D*a
发帖数: 6830 | 1 综合版上的意见，我周六用leica的FSC 22 Frozen Section Media冻了胚胎，冷冻是用
isopentane放在干冰里冷到差不多干冰的温度，然后把小格子放进去悬在液体里冻。
我的问题是：感觉冻起来很慢啊，一个格子要冻三分钟左右，拿得我手都酸了。大家是
这样冻的吗？ |
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d****u
发帖数: 33 | 2 在Isopentane里放一两颗干冰就快多了，但不要多放，否则“沸腾”的太厉害了，容易
没到格子里。 |
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h******y
发帖数: 351 | 3 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 4 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 5 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵 |
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h******y
发帖数: 351 | 6 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵 |
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D*a
发帖数: 6830 | 9 我后期就往里放干冰了，可能是因为一个一个冷冻，温度升高太快了。
反正就是这么冻是对的吧
以前是用gelatine冻的，一下就白了，也看不见里面什么样，这个是一直拿着看着胚胎
慢慢变白掉。而且用gelatine，可以切得很小，不像这个用塑料盒的，周围好多包埋剂
，感觉切的时候手柄要摇死了... |
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h*********g
发帖数: 18 | 10 我在切胚胎脑组织，很小。我是先4%PFA固定overnight，然后PBS wash 3 times, then
put in 30%sucrose overnight。Then put the tissue in OCT. Then quick freeze
by putting the cryomold in isopentane with dry ice.Cryosection at -20 degree
, cut 10um.切过后发现组织中总有裂痕，空洞，有时象是被撕开一样。请问怎么避免
这类问题？谢谢。 |
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e***e
发帖数: 236 | 11 My mother got sick living in a newly renovated apartment. Can some analytic
specialist help me find a way to test the VOC (volatile organic compounds)?
The list of VOCs contains formaldehyde, decane, butoxyethanol, isopentane,
limonene, styrene, xylenes, perchloroethylene, methylene chloride, toluene,
and vinyl chloride.
I am willing to pay some compensation. |
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