a********r
发帖数: 538 | 1 我和老大在westnorthern maui那个pave得不太好的路上，倒了5次车，让对方的车通过。
有一次倒得只有20公分到边上的岩石崖了
因为是单行道路窄，而且弯弯也很多，拐弯处需要不停安喇叭，提醒别人我们有车过来
hairpin turns在夜晚开的冒汗。而且路上石头多，也比较打滑，最好四驱车。还好那段路只有十几mile
pull |
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a********r
发帖数: 538 | 2 这个说的很赞！
不过一周去3个岛，我们小年轻都觉得很累，我觉得父母年级大会觉得更累， 不enjoy
不relax.
建议就美美以前Oahu和Maui两岛游最合理，信价比最高了。
那个大岛一日，可以skip, 我现在后悔，应该这天留出来给Maui的Hana road,
因为大岛一日实在太匆忙太赶太走马观花（虽然看的景点也很丰富多样）
要大早起，一天坐两次飞机，而且要200多刀一个人。
而且现在岩浆活动很少，在那么赶的行程下看到的几率也不大。
多留点时间在Maui！
环形山口的日出日落很惊艳！西海岸也很美，拍出的照有明信片的感觉。
Molokini水很清很蓝，不知道楼主父母能snorkel否？
Hana路没时间去了，很惋惜，facebook上一个 Maui出生的朋友聊，他说Hana是他的最
爱。
路不好开，full of hairpin turn倒是真的
Haleakala的夜路不好开哦，特别是我们超速赶时间，开的有点冒汗。
动) |
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a********r
发帖数: 538 | 3 建议Oahu和Maui. Oahu有好多经典，第一次去Hawaii, 应该去看下，不会失望的。
你问的那个大岛一日，可以skip, 我现在后悔，应该这天留出来给Maui的Hana road,
因为大岛一日实在太匆忙太赶太走马观花（虽然看的景点也很丰富多样）
要大早起，一天坐两次飞机，而且要200多刀一个人。
而且现在岩浆活动很少，在那么赶的行程下看到的几率也不大。
当然如果你喜欢大岛，大岛7日游，也许比较合理。大岛实在太大了，3天都远不够。
在有岩浆活动的情况下，helicopter tour一般能保证你看到岩浆入海。岩浆晚上看会
更清楚。
如果对自然美景比岩浆黑石头更感兴趣，多留点时间在Maui！
环形山口的日出日落很惊艳！西海岸也很美，拍出的照有明信片的感觉。
Hana路没时间去了，很惋惜，facebook上一个 Maui出生的朋友聊，他说Hana是他的最
爱。
路不好开，full of hairpin turn倒是真的. 有可能宝宝会转晕呵呵。
Haleakala的夜路不好开哦，特别是我们超速赶时间，开的有点冒汗。 |
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s**********r
发帖数: 105 | 4 麻州西部Mohawk Trail比较有名，就沿2号公路一直走，可以从Boston开到纽约州的
Albany。沿途自然风光不错，有个 The bridge of Flower， 在Shelburne， 还有2号
路上著名的Hairpin turn,大约在North Adams,看秋叶季节去非常好。如果喜爱
Kayaking,hiking， fishing, 的话有不少可以玩的。总体来说都是小景点，没有特别
出名的。 |
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t****z
发帖数: 8931 | 5 你牛笔啊
要不怎么就叫牛笔呢
不过我开的时候你还在吃奶呢
那是刚到美国第一年
现在加了guardrail，修直了几个hairpin，全程拓宽
你从leadsville到aspen开内道
可以上网贴胸毛
牛笔烘烘了
这是美国人十几年前评的
Driving In The USA And Canada - Mountain Roads And Mountain Passes Rating
看看Independence Pass CO82几分，其他所有美国加拿大山路几分，熊牙几分
http://www.johncletheroe.org/usa_can/driving/mountain.htm
引用一段，他开了90多条美国山路
“The most frightening mountain road I have driven is Independence Pass, Co 82 between Aspen and US24. When we drove it, some years ago, there were enormous drops with totally unguarded e... 阅读全帖 |
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b*******e
发帖数: 6482 | 6 Going to the Sun有一些Hairpin弯，
有几段路边就是悬崖，山路虽较窄但还是有双向车道的，
路面质量很好，按25的时速专心开，做好心理准备就行。
风景非常好。
新手、恐高不推荐自己开。 |
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b*******e
发帖数: 6482 | 7 这次最迷的自然风景在德语区。
整体都很棒。
在Ticino小住，风景还可以，路比较不好开，分分钟一个hairpin一把轮转不过弯来
人比德法区的感觉更友善热情。
法语区其实也不错，馋大米的时候在日内瓦湖附近找到一家中餐馆，
虽然是最普通的家常菜，味道拿来大纽约都算上乘。 |
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b*******e
发帖数: 6482 | 8 北部的Dolomites/Italian Alps有世界第一流的雪山、大岩壁、高山草甸，
还有著名的盘山公路Stelvio Pass
意大利很多小镇都是山城，城里也好多hairpin，
有些著名小镇还是建在山巅岩壁间的千年碉堡，
譬如 国中国San Marino，
宫崎骏《天空之城》的原型Civita di Bagnoregio
当然这些也可以说是古迹，确实都很老。
北部的cinque terre，
南部的amalfi coast
都是世界著名的海滨悬崖上的小镇，也有沙滩。
Toscana本身是看连绵不断的草坡丘陵和田园酒庄
罗马和佛罗伦萨都是看古迹，好像有些太多了，想看风景。 |
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b***i
发帖数: 10018 | 9 IA10有什么难度啊？第一个left hander之后downhill的hairpin?
我第一次玩差不到一秒就金了。第二次不到一圈就第一了。 |
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B****I
发帖数: 2114 | 10 看你啥车啊
拐弯的时候后驱的车踩油门会oversteer
前驱的反过来
手刹一般我只有hairpin弯才用。。
你把副驾驶的路书改成专业的那种
会告诉你下个弯用几档过得
比如left 5就是左转五档的弯
很有用
降一 |
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w********e
发帖数: 762 | 11 swa 都是全新带合子和标签,tjmaxx买的.,希望能带走上面的屯货
16. star necklace $49.99 + tax （ＧＯＮＥ）
17. swa hairpin $19.99 + tax (GONE)
以上附带给gift 收据,可loca TJ 退货.
18. necklace $69.99 + tax 这个是比较大的那种,适合晚装..真的非常漂亮
这个收据在,但是一个月以前了.店里不能退了. (GONE) |
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z****u
发帖数: 2629 | 13 http://www.youtube.com/watch?v=v-MhydUGeso
这种中间分岔的海绵棒，里面有定型钢丝。
我是先扎马尾，有时候扎很高，差不多到头顶，有时候就半高，如图所示，还可以盘在
下面显得professional参加meeting都可以。
扎了马尾以后，把头发穿过海绵棒，把海绵棒移到差不多离发梢1/3的地方，就开始卷
，朝内朝外都无所谓，卷到底就把海绵圈成一个圆，定型。
再把头发都拉过来，我会用那种长的hairpin夹住头发合并的地方。
我觉得现代mm的盘发和过去的盘发有几个不同的地方，否则会显得老气：
1. 如果是想要那种光滑无杂发的感觉，ballerina的感觉，也很美，配上长脖子超显气
质。就不要有刘海，杂毛都得贴到头上去。
2. 如果想要休闲感觉，可以留刘海，无论平的还是斜的都好看，重点是扎马尾的时候
，下面的头发要松，松出一个弧度，我的图示里没有特别松，其实周末可以梳的更松一
些，bun下面的头发就会有一个大大的圆弧鼓出来。反正最主要就是松，旁边的头发都
得送出来一些。
3.夏天的时候，可以让bun上的毛毛多出来一些，就是头发比较随意的飞出来，不要搞
... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 1055 | 15 来自主题: EmergingNetworking版 - 求面经！！ Not really, if you know Cisco firewall products, prior to PIX OS 7.0, ipsec
traffic can not do hairpin, aka, ipsec traffic coming to one interface can
not be routed back to the same interface. For IPsec remote access, there is
no access-list involved, IPsec policies are pushed down from IPsec gateway
to clients.
to
list |
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a***e
发帖数: 1010 | 17 try diluting your enzyme, decreasing your digestion temperature. |
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h******u
发帖数: 602 | 18 The one we currently have is from Promega nad the concentration is: 20–100u
/μl.
I plan to use 1 unit, 10 unit and 100 unit per reaction (0.5ug oligo) and
incubate on ice, room temperature and 37 C. Is this OK? |
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a***e
发帖数: 1010 | 19 sure, it is a good start. |
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s***e
发帖数: 911 | 20 不太可能. 单分子unzip DNA hairpin的测量里, DNA一般比100 bp还短. normal
experimental condition下需要> 10pN才能把双链分开. |
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K**********e
发帖数: 188 | 21 谢谢上面的和sunnyday。
1 哦哦。那还好，细胞培养基有点黄，但还是有点红。因为是悬浮细胞，稀释可以吗，
还是最好离心下来再用新鲜的培养基悬浮？
2 嗯嗯，原来载体拿限制内切酶切了的话就上带有磷酸基了啊。我没有用磷酸酶处理载
体。我合成的时候没有要求，就是当成引物让公司直接合成的。那我用T 4 PNK kinase
又处理了我的要插入载体的双链DNA片段，是不是就多了一个磷酸，反而连接不上去了呢？
可是指导我做实验的senior postdoc让我用T4 PNK处理，他也知道我是公司直接合成的
引物。这个postdoc以前做过很多这样的载体，应该很清楚呀。
其实我做的是合成hairpin DNA，克隆进载体，准备做sh RNA knock down。 |
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G*******s
发帖数: 92 | 22 Mol Biol Rep. 2010 Apr;37(4):1831-9. Epub 2009 Jul 15.
Comparison of approaches for efficient gene silencing induced by microRNA-
based short hairpin RNA and indicator gene expression.
Shan ZX, Lin QX, Deng CY, Zhou ZL, Tan HH, Fu YH, Li XH, Zhu JN, Mai LP,
Kuang SJ, Lin SG, Yu XY.
My email address is n***********[email protected], thanks a lot! |
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d****u
发帖数: 1553 | 23 我有一点点转不过弯来。当进行shRNA 的genome wide screen的时候，最后要提取基因
组DNA然后PCR扩增hairpin
sequence为下一步无论是array还是sequencing做准备。这一步PCR怎么能保证扩增出来
的产物还在线性范围内呢，还是
有什么特殊的算法。有没有同学做过，给个提示啊。谢谢了先。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 24 我记得Scott W. Lowe有片筛选肝癌里tumor suppressor的cell就是这么干的，
不过没仔细看，不记得他的文章里有没有说这个问题。
但我觉得PCR效率应该影响不大，primer都是一样的，扩增的又都是shRNA的序列，而且
又很短。
现在的ChIP-Seq也都是加了adaptor扩增后去测序，似乎也没有考虑PCR效率的。
hairpin |
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W****C
发帖数: 1937 | 25 RT 引物 是一个hairpin的大概70碱基的DNA,末端单链大概有10个和mir匹配， 这样RT
就会以mir为模板再加10个（20－10）碱基到引物上。 PCR的时候引物针对这个新合成
的大概80的DNA特异就可以啦 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 27 不是很effective 至少在neuron里。所以才需要dicer
这个确实会raise些问题 比如offtarget 或者dicer generally disrupt normal siRNA
functioning.不过首先可以用表达dicer而不表达hpRNA作control,其次他们有两个独
立的hairpin有类似的phenotype，应该问题不会太大
done. |
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z***q
发帖数: 907 | 28 一个小的hairpin loop(27nt),用核磁做其结构。在水中看base pair(imino-imino,
imino-amino),folding correctly, connectivity也很多，但是5-8ppm的peaks are
totally
messed up, very broad and not well resolved.换到D2O中也是一样，即使2D
expperiemnts, 也不能很好的区分各个峰。1D上就像一个大的馒头峰，上面插着若干个
小叉子
（小尖峰）一样，无法分开各个峰。
像请问各位大侠，有人遇到过这种情况么？这个RNA 到底有没有正确折叠呢？从非变性
胶上只
看到一条清晰的条带，确定是monomer而不是dimer.如果结构不对的话，有什么方法可
以使其
正确折叠呢？我已经试过了加热快速冷却，缓慢冷却，改变盐离子浓度（50mM,100mM),
pH值
（试过4.5，6.0）都不管用，而且每次得到的谱图（1D）都不一样，都快被它搞崩溃了
。是不
是接下去只能考虑换序列了？老板也完全不能理解这种情况，只是反复和我强调我的操
作有错
误，他这么多... 阅读全帖 |
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x*****o
发帖数: 441 | 29 不是太懂NMR,不知道你的核磁结果的解释是什么.
你的hairpin stem是不是GC rich,会不会没有闭合.你的Tm是多少?
还有non-denaturing gel 怎么确定不是dimer? |
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z***q
发帖数: 907 | 30 谢谢回复！
结果的解释就是所有supposed base pairs都形成了，hairpin stem有9个base pairs,
只有2个GC，Tm没测过，算出来的是54C，自由能也很低，因为序列开始是2个UU base
pair，可能不太稳定，但是从核磁上看UU base pair都形成了，所以感觉很矛盾。试过
端基变成GC,然后就发现了很多dimer.non-denaturing gel上是根据别的已知样品的对
照。 |
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r********d
发帖数: 58 | 31 盐浓度越高，越有利于稳定dimer,trimer等结构
盐浓度低一点对single hairpin好
你干脆别加盐了，如果buffer是用phosphate来控制pH的话，那么加5mM的phosphate就
可以了
你sample concentration是多少？ |
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r********d
发帖数: 58 | 32 这个问题要分两重看
第一，你加了GC之后，hirpin是比原来稳定了
第二，你加了GC之后新的序列形成的dimer可能比single hairpin更稳定，这个就和序
列有关了，没拿到结构，谁也说不太清楚，呵呵 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 33 引物的设计很重要。 GCcontent, hairpin, self-dimer这些都要考虑到。
Bgl2 |
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z*****6
发帖数: 1486 | 34 exactly...specificty is the main concern... Charge is an important reason,
and besides, aptamer is too flexible, can frequently undergo structure
change in response to target or non-preferential target..there are several
papers talking about these issues.
Pegaptanib is a successful example of aptamer used as a drug...
I doubt the specificty of aptamer for a long time. However, in nature, the
special DNA structures, like ribosome RNA, hairpin structures, cloverleaf
structure...can act as specific... 阅读全帖 |
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e*r
发帖数: 103 | 35 有什么在线软件可以预测RNA序列的结构？比如 hairpin什么的 |
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B******o
发帖数: 496 | 36 这个library是based on pLKO hairpin shRNA。 这种shRNA比较高效。
OpenBiosystem还有另一种miR based shRNA pooled library。不过俺试过的～20
shRNA
clones knockdown效率都很差。但是这个library已经被好几个lab用过了(Gregary
Hannon, Michael Green等).你可以权衡一下,呵呵
Good luck
readout. |
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d******u
发帖数: 178 | 37 shRNA library的话，好像就Sigma和Thermo/OpenBiosystems两家有。这两家不过是
Broad和CSH这两个source的distributor，主要就是pLKO和pGIPZ两种骨架的shRNA.两种
我都用过，因为每个基因一般会order3-5个hairpin，基本上里面至少有一个的
knockdown是不错的。 |
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s*********y
发帖数: 387 | 38 biomacro, thanks for the infor.
I will not consider openbiosystem, as heard many complains about its
efficacy.
can you explain more about this
"这个library是based on pLKO hairpin shRNA。 这种shRNA比较高效"
I also worry about that for one cell, it may be infected by more than
one type of virus, making the downstream identification of specific ones
tricky?
do you think the flow based assay will be sufficient?
thanks. |
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d*p
发帖数: 534 | 39 I am using Broad library. There are 3 major problems for all the available
libraries.
1st, huge shRNA variation in pool, which means you are going to lose some
shRNAs due to low signal.
2nd, readout, both microarray and deep sequencing are available, however, if
you can not avoid PCR on the hairpin, you will always have difficulty in
the secondary structure.
3rd, even 5 shRNAs per gene, you will still find a large number of genes
without effective shRNA.
If you only need to find some interesting... 阅读全帖 |
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B******o
发帖数: 496 | 40 pLKO shRNA是那种很传统的小RNA加个环，属于人工做的hairpin。但KD效果不错，俺买
来的或者自己做的，总有几个有很高的KD效率。总之成功率比较高，用着放心。
你如果担心一个细胞多个virus感染，可以把MOI控制好。Sigma给你的virus应该是已经
测好titer的，你计算一下尽量用低MOI，比如MOI=1. 这样的话细胞基本都只有一个
virus。
Flow是比较高效的方法，如果你确信有比较好的marker可以收集你要的细胞。收集好了
以后送deep seq就知道有哪些shRNA在里面了。
不过deep seq你需要好的data processing的人，noise很多，得想办法滤掉 |
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d*p
发帖数: 534 | 41 Yes, the hairpin structure interferes PCR and sequencing. So part of the
readout will be biased due to different PCR efficiency. Since you only want
to get some interesting genes, it is still feasible to your purpose. |
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i*****g
发帖数: 11893 | 42 加DMSO 可以到10%，
以前PCR过一个cDNA， N端严重hairpin |
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g*********d
发帖数: 233 | 43 MicroRNA 和病毒
作者：王磊
上海交通大学生命学院研究生
摘要：
microRNA(miRNA)是真核生物体内一组内源性的 21—25nt 长的非编码蛋白质的短序列
RNA，它们能通过碱基配对的方式与生物体中的 mRNA 分子相结合来参与调节基因的表
达。自 2000 年至今，miRNA 的研究发展的速度极快并且影响的范围也非常的广泛，而
且分别在2002年和2003年度中miRNA入选了Science杂志年度十大科技突破。因此，
miRNA是 RNA 研究的又一个突破，被称为 RNA 的第二次革命。目前的研究已发现
miRNA 参与了很多重要的生命活动过程涵盖了发育、凋亡、代谢、人类疾病以及病毒侵
染等方面。在病毒侵染宿主和宿主抵抗病毒的过程中病毒编码的 miRNAs 和宿主编码的
miRNAs 均发挥了重要的作用。这无疑为病毒的侵染以及宿主抵抗病毒的侵染的研究提
供了新的思路和新的领域。因此，本文的主要目的在于阐述 miRNA 的一些基本概况以
及在病毒中主要的研究方向和进展，最后对这个具有跨时代意义的小分子进行展望。
关键词：miRNA vmiRNA 功能 宿主的 miR... 阅读全帖 |
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n******2
发帖数: 971 | 44 I have the exact same question as LZ asked. Why can't we just use shRNA to
do transient transfection to knock down a gene? Once the shRNA constructs
get into cells, small hairpin RNA will be transcripted, which will be
further chopped by Dicer into siRNA. Thereafter, shRNA shares the same
mechanism for knocking down certain gene as siRNA does. What's the reason
to make stable transgenic cell line? |
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n****0
发帖数: 696 | 45 有些manual上建议3‘端用G or C,可是用软件设计的引物末端经常是AT，稍微改一下
rating就会变得很低，因为hairpin，dimer之类的，这种情况我是应该完全相信软件，
还是确保末端是GC更重要啊？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 46 HTTps://sysbio.med.harvard.edu/faculty/yin/
Nature 1月 2011 同期 一作同时两篇 from Pierce Lab at CalTech
理论RNA自我组织反应经路模拟内容的
Yin, P., Choi, H.M., Calvert, C.R., & Pierce, N.A. (2008). Programming
Biomolecular Self-Assembly Pathways. Nature, 451(7176), 318-22. PMID:
18202654. pdf.
和DNA发夹模式用于DNA自我组织反应经路模拟内容的
Yin, P., Choi, H.M., Colby, R.C., & Niles, A.P. (2008). The abstraction of a
DNA hairpin motif is used to program diverse self-assembly (and disassembly
) pathways. Nature, 451, 318-22. pdf.
他那会的老板是牛津的... 阅读全帖 |
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k****n
发帖数: 42 | 48 thanks very much!! very helpful!!! |
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m***T
发帖数: 11058 | 50 非常好的讨论，学习了。对于双链的DNA，它似乎是用hairpin的方式来读取的。
它的优势大家已经讨论过了，从一个竞争者的角度来看，我来提点它存在的问题（至少
从目前看）。
1、对于一个今年下半年就要上市的产品，到现在都没有真正的data出来供大家参考。
它present的data太小，能不能scalable，如何能做到scalable后保持相同甚至更高的
accurate rate，是它要面临的一个大问题。
2、用protein做介质，稳定性能否保证。看介绍它们只能保证6个小时，临界情况下的
data quality如何，这个还得等到有了具体的data才能知道。
3、它依赖于长而完整的DNA来有效测量，那么对于一些短的sequences诸如short
amplicons及FFPE等临床样本则基本上没有用武之地。不知道这个是不是它的一个短板？
还有些其它的，但觉得这几点最重要。 |
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