L*****t
发帖数: 56 | 1 想要研究某个蛋白的功能，HepG2里有这个蛋白完整的代谢通路但是这个蛋白本身也有
表达。现在想敲除本底表达后用Flp-FRT引入突变体。只是单纯的敲除，TALEN和CRISPR
哪一个更合适？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 2 Mark again and thx.
--from FDU Alumni
发信人: giantbird05 (大鸟), 信区: Biology
标 题: Re: 想在HepG2细胞系里敲除一个基因，用TALEN还是CRISPR容易？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 26 01:39:25 2013, 美东)
mark;求科普 |
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F*****1
发帖数: 37 | 3 这里有同学或老师是TMC的吗，你们有没有哪个实验室有状态比较好的HepG2细胞系分我
一点。我们实验室的这个细胞系已经传了好多年了，形态已经有很大的变化了。可以私
信给我，我上门去取。
非常感谢 |
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p*****u
发帖数: 191 | 5 乙肝，国病，在过去里程碑式的研究发现中没有一个源于国内科学家的发现，无论
是病原发现、基因克隆、还是疫苗开发、或者治疗性的药物。北生所的李文辉课题组发
现乙肝新受体：NCTP基因，这个是一个有意义的研究，但是这个研究是里程碑式的发现
吗？是独一无二的开创，还是众多研究发现中的其中一员，新浪微博上有一位传染病专
家这样评论“一篇文章而已”。
从临床和疾病控制角度来说，控制乙肝的关键依然是提高疫苗接种的覆盖程度，这
是对群体最有效的方法，更多的精力和物力应该集中到提高疫苗保护率，降低疫苗失败
的研究原因中去。对于现症的慢乙肝患者，更重要的是提高医保的覆盖面积，让更多病
人有条件接受规范的、长疗程的抗病毒治疗。对于肝硬化和肝癌的患者，更重要的采用
综合的治疗措施，主要是外科方法来延长生命。正如10年前出现的SARS，传染病隔离措
施的重要性远远超越病原学研究。这些是大范围的政府和政策行为，卫生部的最大的工
作目标就是让每人每年享有300元的卫生服务。
饶毅教授近期对乙肝的研究进展进行了非常好的描述，饶教授列举了乙肝里程碑的
发现、列举了国内科学家在乙肝动物模型研究中的重... 阅读全帖 |
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j*******n
发帖数: 62 | 6 That is the point. Long time ago, people has found that preS could bind
HepG2 cell, but HepG2 cell could not infected by HBV particles. However,
transfect HBV genome into HepG2 could budding infective HBV particles so
called HepG2.2.15 cell line. Drug screen based on the virus replication
inhibitor is useing this cell line. Li's paper just missed a point that what
the specific function of this receptor during virus infection. Indeed it
can bind preS, but lot of other proteins can bind preS. Wha... 阅读全帖 |
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s****9
发帖数: 932 | 7 我刚才吃饱了撑着pubmed了一下“NTCP and HepG2”，HepG2确实不表达NTCP。为了用
HepG2研究NTCP，都需要做stable transfection。
看这段：
“Human hepatoblastoma cells (HepG2), cells that have lost native Ntcp
expression, were stably transfected with the rat Ntcp gene.”
PMID: 14598021。
不知道你们实验室是不是做HBV的，还是刚刚半路出家。
HBV |
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n********y
发帖数: 187 | 8 你看了ROCKFELLER的孔晓飞的评论文章---
乙肝受体的发现： The best or one of the best?
在NTCP发现之前的10余年前，就有这些发现了，原谅我现在没有时间去找更新的文
献。NTCP与其他的不同之处，在于如果将其转染对HBV不易感的常用肝细胞系HepG2，能
导致HepG2对从病人中分离的HBV易感，文章中指出还能HBV能完成复制，我很好奇的读
读原文，因为这将是研究HBV病毒生物学最佳的细胞模型。可是：
1). 转染NTCP的HepG2细胞在一个视野里能看到几个细胞表达HBsAg，这是NTCP转染
的stable cell line，感染的效率这么低（～10%），什么情况啊？ 这跟NTCP的表达水
平有关吗？这样的细胞模型不是一个完善的模型！
2). 这些受感染的细胞能表达乙肝的抗原，细胞内能检测到HBV mRNA，可是怎么看
不到上清里面的HBV-DNA，从细胞里面出来的病毒子代还具备感染动物或细胞系的能力
吗？研究者始终是将HBsAg和HBeAg的分泌作为HBV复制的标志物，忽略了这些抗原中很
多只是表达出来的病毒抗原，而不是... 阅读全帖 |
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n********y
发帖数: 187 | 9 你看了ROCKFELLER的孔晓飞的评论文章---
乙肝受体的发现： The best or one of the best?
在NTCP发现之前的10余年前，就有这些发现了，原谅我现在没有时间去找更新的文
献。NTCP与其他的不同之处，在于如果将其转染对HBV不易感的常用肝细胞系HepG2，能
导致HepG2对从病人中分离的HBV易感，文章中指出还能HBV能完成复制，我很好奇的读
读原文，因为这将是研究HBV病毒生物学最佳的细胞模型。可是：
1). 转染NTCP的HepG2细胞在一个视野里能看到几个细胞表达HBsAg，这是NTCP转染
的stable cell line，感染的效率这么低（～10%），什么情况啊？ 这跟NTCP的表达水
平有关吗？这样的细胞模型不是一个完善的模型！
2). 这些受感染的细胞能表达乙肝的抗原，细胞内能检测到HBV mRNA，可是怎么看
不到上清里面的HBV-DNA，从细胞里面出来的病毒子代还具备感染动物或细胞系的能力
吗？研究者始终是将HBsAg和HBeAg的分泌作为HBV复制的标志物，忽略了这些抗原中很
多只是表达出来的病毒抗原，而不是... 阅读全帖 |
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u**********0
发帖数: 248 | 10 我们实验室最近重复了elife的那篇文章的关键实验。Western发现HepG2细胞本身也有
较高的NTCP表达，人的原代肝细胞的NTCP水平比HepG2高一到两倍（文章中RNA水平要高
1万倍）。建立的NTCP稳定表达的HepG2细胞系，按照文章的方法没有成功感染HBV。
文章的发现很令人兴奋，很多实验室都期待用这个病毒体外感染的细胞模型去研究HBV
的系列问题。希望有更多的实验室能重复出这个结果。如果两年内只是这一个实验室在
发相关文章，而没有其他的lab发文章，可能还有什么问题。所以要谨慎乐观。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 11 建立HBV expressing cell line，用HuH7大概不是个好选择，因为其分化程度低且敏感
，病毒在其中的复制效率相对较低，比不上HepG2。
此外，如果你想建立表达HBV Genotype B型的细胞系，必须要筛选细胞培养适应性病毒
株，而不能直接用患者体内分离到的毒株或者所谓基因型“标准株”，因为这些
clinical isolates在细胞培养条件下的复制能都很差，需要在体外培养条件下积攒一
系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达，尤其对于本身复制能力就相对差的B型
HBV病毒。目前广泛使用的几种HBV expressing cell line例如HepG2.2.15/HepG2 H1.3
等，都采取了类似的策略。 |
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U*******n
发帖数: 824 | 12 在导师任先达的指导下完成学位论文一个月后，李红良迎来了答辩。这也意味着他在暨
南大学药学院药理学专业的三年硕士学业即将结束。那是在2002年的5月。在《致谢》
部分，李红良说，导师三年来对他的教诲，“令学生终生受益”。
的确，这三年，师生二人的合作可谓“硕果累累”。在这本73页的硕士学位论文中列出
了期间发表的14篇文章（7篇英文，7篇中文）——除去两篇外，李均是第一作者；而其
导师则是绝大多数文章的通讯作者。
作为一名硕士研究生，李的创记录的“高产”引起一片哗然。2001年在其他绝大多数学
生还没有来得及收结果的时候，他就发论文了，而且一发不可收拾，当时就有同学举报
，药学院领导查了，但不了了之。
时光飞逝，当年的硕士“小李”，在获得北京协和医科大学博士，经历2年多国外博士
后，2008年11月从多伦多回到了武汉大学人民医院（当年3月以李红良为第一作者出版
的一篇论文随后被撤稿），并成为了教授。几年下来，李红良组建了据说是100多人的
研究团队，更有“杰青”，“长江”加身，事业可谓如日中天。
然而，2017年是他喜忧参半的一年。喜的是他一年发了5篇《自然医学》论文，忧的是
有举报人向... 阅读全帖 |
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S***n
发帖数: 1281 | 13 This was published in Nature, http://www.nature.com/articles/srep09384?WT.ec_id=SREP-631-20150331
PHY906 (KD018) is a four-herb Chinese Medicine Formula. It has been shown to
potentially enhance the therapeutic indices of different class anticancer
agents in vivo. Here, PHY906 is reported to enhance the anti-tumor
activity of Sorafenib in nude mice bearing HepG2 xenografts. Among the four
herbal ingredients of PHY906, Scutellaria baicalensis Georgi (S)
andPaeonia lactiflora P... 阅读全帖 |
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p******n
发帖数: 330 | 14 有人在养hepG2细胞吗
正在养这个细胞。发现这种细胞很难养，不仅不能单层贴壁，很容易成团生长外，用非
酶消化液（non-enzyme buffer）消化后居然能死一半。由于需要上流式细胞仪，hepG2
又是贴壁细胞，所以必须要detach，但是这个损伤消耗不起呀。而且我的实验是不能用
trypsin来消化细胞，因为trypsin会让我损失一些细胞表面的膜蛋白。我用非酶消化液
消化的时间很短，只有1分钟，消化后立即洗涤，我分别检测了消化后在不同温度下孵
育半小时和一小时，时间没有让细胞死亡率增加，但是温度对其有影响。（我是用PI染
色鉴定细胞死亡的）
有没有同学在养这个细胞，能不能分享一下经验。我的细胞是从ATCC买的，所有的细胞
相关用品，如medium等都是购自ATCC，按其官网上的要求做到。或许有同学的细胞从别
的地方买的，会更好养一些呢。 |
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b*******6
发帖数: 39 | 15 1 HBV和HDV能和一些肝癌细胞系bind是有争议的，但是没有争议的是所有的肝癌细胞系
都不能被HBV感染，但是该文章将NTCP表达之后，实现了HepG2和Huh7的被感染，是一个
非常了不起的结果，虽然HepG2和Huh7上可能有其他蛋白帮助了感染。另外，在293T里
面，HBV是不能复制的，必须要有肝细胞特异性转录因子的支持。
2 是的，但是他的文章不能解决这一问题，只是解决了乙肝病毒的嗜肝性而非物种差异
性。
subtype
been |
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b*******6
发帖数: 39 | 16 1 HBV和HDV能和一些肝癌细胞系bind是有争议的，但是没有争议的是所有的肝癌细胞系
都不能被HBV感染，但是该文章将NTCP表达之后，实现了HepG2和Huh7的被感染，是一个
非常了不起的结果，虽然HepG2和Huh7上可能有其他蛋白帮助了感染。另外，在293T里
面，HBV是不能复制的，必须要有肝细胞特异性转录因子的支持。
2 是的，但是他的文章不能解决这一问题，只是解决了乙肝病毒的嗜肝性而非物种差异
性。
subtype
been |
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t****b
发帖数: 47 | 17 2012年11月13日，新的生物学刊物eLife发表论文：中国科学家攻克了一个长期困扰国
际科学界的难题，而这一基础科学问题也与人类、特别是中国人民的健康相关。
过去，世界和中国忽略了1980年代我国科学家在条件艰苦时代做出重要贡献，我们现在
应该赞广西肿瘤防治研究所的严瑞琪和苏建家等、北京第二传染病院的余昌晏等和中国
医学科学院的庞其方等建立乙肝动物模型；
现在，我国已经有条件和能力改革科学管理体制机制、提供适当环境，让一些科研机构
年富力强的科学家心无旁骛，如北京生命科学研究所的李文辉带领学生和同事发现乙肝
病毒受体；
将来，希望全国科研机构能推广适合各个学科和机构自身规律的体制机制改革，使大批
年轻人集中精力在专业上充分发挥作用，他们大有作为才能使中国的科学大有希望。
肝炎和肝炎病毒
肝炎在全世界有广泛的危害，中国人群肝炎患病率尤其高。多种病毒导致病毒性肝炎：
甲、乙、丙、丁、戊（A、B、C、D、E）等。
全球二十亿人曾感染乙型肝炎病毒（HBV），慢性乙肝感染超过3.5亿人。即使在乙肝疫
苗已经研制成功多年以后，我国还有逾九千万人感染过乙肝病毒，上千万乙肝患者，每
年感染超过百万... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 18 终于得闲可以坐下来写点东西了，喘口气先。
首先，这篇评论是目前我看到的写得相对最中肯的一片，原因很简单，作者确实是这个
领域的人，且就事论事，没有想很多人那样屁股决定脑袋。文章的开头和结尾已经给作
者的态度清清楚楚定了基调。所以有人希望用这篇评论来扯什么“皇帝的新衣漏洞百出
”的淡，请回头再仔细看看作者自己的是怎么明确表态的。当然某些人惯于断章取义，
这些人不早生个40-50年真是太浪费了。
闲话不表了。一篇好paper，并非一定是十足完美而没有质疑的，但一篇好paper一定是
经得起质疑经得起时间考验的。眼下很多实验室包括作者包括我自己都正在基于NTCP这
一新发现进行新的研究，时间自然会说明一切。
这篇文章，指出了原paper中的诸多不足，其中的一部分我也是很同意的，事实上拿出
任何一片CNS paper，基本都可以照猫画虎的说出个123点不足和缺陷来。至少我们在开
journal club的时候，无论出自哪个杂志/谁人之手，还没有哪篇paper能幸免的。重要
的问题是，这些质疑和不足，是否根本性的动摇了文章的基本结论，还是只不过是需要
锦上添花再进一步或者揭示了下一步需要的后续工... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 19 去年11月13号，NIBS李文辉博士的研究团队在eLife创刊号上首次发表了其开创性的研
究成果，即NTCP为HBV病毒的功能性受体，揭开了该领域近20年来一个未解之谜。随后
，这一发现及其相关报道立刻在本版引发的热烈的讨论，赞美，质疑，讥讽，各种论调
此起彼伏，着实热闹了一阵子。之前长期潜水的我，当时也不甘寂寞，一抒己见（http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31752161.html）。
转眼间一年就这么过去了，今天查资料的时候无意中看到，该文在google scholar上显
示的引用已经超过了40次。然而当时的各种讨论，想必已被大部分人所遗忘，回头再看
，不由得会心一笑。节前索性做一回顾以资纪念吧。
eLife首文之中，受质疑和诟病最多的，应该算是细胞模型（HepG2/Huh7）上并不理想
的感染/复制效率，以及非肝源性细胞上感染实验的缺失。尽管根据已有的知识和经验
，前者并不意外，后者乃是时间问题，但在当时，确实让很多尤其是非本领域的人士心
存疑虑，NTCP究竟真的是受体，或仅仅只是一个复制相关必需因子。
在今年10月份上海举办的第2... 阅读全帖 |
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y******m
发帖数: 143 | 20 在文章The effects of HBV integration into the genomes of HCC patients里作者
发现高somatic mutation 8957/sample,2.89/megabase。在文章exome sequencing of
HBV-associated hepatocellular carcinoma 指出T:A >A:T在样本中是高频出现的。
在文章The genomic landscape of fibrolamellar hepatocellular carcinoma：Whole
genome sequencing of ten patients 也发现大量mutation.
在science的文章中用了UTUC的细胞列作为阳性对照。从上面发表的文章看出病毒也可
以引大量的类似突变。AA在肝脏引起的突变会和在肾脏一样？它们为什么不用HepG2，
hcv感
染的细胞，酒精处理过肝脏细胞，
AA处理过肝脏细胞系区分他们所测到的somatic mutation是AA在肝脏独有的。
而且我觉得把所谓的AA signature 是否是... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 21
我不是专家，大概模糊的记得某个专业人士说过这个问题而已。我依稀记得他的说法是
：大部分体内的乙肝病毒都是处于非整合状态的，那些是持续感染以及免疫反应的来源
。整合性的基本上没有活性（除非被特殊情况激活），所以一旦病人获得了表面抗体把
这些非整合性的病毒给清除掉之后就不再具有传染性。那些整合性的拷贝是干啥的我不
知道，也不记得他是怎么说的了。
关于整合的时间以及后果，我上网找了几个最新的学术论文（不要看百度之类，那里是
老的说法），里面的说法大致是，整合虽然在早期也能出现，但是大部分情况都是在晚
期发现。整合对肝癌发生虽然几乎肯定有作用，但更可能是一个间接作用而不是直接作
用：
-------------------------------------------
http://www.wjgnet.com/1009-3079/14/743.pdf
1.1 不同感染阶段的整合 乙型肝炎病毒整合入
肝细胞基因组可见于大量的乙型肝炎病毒相关
肝细胞癌标本中[2-4]. 这一发现极大的推动了对
于乙型肝炎病毒基因整合在肝细胞癌发病机制
中地位的研究. 但是与逆转录病毒的感染不同,
乙型肝炎病... 阅读全帖 |
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g******g
发帖数: 63 | 23 大家好，
请问研究apoptosis在HepG2细胞里的情况，用什么方法比较好？
听说很多方法都不稳定，
DNA ladder又不能定量，
有没有好的kit可以推荐一下啊。。。
谢谢啦。。。 |
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g******g
发帖数: 63 | 24 大家好，
想请问有没有人把HepG2细胞的protein lysis做过proteomic array？哪家公司比较好
啊？谢谢了！！ |
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Z******5
发帖数: 435 | 25 c-Myc内源性的很难检测，信号很弱，HepG2，A549的都是这样。检测knockdown的效果
感觉就是在YY。 不过转入pcDNA3.1过表达的，信号非常非常非常（n个非常）强。 |
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l*****e
发帖数: 138 | 26 大概看了一下，数据很多．不过我第一反应是，为什么他们要用HepG2 这个肝癌细胞株
做体外试验呢？
of
Jing |
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j*****d
发帖数: 787 | 27 http://the-scientist.com/2011/09/20/plant-rnas-found-in-mammals
+Plant RNAs Found in Mammals
MicroRNAs from plants accumulate in mammalian blood and tissues, where they
can regulate gene expression.
By Cristina Luiggi | September 20, 2011
11 Comments Link thisStumbleTweet thisDreamstime.com, Rewat
WannasukMicroRNAs from common plant crops such as rice and cabbage can be
found in the blood and tissues of humans and other plant-eating mammals,
according to a study published today in Cell Research.... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 28 个人的经验，我手头的大部分普通细胞系（Hela，293/FT，BHK，HepG2，Huh7，vero，
CHO...）在-80度存半年以上，复苏效果会大大的打折扣，超过1年的，基本就惨不忍睹了 |
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w******y
发帖数: 2504 | 29 请问大家作肝细胞体外实验的时候是用HEPG2细胞株吗？如果想原代培养的话，是否困
难？能否分享一下您的技术心得？ |
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w***a
发帖数: 133 | 30 hepg2就是随便养养都不会死的
原代细胞要养也不困难 就是体力活
不能用普通的加血清medium 要配一打东西混合的cocktail来养
如果不用类似于myc之类的东西让他永生，他是只会死不会分裂的 |
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a*******n
发帖数: 156 | 31 HepG2如果serum free, 3天之内会全部死光 |
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q**********0
发帖数: 335 | 32 最近用一蛋白和p53-TA-Luc 在HepG2作共转染，发现该蛋白对p53-TA-Luc 有３倍的激
活（相对于空载体），但是，当该蛋白的ATG 被knock out后，发现该阴性对照也有激
活,还稍高一点，还稍高一点。请问这种数据怎么解释呢？谢谢！ |
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q**********0
发帖数: 335 | 33 Which cell line is good on the study of cell cycling and cancer? NIH3T3,
Hela, HepG2 or Huh 7? Thanks a lot! |
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b**********8
发帖数: 349 | 34 I have been handling with HepG2 cell line. This is a p53-wildtype cell line.
I believe you can try it. |
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q**********0
发帖数: 335 | 35 Thanks. Do you know whether Rb-E2F pathways is intact in HepG2?
line. |
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q**********0
发帖数: 335 | 36 Recently, I transfected pmaxGFP plasmid to HepG2 cells by using
Lipofectamine2000 to track the positive-transfected cells with another test
plasmid. However, the FACS result showed no separation between GFP positive
or negative cells, only one cell population. I don't know whether the
transfection efficiency is too high that almost every cell was transfected?
or pmaxGFP is not a proper GFP plasmid to use in FACS? Your suggestions will
be appreciated. |
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b******s
发帖数: 5365 | 37 可以，但要很小心操作，特别是容易结团的细胞比如hepG2什么的，另外同时染个PI |
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b**********8
发帖数: 349 | 38 DharmaFECT 4 works well all the time in our lab. We regularly handle with
PLC5,Hep3B,HepG2 and Huh7 cells. |
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j****x
发帖数: 1704 | 39 还没看到文章最终出来，目前对其意义还不好评价，肯定是很有价值，究竟高到什么程
度，取决于受体的“完备性”。
HCV之所以这最近十年药物研发突飞猛进，以至于相当多（如果不是大多数的话）
clinician都将Hepatitis C视为problem solved，就是因为HCV体外复制和感染体系的
建立，以及由此而生的高通量药物筛选。而目前HBV体外感染只能通过原代肝细胞或者
HepaRG细胞系来完成，来源受限成本过高感染效率也比较低（5%-10%），自然无法成为
通用的筛选模型。如果此受体的存在能够将普通肝细胞系如HepG2/Huh7（不能被HBV感
染）甚至非肝源性细胞系转化为HBV易感性细胞系从而取代PHH/HepaRG的话，那么无论
是对HBV基础性研究还是药物研发都有极为重要的意义。在此基础上，其后的HBV感染型
小鼠模型也应该是水到渠成的事情。动物模型对小分子药物研发的价值相对没有细胞模
型那么大，但是对于治疗性疫苗的开发而言有一定的价值，当然，对于HBV相关免疫学
肿瘤学的研究肯定是非常重要了。
目前乙肝治疗的根本问题在于，没有能有效清除慢性感染根源（cccDNA）的药物，... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 40 还没看到文章最终出来，目前对其意义还不好评价，肯定是很有价值，究竟高到什么程
度，取决于受体的“完备性”。
HCV之所以这最近十年药物研发突飞猛进，以至于相当多（如果不是大多数的话）
clinician都将Hepatitis C视为problem solved，就是因为HCV体外复制和感染体系的
建立，以及由此而生的高通量药物筛选。而目前HBV体外感染只能通过原代肝细胞或者
HepaRG细胞系来完成，来源受限成本过高感染效率也比较低（5%-10%），自然无法成为
通用的筛选模型。如果此受体的存在能够将普通肝细胞系如HepG2/Huh7（不能被HBV感
染）甚至非肝源性细胞系转化为HBV易感性细胞系从而取代PHH/HepaRG的话，那么无论
是对HBV基础性研究还是药物研发都有极为重要的意义。在此基础上，其后的HBV感染型
小鼠模型也应该是水到渠成的事情。动物模型对小分子药物研发的价值相对没有细胞模
型那么大，但是对于治疗性疫苗的开发而言有一定的价值，当然，对于HBV相关免疫学
肿瘤学的研究肯定是非常重要了。
目前乙肝治疗的根本问题在于，没有能有效清除慢性感染根源（cccDNA）的药物，... 阅读全帖 |
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b*******6
发帖数: 39 | 41 HepaRG分化之后可以被HBV感染，文章也表明HepaRG只有在分化之后才表达，当然，这
是相关性。除了使HepG2和Huh7被感染外，人猴NTCP互换的实验也非常说明问题，直接
表明人猴对HBV易感性不同是因为NTCP少许区别。 |
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v********e
发帖数: 1597 | 42 虽然不是搞HBV的也算是一直做病毒研究，这篇文章有比较好的结果但是不够Solid。下
面几个问题需要回答:
1. 为什么转染了hNTCP的HepG2细胞感染HBV的阳性率如此之低？低于10％。
2.能不能有种细胞支持HBV复制，但不能支持其感染，通过转染hNTCP后支持其感染和复
制？
3.有没有得到抗hNTCP的单抗或多抗能够抑制HBV的感染？
如果能很好的回答这3个问题，就比较的确信了，期待他们进一步的研究成果。 |
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b*******6
发帖数: 39 | 43 HepaRG分化之后可以被HBV感染，文章也表明HepaRG只有在分化之后才表达，当然，这
是相关性。除了使HepG2和Huh7被感染外，人猴NTCP互换的实验也非常说明问题，直接
表明人猴对HBV易感性不同是因为NTCP少许区别。 |
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v********e
发帖数: 1597 | 44 虽然不是搞HBV的也算是一直做病毒研究，这篇文章有比较好的结果但是不够Solid。下
面几个问题需要回答:
1. 为什么转染了hNTCP的HepG2细胞感染HBV的阳性率如此之低？低于10％。
2.能不能有种细胞支持HBV复制，但不能支持其感染，通过转染hNTCP后支持其感染和复
制？
3.有没有得到抗hNTCP的单抗或多抗能够抑制HBV的感染？
如果能很好的回答这3个问题，就比较的确信了，期待他们进一步的研究成果。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 45 能结合不等于能进入，能进入不等于能复制，能复制不等于能感染（这里特指完整的
lifecycle）。
这篇文章的key point就在于，在Hep2G上实现了完整的viral lifecycle，算是前所未
有了。
关于受体特异性的问题，我觉得文章中已经某种程度上回答了。一方面，NTCP具有肝细
胞特异性表达，且仅在高度分化的肝细胞中才高表达，在HepG2及未分化的HepaRG中表
达量很低，这就解释了HBV感染的组织特异性的问题。另一方面，由于NTCP核心结合序
列上的关键差别，导致HBV无法感染猴肝细胞，这就至少部分解释了HBV感染的种属特异
性问题。
当然后续还有很多问题有待解决。比如有人提出说表达NTCP的293细胞能不能被感染，
这想法显然很有趣，只是在HBV entry之后（加入确实可以的话），是不可能在293细胞
里正常复制的，所以必须借助其他手段来鉴定病毒侵入的过程，比如使用特异性标记的
病毒颗粒，这块工作我相信很快就会有结果的。另一块就是小鼠模型，究竟成与不成，
很快就见分晓。
what |
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j****x
发帖数: 1704 | 46 能结合不等于能进入，能进入不等于能复制，能复制不等于能感染（这里特指完整的
lifecycle）。
这篇文章的key point就在于，在Hep2G上实现了完整的viral lifecycle，算是前所未
有了。
关于受体特异性的问题，我觉得文章中已经某种程度上回答了。一方面，NTCP具有肝细
胞特异性表达，且仅在高度分化的肝细胞中才高表达，在HepG2及未分化的HepaRG中表
达量很低，这就解释了HBV感染的组织特异性的问题。另一方面，由于NTCP核心结合序
列上的关键差别，导致HBV无法感染猴肝细胞，这就至少部分解释了HBV感染的种属特异
性问题。
当然后续还有很多问题有待解决。比如有人提出说表达NTCP的293细胞能不能被感染，
这想法显然很有趣，只是在HBV entry之后（加入确实可以的话），是不可能在293细胞
里正常复制的，所以必须借助其他手段来鉴定病毒侵入的过程，比如使用特异性标记的
病毒颗粒，这块工作我相信很快就会有结果的。另一块就是小鼠模型，究竟成与不成，
很快就见分晓。
what |
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b*******6
发帖数: 39 | 47 法国我不知道，德国有研究HBV的传统，是因为海德堡大学Heinz Schaller是HBV感染研
究的领军人物，稍微相当于HCV的Rice，李文辉这次的结果也是直接建立在在Heinz
Schaller之后Urban教授多年对Pres2-48作用的研究基础之上，在这之前的近8年里面，
全世界一直持续不断研究Pres2-48作用的全世界估计不超过3个实验室，为什么，一是
因为研究HBV经费很少（欧美流行率比中国低多了），二是研究HBV很难，缺少一个体外
感染的细胞模型（所以如果HepG2-NTCP如果真有文章宣称的那么高的感染效率的话，无
论给与他多高的荣誉都不过分，因为他解决了几十年来一直困扰乙肝基础研究的问题：
自然感染的细胞模型，前前后后估计有近百家实验室近百篇文章，但是都没一个是成功
的）。
另外，乙肝疫苗在中国其实非常成功和有效，在低龄儿童里面携带率已经非常低了，乙
肝最主要的问题是1亿的携带者如何治疗，对于预防而言，乙肝疫苗和HBIG足够足够成
功了 |
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f*******d
发帖数: 92 | 48 我刚开始做蛋白质方面的东西，是小白，希望大家赐教！我有一个蛋白A，在C
terminal加了Myc tag 和his tag, 然后在hepG2里面超表达。我想用mass spec看在A蛋
白的interacting proteins, 这种情况是用Myc tag来做IP 好呢，还是直接把lysate上
Ni TNA 的柱子呢？ |
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m********m
发帖数: 263 | 49 不好意思，我用的是HepG2 cells 和MCF-7， knockdown一个激酶后，cells变得很“邪
恶，张牙舞爪”的样子 |
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b**********8
发帖数: 349 | 50 如题，最近研究一个基因，发现敲掉他之后细胞增殖变慢，p53-p21激活，做flow 看
cell cycle发现有G1/S arrest，虽然统计学p小于0.05，但是看起来很marginal，特别
是转了control siRNA的细胞G1 比例都特别高，达到60%以上，请问这是怎么回事？有
什么好的trick吗？
tips：肝癌细胞株HepG2，转染control/smartpool siNRA targeting a gene 48小时候
收细胞，固定于70%的乙醇。 |
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