h******u
发帖数: 602 | 1 K562可以分化成红／白细胞系。大家用什么诱导？想看看一基因在K562分化中的作用。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 2 1. It will not attach to the plate. If you want the cells to attach to the
plate for immunostaining, you have to using fibronectin or matrigel etc.
2. The split is cells/mL. K562 should be sub-cultured at 200k/mL and no
more than 1 million/mL. However, it is very hard to kill K562 cells, so
even 1.5 to 2 million cells are possible. |
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r******k
发帖数: 446 | 3 最近小弟要culture K562. 以前没杨过悬浮的细胞。大神们给点意见？
1. 复苏以后怎么又贴壁细胞？？？
2. 怎么传代呀。。。离心下来数细胞数？ 那传到25cm dish 和T75的dish都需要seed
多少细胞？ 多久算养好？
谢谢 |
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h**********8
发帖数: 650 | 4 貌似32d?
但是只看到诱导这个往neutropil方向分化的文章，
如果想往lymphocyte 方向分化，可能要找更早的祖细胞
呵呵，干脆分离造血干得了，不过你还要分化干啥，直接找几个细胞系得了
k562是red cell 来源的，高表达这个控铁的，不奇怪，也容易往red cell 方向做
还不如直接比较leukemia, monocyte, lymphoma, k562
估计只有k562高表达
结果感兴趣的话，可以knock down此基因看它的功能。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 5 k562 were the first human immortalised myelogenous leukaemia line to be
established.
k562和melcell没有用过.但原理应该是一样的.我认为:可以. |
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g*********5
发帖数: 2533 | 7 cell line。有区别吧。
还有什么k562和melcell，也可以用这个吗？ |
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h******u
发帖数: 602 | 8 借贵贴问个问题哈。我无意中发现一个很重要的调控铁代谢的基因在K562中表达相当
高。之前大家一直认为此基因只在肝脏表达。我想做一个实验看一下此基因是否在血液
细胞的分化中起作用。
我想找一个比较原始的hematopoietic cell line, 此细胞株能够在不同条件下分化成
leukocyte, lymphcyte, and red cells。完了检测此基因在不同阶段的表达，如果结果感兴趣的话，可以knock down此基因看它的功能。
那种细胞株合适呢？ |
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r******g
发帖数: 600 | 9 http://pnabio.com/products/KOCells.htm
你们看
Cell lines that we have generated knock-outs or knock-ins
HEK293 cells
HeLa cells (hypertriploid)
SKBR3 cells (hypertriploid)
HCT116 cells (diploid)
MCF7 cells (Hypotriploid)
K562 cells (hypotriploid)
CHO cells
NIH3T3 cells
We have successfully generated knock-out clones up to 4 copies in one round.
应该不难做吧
成功率应该不低，好想自己试一下 |
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m*****r
发帖数: 1164 | 10 需要用不同的cancer cell line做transfection，打算用便宜的Polyethylenimine做转
染试剂。请教大家知道有哪些比较好转染的cell line。
目前想做以下cancer type和自己了解的cell line,还请大家不吝赐教。谢谢。
Lung Cancer: H1299
Hepatic cancer: Hep G2
Breast cancer: MCF7
Colon cancer: HCT116
Leukemia: K562
Prostate cancer: DU145
Glioblastoma: LN229
Melanoma: A375 |
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r******k
发帖数: 446 | 11 how often you change the medium?
the |
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r******k
发帖数: 446 | 12 how often you change the medium?
the |
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A******y
发帖数: 2041 | 13 2 to 3 days, it is better to count the cells though. |
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r******k
发帖数: 446 | 15 大神们推荐一下。 比如K562细胞 我怎么看它有什么gene被deletion或者amplication
？ 或者什么protein被磷酸化？？
多谢 |
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r******k
发帖数: 446 | 16 小弟最近转几个质粒进K562细胞。 总是有一个转不进去，或者死的很多。就这一个质
粒。 到底是什么问题呢？ 我几个质粒一起提的呀。。。。崩溃。。。。 |
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c********n
发帖数: 225 | 17 问题总结
1.实验材料来源（Hyclone vs Gibco的培养基，以及原文没有特别提到的“Biolab”T4
PNK）会影响可重复性吗？
HyClone以及其他 T4 PNK 供应商，你们是不是要想一想自己的问题在哪里了？
还有，ThermoFisher可要注意了，你们的Lipofectamine® 3000可能有问题！
2.原文用于plasmid和guides （DNA）的0.5xTE，更新后 改成NaOH调出来的pH8.0的水。
先不谈怎么来用NaOH调出这个稳定的没有缓冲液的pH8.0的水，如果原因是由于NgAgo对
于EDTA这么的敏感，那么原文中用到的大约0.015-0.025mM的EDTA，是怎么做出的NBT文
章中的结果的？
3.关于细菌污染问题。从新闻报道和照片上看，韩春雨老师他们做实验是经常不戴手套
的，看来他们这样做细菌污染机率会减少。所以这些重复NgAgo实验的人们，你们重复
NgAgo实验的时候，带手套了吗？你们的实验材料有没有被细菌污染呢？
4.看来Mg2+的浓度，在不同的cell type也需要optimize
5.看来ss gDNA 二次转染... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 18 新发现丨细胞常温运输的高效简易方法！
2017-06-03 邓文生 等 细胞
2017年4月18日，武汉科技大学生命科学院邓文生教授在美国公共科学图书馆的期刊上
发表一篇题为“The analysis of viability for mammalian cells treated at
different temperatures and its application in cell shipment”的研究论文。主
要验证了在室温下运输细胞的简易方法的可行性。
目前，传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法。细胞存活率较高，但是都只
能短距离运输，花费高。近几年，也还有一些关于细胞运输方法改进的报道，例如有用
agarose胶或matrigel基质与细胞混匀后，再在室温运输。这种种方法都非常繁琐复杂
，影响因素较多。
邓教授在英国做实验时，一个小的失误，意外发现室温下放置的细胞在第二天仍能保持
较高的活性。就想是否能够直接在室温的条件下运输细胞，从而简化细胞的运输方法。
为了验证这个方案的可行性，该实验室采用其常用的细胞系M2进行一系列验证。首先确
定细胞密度为1*105 ... 阅读全帖 |
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