b**e
发帖数: 120 | 1 投稿review回来有一个问题需要做invitro transcription，检测一个特定蛋白对
transcription的影响，但是invitro体系中transcription用的不是SP6或者T7这些改造
过没有保真性的酶，而是RNA polymerase II， 如果不用同位素的话，还有什么手段可
以检测不至于敏感度不够高？用RT PCR，模板DNA太多，消化不完全，negative
control都是阳性结果。。。。 |
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m****s
发帖数: 18160 | 2 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: invitro (invitro), 信区: JobHunting
标 题: Public Health Informatics Scientist Opening
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 8 00:39:44 2018, 美东)
我们有一个public health informatics职位。不办身份。有兴趣发私信。
http://agency.governmentjobs.com/snhd/default.cfm?action=viewJob&jobID=2004165
Job Title: Public Health Informatics Scientist I/II
Closing Date/Time: Continuous
Salary: $31.06 - $58.89 Hourly
$2,484.60 - $4,710.90 Biweekly
$64,599.60 - $122,483.40 Annually
Job Type: Full-Time
Location: ... 阅读全帖 |
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m****s
发帖数: 18160 | 3 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: invitro (invitro), 信区: JobHunting
标 题: Public Health Informatics Scientist Opening
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 8 00:39:44 2018, 美东)
我们有一个public health informatics职位。不办身份。有兴趣发私信。
http://agency.governmentjobs.com/snhd/default.cfm?action=viewJob&jobID=2004165
Job Title: Public Health Informatics Scientist I/II
Closing Date/Time: Continuous
Salary: $31.06 - $58.89 Hourly
$2,484.60 - $4,710.90 Biweekly
$64,599.60 - $122,483.40 Annually
Job Type: Full-Time
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b***d
发帖数: 253 | 4 ☆─────────────────────────────────────☆
llaalways (camper) 于 (Mon Jul 4 19:56:28 2016, 美东) 提到:
[申请ID]
llaalways
[英文版名]
CellularPlan
[中文版名]
手机计划
[所属讨论区]
电脑网络
[申请理由]
提供一个空间让大家讨论各种手机计划：无合同/预付费，合同计划， 以及适用手机
等。主要有：
1 手机plan的比较和选择等等
2 适用于各手机计划的手机购买和选择
3 手机使用的各种问题
4 手机各种app的使用
[治版纲领]
1 畅所欲言，各抒己见
2 本版信息内容为公众开放，内容由用户自愿张贴和自愿接受，
本版管理员不对所张贴的信息内容付法律及道德责任。
张贴信息的用户应该自觉遵守法律和道德规范，
读取信息的用户也建议凭自己的常识取其精华、去其糟粕
3 禁止各种refer link
[是否申请版主]
是
手机计划与PDA版完全没有重复的问题。
PDA版以讨论各种电子产品的硬件为主。
手机计划版以讨论各种无合同手机计划为主，
兼讨论适应与各计划的手机... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 5 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: PBSNPR (大刀王五), 信区: Biology
标 题: 美国FDA又发出对中药的警告信
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 4 17:29:55 2018, 美东)
【2018年6月28日，一封美国FDA给“美国中药协会公司” (ACMA Inc) 的警告信
在官方网站发表，内容为警告该公司在网上的中药产品治癌广告为非法，限期改正。此
信中英文版随即在微信中广泛传播，引起中医药界关注。其实，FDA在10年前就采取过
类似行动，现将当时的评论文章再次发布，文中最后的10条警示及对中医药业者和消费
者的建议，今天仍然有重要参考价值。】
美国中文媒体上的中药广告和宣传从来都是铺天盖地，很多人认为美国言论自由，
环境宽松，说什么都可以，是销售中药的好地方。的确，受宪法保护的媒体一般不会为
广告承担责任，但发广告者却需要对其内容负责，需要小心，在你还不知不晓的时候，
很有可能监管机构正在注视你。
美国国家管理食品和药品管理局（ＦＤＡ）于2008年6月17日公布，在近两个月内
，该机构向至少... 阅读全帖 |
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E********n
发帖数: 14662 | 6 你们两个讨厌鬼，想怎么样嘛
发信人: yuningilike (娃照DIYer), 信区: DSLR
标 题: [合集] 谁给解释一下Getty House Collection是什么东西。
发信站: 水木社区 (Mon Apr 15 20:19:24 2013), 站内
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GettyImage (House Collection) 于 (Sun Apr 14 17:48:57 2013) 提到:
之前看到本版某巨师拿到了这个，号称是摄影界最高荣誉之一，大陆签约的只有几十个
。
而且好像其他的国内的华盖和该地都是“业余选手”，这个才是专业选手。但是我看巨
师第
一个月收入也就200刀，不是特别高。而且看到无忌上这个帖子。下面的一些人对这个
House collection貌似也不是特别推崇。求科普。想玩图库了。
http://forum.xitek.com/thread-1070953-1-1-1.html
ozyzxq
泡菜
泡网分: 10.112
主题: 1
精华: 0
帖... 阅读全帖 |
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d**********u
发帖数: 4124 | 7 ☆─────────────────────────────────────☆
CaMKII (不作postdog) 于 (Thu Aug 20 12:39:18 2009, 美东) 提到:
发信人: CaMKII (不作postdog), 信区: Biology
标 题: 最新一期Cell两篇北大的文章（尚永丰&汤超）
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 20 12:38:55 2009, 美东)
http://www.cell.com/abstract/S0092-8674(09)00710-7
Cell, Volume 138, Issue 4, 660-672, 21 August 2009
doi:10.1016/j.cell.2009.05.050
LSD1 Is a Subunit of the NuRD Complex and Targets the Metastasis Programs in
Breast Cancer
Yan Wang1,Hua Zhang1,Yupeng Chen1,Yimin Sun1,Fen Yang1,Wenhua ... 阅读全帖 |
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o**i
发帖数: 1165 | 8 多数细胞还是人的肿瘤的
你invitro实验 做的western看的是人肿瘤细胞和正常细胞这个蛋白的变化
invivo肯定要看人肿瘤细胞形成的肿瘤里的这个蛋白的变化
但是如果换我 老鼠细胞里的这个蛋白的量 我也会看看 |
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n********k
发帖数: 2818 | 9 Aves, Chick-GFP antibody works great, Roch/invitro Rabbit GFP works too... |
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w***a
发帖数: 4361 | 10 俺觉得版上这么多WSN应该好好讨论回去run company的切入点和可行性这类话题。既然
有人已经开始做了，有料的人就出来bagua下到底人家怎么开始运作的。
WSN在美国费劲心思最后搞个AP的位置，没几年又被逼成叫兽。有啥意思呀。费相同的功
夫回去run startup，结果可能很不一样。这样的人多了很可能就整出个本土的invitro
gen，sigma啥的了。
如此一来不用转行浪费自己多年background，二来也确确实实做点对国家有用的事情。
那些做Kit卖酶的公司有个屁的技术含量啊，难道比放卫星，送人上天还难？
俺原来在北京的时候知道五道口有个TIANGEN，自己整了不少试剂盒卖，效果相当不错，
价钱只有Qiagen的三分之一。可是没几年，顶不住诱惑，被Qiagen给收购了。还喜得不
行，觉得自己被洋人看上了，很了不起。那个公司的CXO们也都是早些年北美的WSN。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 11 用来干嘛的？给invitro reconstitution 系统功能？应该挺好玩 |
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J********n
发帖数: 534 | 12 如果你表达的是kinase，很容易自己修饰自己。
如果你表达的非kinase, 有少许可能被修饰，可能在Serine, Threonine, Tyrosine,
Histidine, Aspartate被修饰。
一旦被修饰而你又很介意的话，可以co express一些phosphatase, 或者invitro
dephosphorylation. |
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W****C
发帖数: 1937 | 13 invitro系统的蛋白浓度有100mg/ml 做IP的话用ripa稀释？ |
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w******e
发帖数: 1187 | 14
this should be an easier problem to solve bah? DNAse+acid phenol, repeat
a few times? |
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W****C
发帖数: 1937 | 15 MET不是挺稳定的吗， 怎么说S35容易挥发呢？ invitro translation kit给的
protocol是80度干胶， 没问题吧？
难道要常温在hood里干胶？
S35标记的胶显影的时候用保鲜膜包起来可以嘛（我不想显影的盒子被污染）？ |
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W****C
发帖数: 1937 | 16 我在做一个２０ｋｄ的蛋白，发现它很容易被降解， 半衰期大概２－３小时。 而且
这个蛋白的truncated/mutated clone 转染细胞后多数都测不到蛋白表达（全长的做
＋对照可以测到）， 但是能用invitro translation的系统测到。小蛋白容易降解？
这种现象常见吗？
我现在先测它是不是+ubiquitin，proteasomal degradation. 其他降解途径比如ｌｙ
ｓｏｓｏｍａｌ， ｐｒｏｔａｓｅ， ｃａｓｐａｓｅ比较好用的ｉｎｈｉｂｉｔｏ
ｒ有啥(用来处理细胞）？ |
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M*****n
发帖数: 16729 | 17 inducing human iPS in mice or other animals? that will be cool, and I will
be surprised to see that human iPS can receive sufficient instructions in
mice to become the right cell type: this bridges/breaks the boundary between
species!
the first example is certainly useful for modeling idiopathic diseases in
dish, but further scrutinization is warranted to determine how
representative the invitro model is. for example is the ALS neurons in vitro
the same type of neuron in vivo that is afflicted b... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 18 在agrose胶上，RNA product看起来多大？
我在胶上跑出来都是和我的DNA templete同样大小的东西，几乎重合在一起，似乎不大
make sense? |
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a****o
发帖数: 1786 | 20 to check RNA, you should run a denature gel, either agarose+MOPS or
polyacralimide+urea. If your RNA intends to form no 2nd structure, it may
run at similar position as its DNA template. otherwise something is wrong.
Single strand DNA or RNA gives very low signal compared to the same size ds
DNA if you stain with EtBr. |
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m*****n
发帖数: 760 | 21 for fast examination, you could run your RNA samples on 2% TBE agrose gel.
for accurancy, you want to run them on denaturing PAGE gel. |
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m******5
发帖数: 1383 | 24 I am still wondering why it runs around the similar position as its DNA
template. RNA product is ssRNA while the DNA templete is dsDNA…………
ds |
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m*********n
发帖数: 215 | 25 Your RNA forms secondary structure. that's why the guy upstairs told you to
run it on a DENATURE gel to kill the secondary structure..... |
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f*******e
发帖数: 628 | 26 实在是要跑一般的胶的话，要在 formamide 里面 heat denature，然后snap cool 到
冰上，马上跑胶。不过里面 DNA 会出 double band。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 27 Thank you much for your great contribution to my rookie question^^
I think non-related region negative control is convincing theoretically, if
not taking non- specific DNA precipitation into account: different DNA
region might have different tendencies of non specific precipitation (I also
learned that this issue can be simply avoid by using dynal beads)
A parable phenomenon is that when I was doing invitro protein interaction
assay such like GST pull-down and co-ip, the reviewer did not questi... 阅读全帖 |
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n********k
发帖数: 2818 | 28 This is so great and thank you very much.
1. the Antibody is at least decent---this gene has been chipped many many
times by many labs; and I confirmed the ChIP using QPCR...
2. I have been suspecting we may have the library overload problem or over-
amplification issue(if that makes sense). The core really followed the
histone protocol and was meant to get 20-30M reads, and it did for Histone
markers and Input DNA. However, for my TF, the 1st is 9M with 9% mappable
reads (I expect less bind ev... 阅读全帖 |
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X******n
发帖数: 914 | 29 Mammalian Two-Hybrid System的sensitivity 大概是25％，false positive偏高
MAPPIT的sensitivity 大概是35％，false positive据说很低，
如果蛋白是在细胞核的，可以试试Y2H，但sensitivity大概也是30％，而且会有假阳性
问题，
SPICA 据说sensitivity 非常高 75％以上，但是我估计假阳性也会很高，
PCA（或者BiFC),sensitivity <25%,有假阳性问题，
invitro binding assay |
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s*******a
发帖数: 78 | 30
that's the weakness of this paper. only invitro studies (cells), but no in
vivo (animal)level studies. if trying to approach in mice, it will be
another whole different story.
thanks for the suggestions though. |
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z****u
发帖数: 1007 | 31 筛选本来就不需要很确定的结果啊。肯定会是很多问题的，所以后来她仍然需要拿Tbx1
KO来研究phenotype. 这个screening 虽然是invitro,但是我觉得会是个很好的方法用
来做initial screening.
相比之下，Elaine Fuchs之前另外一篇拿lentivirus in utero injection来做
multiple gene shRNA mediated knockdown 我倒是觉得会有很多问题。 老鼠本来就对
haploefficiency耐受性很高，RNAi kockdown 能有多高效率？ 每次注射后tranegenic
位点肯定还会不同，这样出来的phenotype能有多好的重复性？ |
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m******5
发帖数: 1383 | 32 invitro拓扑结构不会出问题么？倒是有这个菌但我手上没有 |
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V**3
发帖数: 12756 | 33 这个取决于你的研究结果的具体情况
如果你仅仅是发现了这个蛋白是target, 那么是不能申请专利的， 因为这个蛋白是自
然存在的
如果你已经有了这个蛋白和药物具体结合的特定靶点 （ binding site/pocket)的直接
数据 - 比如蛋白晶体结构， 你是可以对这个binding pattern 申请专利的
也就是说
1. 你要有先导化合物
2. 这个先导化合物和蛋白的结合数据 in invitro, in vivo, 晶体结构）
3. 这个东西有用 |
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m******5
发帖数: 1383 | 34 楼主是专门做转运的？
可以考虑做 Invitro-nuclear import assay
就是用纯化的转运体系在digitonin permeablized 的Hela 细胞核上做。
因为整个体系都是体外重建的，理论上不会出现非直接影响的情况
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3261132/
不过好奇地问一下，这个化合物阻断核转运你们是propose和哪个转运蛋白结合？
importin beta? alpha? or exportin?
如果真的只特异某个subtype的importin的活性的话还是很有意思的，不过鉴于楼主能
在oocyte里做出来，可能性不大。 |
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K**R
发帖数: 193 | 35 暂时是invitro 多谢非常有用！
glycolysis |
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s********x
发帖数: 472 | 36 有一些短的virus sequence在5' 或者3' ，号称可以促进蛋白表达。可以search
translational enhancing elements。
如果直接改造promoter，在invitro 的话，加个UAS 可以用gal4激活。 |
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发帖数: 1 | 37 【2018年6月28日，一封美国FDA给“美国中药协会公司” (ACMA Inc) 的警告信
在官方网站发表，内容为警告该公司在网上的中药产品治癌广告为非法，限期改正。此
信中英文版随即在微信中广泛传播，引起中医药界关注。其实，FDA在10年前就采取过
类似行动，现将当时的评论文章再次发布，文中最后的10条警示及对中医药业者和消费
者的建议，今天仍然有重要参考价值。】
美国中文媒体上的中药广告和宣传从来都是铺天盖地，很多人认为美国言论自由，
环境宽松，说什么都可以，是销售中药的好地方。的确，受宪法保护的媒体一般不会为
广告承担责任，但发广告者却需要对其内容负责，需要小心，在你还不知不晓的时候，
很有可能监管机构正在注视你。
美国国家管理食品和药品管理局（ＦＤＡ）于2008年6月17日公布，在近两个月内
，该机构向至少25家网上销售商发出了“警告信”，公布的信中措辞严厉地指责这些商
家在网上销售所谓能治疗癌症的假药（www.fda.gov/cder/news/fakecancercures.htm
），误导消费者，违反了联邦药品法。并要求这些厂商在15日之内改正... 阅读全帖 |
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b*****l
发帖数: 8603 | 38 2007年的，不知道你们说的是不是这个。祝好。
medical ethics more than hundred cases
Sep 24th, 2007, 12:17pm
1. A 25- year old mother refused immunization for her 2-month old son. The
social worker spoke to the mother. (Important for Board examination)
Next step in management: immunization should be given for the benefit of the
child.
2. A 30-year old mother refused surgery for suspected appendicitis for her 6
-year old daughter. The social worker spoke to the mother. (Important for
Board examination)
Next step in ma... 阅读全帖 |
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