c*******o
发帖数: 8869 | 1 digestion of PCR product can be very tricky, what i do is following:
1 purify your PCR product with qiagen kit
2 use T4 PNK phosphorylate your PCR product's blunt end
3 ligate your blunt PCR fragment into any vector cutted with blunt end enzyme
(like EcoRV)
4 transformation and mini prep plasmid
5 then use hindIII and EcoRI cut the fragment out of vector
6 purify your hindIII-EcoRI fragment with kit and insert it into the vector
you want to use
this will add one more subcloning step but i am sur |
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w*****t
发帖数: 179 | 3 为什么连不进去呀，我连过很多cdna,都成功了呀，我用的是agilent 的系统，如果你
担心ITR有突变的话，可以先在PCMV-MCS中连，在用NOTI切后连到PAAV-MCS中去，之后
转到重组酶缺失的大肠杆菌中，如XL10-GOLDEN 或者SURE中。现在我用INFUSION
CLONING几乎都是阳性。 |
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发帖数: 1 | 4 你们是在什么细胞系里边做的呢？
这个筛选标签是可以去除的，比如在两侧加入TTAA和piggyBac的ITR，得到这种带有标
签的细胞之后，过表达piggyBac的转座酶，就能够去除掉不留下任何的痕迹。这个是没
有问题的。
通过这种方法我已经拿到了isogenic人干细胞系，表型也已经找到。现在我在博三，还
有一年半的时间，我想来试试这个combination不同荧光，如果我同时需要导入多个基
因的突变，如果针对每个基因设计的模板都带有不同的荧光，那么我最后只需要用流式
细胞筛选，直接筛到几个点同时突变的细胞系，按理说应该是非常有用的。前一段时间
，日本和荷兰的两个实验室同时在人的肠上皮细胞系中导入四个或者五个突变去模拟
Colorectal Cancer，以验证之前所发现的跟这种癌相关的基因突变究竟怎么导致癌变。
homozygous |
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z****u
发帖数: 1007 | 5 不太明白这点，piggybac过表达难道不是引起transpose跳转吗？不明白为啥会把俩itr
间的序列切除掉？
变。 |
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i******g
发帖数: 3 | 6 例如 SOI 130nm 或者90nm下，metal的长宽高等尺寸？（更小工艺的，不敢奢求）
itrs的数据太多，看着好乱阿，而且还不是SOI的。
望请指点，不胜感激 |
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m*******2
发帖数: 293 | 7 粗略看了LZ的文章 觉得楼主根本不知道什么叫半导体
莫非您还停留在10年前那种半导体收音机的理解阶段？
你说的都是产品 系统的东西 这牵涉到的不仅仅是半导体
还用， 说到半导体的起点。半导体起点似乎不低吧，你认为FLASS设计容易， 那也是
建立在foundry线的基础上，如果你不知道什么是foundry,或者不知道现在的制程是多
少的话，建议你去看看Itrs的roadmap。 |
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g****t
发帖数: 31659 | 8 他除了对ee一无所知，而且压根没开发过新产品，
估计连扒别人的图纸照做都没有过。
随便开发什么新产品，只要不是从别人图纸抄的。
哪怕需要元器件再少，随便一个有回路的电路，调几个月出不来结果是很常见的。
这还不说软件的关键参数和calibration,试验等等等等所需的时间。
也就没做过事情的人才敢吹，“5个人一年就做出来几合一的新产品”，LoL
别说几合一了，就说那个睡眠波形的仪器，5个人一年能把demo做出来的，
那就是超一流选手了。这种东西看上去容易，做出来能通过认证的很难。
统计和频率分析什么的算法不难，调参数是非常花时间的事。
你做出来的东西不准，谁会买你的？
粗略看了LZ的文章 觉得楼主根本不知道什么叫半导体
莫非您还停留在10年前那种半导体收音机的理解阶段？
你说的都是产品 系统的东西 这牵涉到的不仅仅是半导体
还用， 说到半导体的起点。半导体起点似乎不低吧，你认为FLASS设计容易， 那也是
建立在foundry线的基础上，如果你不知道什么是foundry,或者不知道现在的制程是多
少的话，建议你去看看Itrs的roadmap。 |
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H****E
发帖数: 444 | 9 不是，channel length其实是个工艺里没有的值，应该也没法测，更像是个model里用
的参数，
gate length就有很多，比如physical gate length，drawn gate length，printed什
么的，
spacer width我翻遍itrs不知道哪里有提到具体值的？ |
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s****n
发帖数: 1282 | 10 摩尔定律马上要玩完了，或者说已经玩完了。
single electron devices/molecular electronics都是灌水的玩意，列在ITRS上不足
为奇
吧 |
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m******g
发帖数: 621 | 11 FinFET目前公认能到7NM ITRS TECH NODE.
再往下有非常大的生产问题，因为目前工艺的问题，你要做一个非常高ASPECT RATIO（
也就是FIN的高和宽之比）的FIN，很容易倒了。
还有其他的一些问题。比如说继续缩小制程，FinFET的PERFORMANCE GAIN会越来越不显
著。不过还有时间，照目前情况，可能2019年能看到7NM就不错。
当然了，不排除有大牛能搞定这些东西。
至于NANOWIRE或者GAA或者两者结合，又或者更新的结构，目前还看不到应用的希望。
还有一个就是EUV迟迟搞不定，非常蛋疼。而且搞出来估计也是个天文数字。
个人看法。 |
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e***y
发帖数: 4307 | 12 根据itrs roadmap 2025年的node是1.8nm，当然这不是真正的logic pitch，真正的
pitch是几个nm。现实就如你说的，没剩多少node了。不知道internet of things能否
拯救ee。我的感觉是软件的机会在IOT大大的，ee得益不会很大。 |
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h****t
发帖数: 57 | 13 nanoimprint有好几个startup有产品
ITRS上ms也有 |
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b****e
发帖数: 1275 | 14 mysql doesnt' support cursor (or has itr changed now?)
for example.. for same subject reading.. how would you implement
it in mysql? (let's assume there're 200 responses for a popular
subject..) |
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a**i
发帖数: 7261 | 17 怎么参加啊，刚入的ps3和gt5p，上网开了几圈，老是开不过其他开itr的，是不是有了
wheel后成绩会好点 |
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l**********l
发帖数: 4468 | 18 是啊，那里的日本车都是JDM的。马来泰国香港都是类似情况。 你说的是ITR， 是
integra啊。
accord也有type R咧。 |
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f*****t
发帖数: 4395 | 19 the old ITR is the best FWD handling car i have ever driven
dont know about the RSX/dc5 though |
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l**********l
发帖数: 4468 | 20 我不觉得之后的美版rsx type s还有后来的civic si会比这一代ITR差。
这个开价那两个都可以买到。 |
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c**u
发帖数: 2230 | 21 真比起来, 这些数据只能做参考. ITR虽然HP小, 但是轻多了.
我把civic S改装一把, 都能beat BMW. |
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c**u
发帖数: 2230 | 22 hehe, 那就stock M3 E3 vs stock ITR 好了. 我就一比方, 来说明只要你想去实现,
any car can beat any car. |
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D*******a
发帖数: 3688 | 23 Usually fuel consumption on a sports car is the last thing people care...
ITR does not have air conditioning and sound-proof materials. Do you care? |
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w*******y
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w*******y
发帖数: 60932 | 26 Found an interesting offer from OD: Office Depot coupon: $50 off custom
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w*******y
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