d****7
发帖数: 109 | 1 问个弱问题
在做ChIP时，IP后我们用下面的buffer来wash IP:
50 mM HEPES-KOH
500 mM LiCl
1 mM EDTA
1.0% NP-40
0.7% Na-Deoxycholate
谁知道这里的LiCl是干嘛用的？我估计是提供一定盐浓度，洗去non-specific binding
。但是为什么不用常用的NaCl，而是用LiCl呢？谁知道有没有什么特殊原因么？
谢谢指教！ |
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a*****n
发帖数: 2835 | 2 看什么培养基，HEPES buffer的可能不变黄
还要看什么细胞类型 |
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d****i
发帖数: 2346 | 3 我没说清楚，是做western用的。
我们用Thermo的TRIS-HEPES-SDS，感觉跑太快了，条带有点拖。 |
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k*****n
发帖数: 323 | 4 我们用的是rick young 的protocol。
Lysis Buffer 1 Add protease inhibitors just before use, filter and keep cold
. Consists of 50 mM HEPES-KOH, pH 7.5, 140 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10% glycerol,
0.5% NP-40, 0.25% Triton X-100, 1× protease inhibitors Lysis Buffer 2 Add
protease inhibitors just before use, filter and keep cold. Consists of 10 mM
Tris-HCl, pH 8.0, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.5 mM EGTA, 1× protease
inhibitors
Lysis Buffer 3 Add protease inhibitors just before use, filter and keep cold
. Consists of... 阅读全帖 |
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x*****o
发帖数: 441 | 6 想定点配buffer的HEPES, lab manager说有几种很贵的,300多500g, 但是VWR有很便宜
的, 50多500g. 她说东西看起来差不多, 纯度什么的.
如果我们不是做细胞什么的,就是普通的RNA, 蛋白实验,只要没有蛋白酶,RNAase就行,
买贵的和买便宜的差别大吗? |
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e**e
发帖数: 166 | 7 我的蛋白是高尔基体上膜蛋白复合体。大概４００－５００Dka。
我用NP４０ 溶解后，用６０％的（NH４）２SO４沉淀可以得到６０％的活性。 现在
过分子筛柱。
我有个（LKB Triacryl GF２００）的柱子 （１。６ x ６０cm） （１２０，０００－
１５，０００，０００）。 我用Hepes buffer （１ml／min的流速。 我在用Blue
Dextran （MW ２，０００，０００）和BSA 的时候， 发现他们同时一起出来了。
这个柱子可以分离吗？ 还有别的建议吗？ |
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p*****c
发帖数: 116 | 8 应该是读博士时候的文章。
SOURCE INFORMATION
From the Department of Endocrinology and Metabolism (W.T., Z.S., H.G., Y.J.,
F.H.) and the Institute of Endocrinology (X.T., Y.L., D.T., X.Y., C.F., W.C
., F.Y., H.D., Y.Y., J.L., Y.C., D.Z., X.S., J.M., X.G., R.Y., Y.T., W.W., T
.G., C.L.), First Affiliated Hospital, China Medical University, Shengyang,
China.
Address reprint requests to Dr. Weiping Teng at the Department of
Endocrinology and Metabolism, First Affiliated Hospital, China Medical
University, No. 15... 阅读全帖 |
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S******e
发帖数: 393 | 9 将S1 (cytosolic protein) 和 S3 (nuclear soluble protein?) 去掉后，剩下的
pellet再用0.1%的Triton extract, 收集到的上清暂称为X，想知道X是些什么蛋白？
Chromatin associated protein?
方法如下：
1. Cells were extracted with Buffer A (10mM Hepes pH7.9, 10mM KCl, 1.5mM
MgCl2, 0.34mM Sucrose, 10% Glycerol, 1mM DTT plus protease inhibitors)
containing 0.1% Triton for 5 min on ice, centrifuge 1300g X5 min, discard
supernatant (S1), wash once with BufferA and discard supernatant.
2. Extract cell pellet with Buffer B (3mM EDTA, 0.2mM EGTA, 1mM... 阅读全帖 |
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n********e
发帖数: 1630 | 10 多谢。终于找到明白人了。我dialysis没有那么多 。我用500x 1h Twice. 这个可能真
的不够。可能有free biotin在 。 下次我一定试试你的dialysis的方法。我octet 信
号才3-4 nm 有的时候更低。就是很低就饱和了。确实说明binding site没了。
另外我是label 4°C 过夜。这样就成了三天时间label一次了。。。
另外我用的是maleimide-PEG2-BIOTIN 50mM HEPES buffer. 标记SH group
另外我也有NHS -LC-BIOTIN... 本来想用BSA 去label做个control 结果bsa也load不
上去
听了你说的。我感觉真的要用更多的dialysis
待会私信再问你。谢谢啊。。。
hours |
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n****0
发帖数: 696 | 11 If I have a solution of multiple components (CsCl, MgCl2, CaCl2, Hepes-Tris,
EGTA and sorbitol) and I know their concentrations (mmol/L), how to
calculate its somolality (mmol/kg)?
Thank you so much. |
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i**********d
发帖数: 853 | 12 首先声明：我的分数很普通，所以这个帖子也没有任何炫耀的意思，只是我在考前
，每天都来看看有没有考经，也经常拿自己的模考成绩和考经中的对照一下，看看自己
复习的效果，从前辈的考经中学到很多。所以，本贴得唯一目的是：希望能给还在准备
step1的朋友们一点提示，吸取我的教训，都考出一个好成绩。
正文：
我是8/06/2012考的Step1，昨天（8/29/2012）早上9:19am拿到成绩---242/85，还
好，和自己估计的成绩240 +/- 5基本一致。万分感谢我的家人的理解和支持，十分感
谢曾经一起学习的战友们和校友们的鼓励和帮助，感谢麦地版的前辈们的考经和经验介
绍。曾经许诺一旦成绩上了230，就写一篇考经，下面就把我的备考经历和一点心得体
会向麦地版的战友们作一汇报，也算是对自己这段人生的一个总结：
一、题库、模考及考试成绩+时间：
UW qBank: 正确率最早25%，考前80-90%
Kaplan qBank: 只做了解剖、遗传，没有统计正确率
Dec 18, 2011, Form3 --- 350
Feb 25, 2012， F... 阅读全帖 |
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i**********d
发帖数: 853 | 13 Jeff的75条口诀：
1).
Chloramphenicol inhibits 50S peptidyltransferase.
喷着氯气的ram(羊)拦住(抑制) 50岁的亚裔太太搬家(转移)(50S亚基肽键转移酶)
Clindamycin & chloramphenicol block peptide bond formation.
克林顿用氯气 吓唬老婆 --> 防止太太贱(肽键)形成
Aminoglycosides bind 30S and inhibit formation of the initiation complex and
cause misreading of mRNA.
Amigo绑架了30S亚裔,抑制了她婚姻的起始,造成她男友的误读
Macrolides block translocation.
带着大沿帽子的人（城管？）挡道--> 不让别人换地方translocation
2).
下肢淋巴回流：
小隐隐于城外蝈蝈窝棚，大隐隐于城内富人水沟
（小隐收集小腿外侧淋巴液，注入腘窝；
大隐收集下肢内侧淋巴液，注入腹股沟；）
3)
imprinting diseas... 阅读全帖 |
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i**********d
发帖数: 853 | 14 首先声明：我的分数很普通，所以这个帖子也没有任何炫耀的意思，只是我在考前
，每天都来看看有没有考经，也经常拿自己的模考成绩和考经中的对照一下，看看自己
复习的效果，从前辈的考经中学到很多。所以，本贴得唯一目的是：希望能给还在准备
step1的朋友们一点提示，吸取我的教训，都考出一个好成绩。
正文：
我是8/06/2012考的Step1，昨天（8/29/2012）早上9:19am拿到成绩---242/85，还
好，和自己估计的成绩240 +/- 5基本一致。万分感谢我的家人的理解和支持，十分感
谢曾经一起学习的战友们和校友们的鼓励和帮助，感谢麦地版的前辈们的考经和经验介
绍。曾经许诺一旦成绩上了230，就写一篇考经，下面就把我的备考经历和一点心得体
会向麦地版的战友们作一汇报，也算是对自己这段人生的一个总结：
一、题库、模考及考试成绩+时间：
UW qBank: 正确率最早25%，考前80-90%
Kaplan qBank: 只做了解剖、遗传，没有统计正确率
Dec 18, 2011, Form3 --- 350
Feb 25, 2012， F... 阅读全帖 |
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i**********d
发帖数: 853 | 15 Jeff的75条口诀：
1).
Chloramphenicol inhibits 50S peptidyltransferase.
喷着氯气的ram(羊)拦住(抑制) 50岁的亚裔太太搬家(转移)(50S亚基肽键转移酶)
Clindamycin & chloramphenicol block peptide bond formation.
克林顿用氯气 吓唬老婆 --> 防止太太贱(肽键)形成
Aminoglycosides bind 30S and inhibit formation of the initiation complex and
cause misreading of mRNA.
Amigo绑架了30S亚裔,抑制了她婚姻的起始,造成她男友的误读
Macrolides block translocation.
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2).
下肢淋巴回流：
小隐隐于城外蝈蝈窝棚，大隐隐于城内富人水沟
（小隐收集小腿外侧淋巴液，注入腘窝；
大隐收集下肢内侧淋巴液，注入腹股沟；）
3)
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i**********d
发帖数: 853 | 16 75条口诀：
1).
Chloramphenicol inhibits 50S peptidyltransferase.
喷着氯气的ram(羊)拦住(抑制) 50岁的亚裔太太搬家(转移)(50S亚基肽键转移酶)
Clindamycin & chloramphenicol block peptide bond formation.
克林顿用氯气 吓唬老婆 --> 防止太太贱(肽键)形成
Aminoglycosides bind 30S and inhibit formation of the initiation complex and
cause misreading of mRNA.
Amigo绑架了30S亚裔,抑制了她婚姻的起始,造成她男友的误读
Macrolides block translocation.
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2).
下肢淋巴回流：
小隐隐于城外蝈蝈窝棚，大隐隐于城内富人水沟
（小隐收集小腿外侧淋巴液，注入腘窝；
大隐收集下肢内侧淋巴液，注入腹股沟；）
3)
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i**********d
发帖数: 853 | 17 75条口诀：
1).
Chloramphenicol inhibits 50S peptidyltransferase.
喷着氯气的ram(羊)拦住(抑制) 50岁的亚裔太太搬家(转移)(50S亚基肽键转移酶)
Clindamycin & chloramphenicol block peptide bond formation.
克林顿用氯气 吓唬老婆 --> 防止太太贱(肽键)形成
Aminoglycosides bind 30S and inhibit formation of the initiation complex and
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Amigo绑架了30S亚裔,抑制了她婚姻的起始,造成她男友的误读
Macrolides block translocation.
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2).
下肢淋巴回流：
小隐隐于城外蝈蝈窝棚，大隐隐于城内富人水沟
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3)
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n******g
发帖数: 662 | 18 Prepare them in HEPES buffer - this is what I learned in ACS meeting. |
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n******0
发帖数: 298 | 19 Recursive partitioning in the health sciences by Heping Zhang. |
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m*********k
发帖数: 10521 | 20 [NextGeneration]
53888 catdoudou Dec 31 ● 新年66个大顺包
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m*********k
发帖数: 10521 | 21 [EB23]
87531 sunnystar Jan 6 ● 先发100个包子(暂时已发完，拿到卡再发366个)
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发帖数: 10521 | 22 [Automobile]
78904 ; njsummer Jan 21 @● 祝大家新年快乐，给你拜个年！
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m*********k
发帖数: 10521 | 23 "[NextGeneration]
bmjknqz Jan 31. ● 散尽家产求祝福"
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发帖数: 10521 | 24 T76879297 Feb 13 ● [bssd]节日发包
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m*********k
发帖数: 10521 | 25 keaiduoduo Feb 16 ● [卡到了!包子申请发了] GC今早批了 个人
keaiduoduo
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m*********k
发帖数: 10521 | 26 "【NextGeneration】
bruce Nov 7. ● 发666包子求祝福老婆顺利deliver"
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m*********k
发帖数: 10521 | 27 "[NextGeneration]az Nov 17. ● [bssd] 散尽家财+求祝福+问问题（关于
哮喘）+奔照片+结网"
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m*********k
发帖数: 10521 | 28 " 【Automobile】
girlfriend Jan 30 . ● [活动]春节新年包"
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L****n
发帖数: 12932 | 29 麦地后遗症。 hepefully people would get over it. that's the sad side effect
of brutal PA from one ID went on for long long time without inhibition. In
medi, i had never fought with anyone but that character, but i still
associate many IDs that were close to him as unfriendly.
.:) |
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