基本5分钟多点就完全凝住了）
首先，溶液我肯定仔细混匀了，然后我用这点溶液分别加到两块胶板的刻度线上，加完
一块，加另一块，基本正好用完这点，期间动作非常快的。然后轻轻地加水，为了使其
平整，因为要加两块，总是让其中一块要等一会，加水的时候我不敢用力，因为会让胶
起伏造成不平整，也是按先前的顺序加先注胶的那块，然后再给另一块加水。但是不知
道为什么就是掌握不好，做到最后两块都不是很平整，要不就是大波浪型，要不就是虽
然直了但是是斜的，觉得还是加水的时候胶已经开始凝了。
为了做好 |
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n******d
发帖数: 1055 | 25 it is not necessary to use SDS and Glycerol in the gels.
use 1/100 of 10% APS, use 1/1000 TEMED, Use water to seal resolving gel. it
take ~7min to polymerize (yes, it is so reproducible) |
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a***a
发帖数: 40617 | 26 理论上应该不是
因为毕竟50%的glycerol，-20都是液态，放-80肯定都冻起来了
有些蛋白可能会冷变性
但是实际操作起来可能没有影响，后果自负 |
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l*******k
发帖数: 361 | 27 先透析，去掉imidazole， glycerol 5-10%, protease inhibitor不是必须的，可以加
一点EDTA, 1mM, 绝大部分serine protease没有Mg离子都没有活性了，有的蛋白要加DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态，视情况而定。
然后分装，用液氮进行迅速冷却，然后保存在-80, 有些比较脆弱的蛋白即使这样保存也会失活，那就需要找到合适的buffer，或者每次都用fresh made的蛋白
推荐你去读一下一个科大师兄写的从纯化到星辰，里面提到了很多蛋白提纯跟保存的技
术，对于做蛋白的很有帮助 |
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j*****y
发帖数: 94 | 28 我的蛋白是个homodimer，蛋白的结晶已经作出来了。dimer interface is formed by
3 helixes from each
protomer，但是两个protomer 不是像手掌对手掌那样的完全对称interact, 而是两个
protomer之间交叉对称 ，i have
tried a bunch of single-site, double and quadruple mutations to try to
disrupt the dimer but failed. 因为
protomer不是整个helix在interact, 而是有一定角度的，所以不知道为什么两个
protomer之间的作用力会这么强。我们用
的是glycerol gradient sedimentation analysis 来确定 s value， 我试过用没有
salt 的 gradient, 结果蛋白变成了
tetramer; 在高浓度salt gradient 下，仍然是dimer.
我曾经想过能不能在helix 和 helix 之间的loop 那儿插入一小段peptide |
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y******n
发帖数: 9 | 29 有些抗体是不能直接冻的。要价Glycerol或其他。要Aliquot成很多小管，每次取一管。 |
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y******n
发帖数: 9 | 30 有些抗体是不能直接冻的。要价Glycerol或其他。要Aliquot成很多小管，每次取一管。 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 31 他不懂倍。 有个学生要我的dna, 我说给他寄滤纸，他不懂，非要我寄glycerol stock
. 反正他出邮费。 |
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s**f
发帖数: 365 | 32 对，后来非要glycerol stock。
stock |
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r*********y
发帖数: 124 | 33 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来（4ml 洗脱
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩，发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘，上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared（我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化，浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢 |
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h*****9
发帖数: 4028 | 34 太高了。通常都是1-2ug/50ul。另外你的酶量加太多Glycerol可能会对酶切不利。
回收只要是跑胶纯化，未梅切质粒污染应该非常少。 |
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c*******r
发帖数: 440 | 35 借宝地请教：
表达纯化了的MBP融合蛋白，用Factor Xa 酶切后出现沉淀，上清几乎无目标蛋白，目
标蛋白的PI=10 （将来用于结晶）。
通过改变酶切buffer 的 PH，或添加 DDT, glycerol, 盐浓度，还是酶切后还是出现
沉淀。
请分析原因和解决方法，多谢！！！ |
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a***e
发帖数: 1010 | 36 It is OK.
Depending on your downstream step, you may need special buffer to preserve
the activities of the nuclear machineries. For instance, if you want to
make
nuclear extract to conduct in vitro transcription, in vitro splicing or
polyadenylation assays afterwards, it's better to directly put your cells
in your next step buffer together with some glycerol. |
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y****m
发帖数: 37 | 37
glycerol gradient, then western? blue native gel electrophorensis?
did you change to fresh buffer after a while? most likely the running buffer
went bad. |
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i********e
发帖数: 50 | 38
谢谢。glycerol gradient要很多蛋白量才可以吧？blue native gel electropheresis
是什么？
buffer
这个的确不知道。非常感谢！不过很困惑，buffer为什么会went bad? PH的改变？ |
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m*****u
发帖数: 15526 | 39 我提核蛋白。lysis buffer里有0.4M NaCl, 10%glycerol。感觉对BCA法测量干扰很大。空白的
lysis buffer测出的值就很高。有什么别的办法可以解决么？ |
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s********n
发帖数: 2939 | 40 主要是glycerol的干扰，需要buffer exchange.
大。空白的 |
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b**y
发帖数: 86 | 41 最近刚开始做EMSA，我用的是Pierce的Lightshift kit. 多次实验都只看到
nonspecifec binding（不能被unlabeled oligo竞争掉）。我发现一个原因可能是
binding reaction里盐浓度过高，因为kit提供的binding buffer（10*）含有500mM
KCl,而我的nuclear extract最后是由high salt buffer提取的，F.C.225mM NaCl。于
是我省略了binding buffer，把最后的NaCl浓度调整在50-75mM，得到了一条specific
的binding，但是非常弱。
问题1. 我看到的paper和protocol都使有类似的binding buffer，而且也用类似方法提
取核蛋白，好像并不考虑nuclear extract里的盐浓度，事实上这个浓度很高。但是，
我的几个sample extract蛋白浓度不同，加入同样多的蛋白的话最终盐浓度就会不同。
大家怎么解决这个问题？透析又怕蛋白容易降解。
问题2. 我加入的nuclear extract的体积无法忽略，大概有10u... 阅读全帖 |
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x********a
发帖数: 157 | 42 我的裂解液成分是：
50 mM Tris-HCl (Ph 7.4)
150 mM NaCl
2 mM EDTA
5% glycerol
1% Triton
然后每1毫升上述的液体加 10 ul 0.1M PMSF 和 20 ul Protein inhibitor cocktail. |
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j*****a
发帖数: 92 | 43 用size exclusive column (Sephacryl 100, buffer Tris-HCl (pH 8.5) 5% glycerol
)分离 ionic exchange column pools (desired protein 35 kda).所有的蛋白在死体
积同时下来，完全没有分离.请问怎么办？谢谢. |
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m**z
发帖数: 787 | 44 your sample loading volume and column volume? you said all proteins, that
means all proteins including your target protein and the impurities? Do you
have any salt in your running buffer?
glycerol |
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I*****y
发帖数: 6402 | 45 what sizing column did you use? I guess your proteins of interest have
aggregated without salt or DTT? The aggregated proteins behave like a huge proteins
that you find in the first few fractions.
glycerol |
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s********l
发帖数: 1195 | 46 do a control first to make sure column is fine.
then it could be your protein is too small for this kinda beads, if the
protein is not aggregated.
glycerol |
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c******n
发帖数: 5697 | 47 Arsenate也就是AsO4(3−)是phosphate analogue，也就是说对蛋白酶来讲，AsO4(3−)和PO4（3-）无区别，所以细菌的enzyme完全可以把它错当PO4（3-）使用，加入DNA和protein里，这个没有多大意义，你们还争论用不用分析化学鉴定，没意思
最主要的是As妨碍普通细胞的呼吸oxidative phosphorylation，普通细胞没法在As下生存，不可能繁殖
但是这种几年前就被发现了的细胞有酶可以中和As，还可以靠As呼吸， 所以可以靠As生长，所以在用As替换P的环境下繁殖，就丝毫不足为奇了
所以更有意义的发现不是As替代P， 而是细菌可以在As里繁殖。这是个老消息了，可怜NASA不要脸，又玩花样骗钱
早就说过了，NASA是个很可怜的机构，在资本主义社会中没有任何存在的意义，所以要向好莱坞学习，不停搞出新闻来，才可以吸引缴税人民的注意力，搞研究经费
http://www.microbemagazine.org/index.php/02-2010-home/1358-microbial-arsenic-metaboli... 阅读全帖 |
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b******3
发帖数: 377 | 48 否则简单的PBS里面也不知道加不加protease inhibitor，DTT，glycerol等。谢谢！ |
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s*********s
发帖数: 110 | 49 4X(SDS sampling) 50mL
6.25ml 1M Tris,pH 6.8
20ml glycerol
20ml 20% SDS
5mL BME
0.5mL 2% Brom-blue(10mlstock:0.2g/10mLEtoH)
5X, 6X 适当增减 |
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y****l
发帖数: 1 | 50 大家好，我最近拿到了一个十二个跨膜结构膜蛋白的晶体，正在做SeMet标记晶体。
我用的菌株是：B834（DE3）
培养基：M9+19个氨基酸+0.5%glycerol+ 5%glucose +Thiamine+1mM MgSO4+0.1mM
CaCl2+0.05mg/ml selenomethionine+amp
温度：37°
培养时间：24小时
用这样的方法，没4L菌可以大概拿到3毫克的蛋白。
现在问题是3毫克蛋白根本不够我用来长晶体。
问题：
1.在养细胞的时候我发现离心以后上清还是很浑浊，还有大量的菌在上清中无法被离下
来。我
加大了离心的速度和时间，还是无法离下来。有好多菌附着在离心管壁上。不知道这是
为什
么？
2.离下来的菌有一些黄黄的东西，而且是比较多的。通过我的纯化，我发现这些黄黄的
东西是
不能被detergent溶解的，里面没有我的目的蛋白。不知道这些黄黄的东西是什么？
3.离下来的菌在悬在buffer的时候，我发现很粘稠，和我用与表达非标记蛋白用到的菌
的时候
是完全不一样的。是不是菌破裂了，dna跑了出来。很奇怪。
4.长SeMet derivative pro... 阅读全帖 |
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