s*********t
发帖数: 600 | 1 这样啊。
我同时还想用nuclear extract做gel shift，周五老板建议我先透析到100mM KCl的gel
shift的binding条件，再做。我说
直接用10 ×的binding buffer稀释不行吗，我提的nuclear extract浓度比较高 （10
ug／ul），但是老板说不行。我还没
来得及问为神马，他有事就走了。
是不是做gel shift的nuclear extract透析比较好啊？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 2 Quick Tail Prep
Collect mice figure/tail in 0.5 ml Eppendorf tube. (4 mm is enough)
Add 100 microliter of quick tail digestion buffer (below).
Incubate at 55 C for 2 hours to overnight.
Vortex and incubate at 95 C for 10 minutes.
Centrifuge for 5 minutes to get rid of the small pieces of undigested sample.
(NOTE: I do neither vortex nor centifuge, and my pcr works
but if you vortex, you have to centifuge)
Use 1-2 microliter aliquot of supernatant for a 25-50 microliter PCR
reaction (or whatever ... 阅读全帖 |
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E**********1
发帖数: 73 | 3 请问一下各位都知道哪些方法可以提高胞内Ca2+浓度?我用的是MEFs.
我现在只知道一种是用50mM的KCl加到culture medium里面，induce depolarization,
然后使voltage-dependent calcium channel打开，使胞内Ca2+升高。但是有一点不确
定的是MEFs是否有voltage-dependent calcium channel。
求各位指点，在此先谢过了！~ |
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S******e
发帖数: 36 | 4 我曾经试过用不同的方法裂解细胞，比方说用低渗Buffer(10 mM HEPES (pH 7.9), 10
mM KCl, 1.5 mM MgCl2）溶胀细胞后，dounce 10次或者加1%NP40，每次我都用普通的
相差显微镜检查过细胞，溶胀后细胞膜没破，但Dounce或者加入NP40后，90%以上细胞
膜破掉，细胞核似乎还是完整的。可是当做WB时候，很多只在核内的蛋白（比方说转录
因子）都可以明显的在cyto的fraction里边检测到，我估计还是有渗漏。你能检测到H3
可能也是这个原因？ |
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S******e
发帖数: 36 | 5 我曾经试过用不同的方法裂解细胞，比方说用低渗Buffer(10 mM HEPES (pH 7.9), 10
mM KCl, 1.5 mM MgCl2）溶胀细胞后，dounce 10次或者加1%NP40，每次我都用普通的
相差显微镜检查过细胞，溶胀后细胞膜没破，但Dounce或者加入NP40后，90%以上细胞
膜破掉，细胞核似乎还是完整的。可是当做WB时候，很多只在核内的蛋白（比方说转录
因子）都可以明显的在cyto的fraction里边检测到，我估计还是有渗漏。你能检测到H3
可能也是这个原因？ |
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c****g
发帖数: 93 | 6 我们用这个lysis buff：
10 mM HEPES/KOH, pH7.6
1.5mM MgCl 2
10 mM KCl
5 mM EDTA
5 mM EGTA
250 mM Sucrose
Adjust pH 7.6 with 10N KOH
然后过过15次#7 needle，低速离心后上清基本是cytosol，无nuclear protein。
10
H3 |
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E**********1
发帖数: 73 | 7 Hi all:
Recently I planning to do siRNA, but I have a detailed question.
I got siRNA from Dharmacon, and it came as dried pellet, which means I need
to dissolve it in some solutions. The instruction suggests resuspending the
dried pellet in RNase-free 1X siRNA buffer (60mM KCl, 6mM HEPES-KOH, pH7.5,
0.2mM MgCl2), or in RNase-free water for short-term storage.
It will take time to place another order only for those buffers. So I am
wondering how you guys do that. Can we make the buffer by ourselv... 阅读全帖 |
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t****g
发帖数: 120 | 8 正在研究一种被研究得不多的protein, 不少cancer cell line都表达这种蛋白质，但
protein level并不高。 当我overexpress tagged protein之后，发现它能进入
nucleus。 我生物刚入门，不清楚这种能进入nucleus是不是个big deal。 有些疑问：
1） 我用来分cytoplasmic and nuclear proteins的protocol，我的同事质疑我能不能
tell到底这个蛋白质能进nucleus还是membrane. 我用的是在abcam上找到的protocol,
Buffer A (cyto)
10 mM HEPES, 1.5 mM MgCl2, 10 mM KCl, 0.5 mM DTT,
0.05% NP40 (or 0.05% Igepal or Tergitol) pH 7.9
Buffer B (nucl)
5 mM HEPES, 1.5 mM MgCl2, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM DTT, 150mM NaCl
26% glycerol (v/v), pH 7.9
2） 接下来该... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 9 Quick Tail Prep
Collect 1 mg skin biopsy (= normal size tail or figure tip) in 0.5 ml
Eppendorf tube.
Add 100 microliter of quick tail digestion buffer (below).
Incubate @ 56 C several hours to overnight.
Vortex and incubate @ 99 C, 10 minutes.
Centrifuge @ max speed, 5 minutes.
(NB i don't vortex so i don't need to centifuge the tube, it works)
Use 1-2 microliter aliquot of supernatant for a 25-50 microliter PCR
reaction (or whatever you routinely do).
Transfer supernatant to a fresh tube for s... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 10 Quick Tail Prep
Collect 1 mg skin biopsy (= normal size tail or figure tip) in 0.5 ml
Eppendorf tube.
Add 100 microliter of quick tail digestion buffer (below).
Incubate @ 56 C several hours to overnight.
Vortex and incubate @ 99 C, 10 minutes.
Centrifuge @ max speed, 5 minutes.
(NB i don't vortex so i don't need to centifuge the tube, it works)
Use 1-2 microliter aliquot of supernatant for a 25-50 microliter PCR
reaction (or whatever you routinely do).
Transfer supernatant to a fresh tube for s... 阅读全帖 |
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c********r
发帖数: 1125 | 11
Paul nurse这老家伙现在是到哪里都宣传一吧他那个crick institute.
基本来说英国政府砸了数亿英镑，烂尾了好几年的这个工程终于要竣工了（上礼拜封顶
了？）。
目标是把伦敦地区最牛的研究所一网打尽整合（NIMR,cancer UK LRI, UCL/KCL的生物
医学部分).
结果会怎么样？ god knows...
除了伦敦的话基本就是剑桥，有cancer UK的cancer institute,另外最牛的是gurdon
insititute，里面有很多不错的老板。
LMB已经昨日黄花了，能争取到一些还不错的年轻人，但是总体竞争力跟FMI/IMBA之类
我觉得不能相比。
现在英国也不是很景气，基本除了wellcome trust/cancer UK/MRC赞助的所以外，大学
都很拮据。。 |
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A**r
发帖数: 43 | 12 不知道。。。只能瞎猜了
敲掉这个基因会不会影响histone modification？
如果还是从induction的角度的话，
有没有可能是KCl depolarization的刺激太强了，掩盖了一些细微的变化？没准用
physiology level的stimulation，能看到induction的不同？
有没有可能影响induction的快慢？Arc和c-Fos在几分钟之内就产生mRNA，敲掉这个基
因之后，没准induction变慢了（前十几分钟的mRNA变少），但是一个小时之后测mRNA
，可能看不出啥变化。 |
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S******e
发帖数: 393 | 13 将S1 (cytosolic protein) 和 S3 (nuclear soluble protein?) 去掉后，剩下的
pellet再用0.1%的Triton extract, 收集到的上清暂称为X，想知道X是些什么蛋白？
Chromatin associated protein?
方法如下：
1. Cells were extracted with Buffer A (10mM Hepes pH7.9, 10mM KCl, 1.5mM
MgCl2, 0.34mM Sucrose, 10% Glycerol, 1mM DTT plus protease inhibitors)
containing 0.1% Triton for 5 min on ice, centrifuge 1300g X5 min, discard
supernatant (S1), wash once with BufferA and discard supernatant.
2. Extract cell pellet with Buffer B (3mM EDTA, 0.2mM EGTA, 1mM... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 按照我对pound cake的理解，它应该是个酸性食物。
关键是，食品里面含什么酸碱并不重要，重要的是什么会被吸收进去，以什么形式被吸
收进去，还有被代谢后产生的是什么。
因为pound cake含有大量的糖（包括淀粉），这些物质在吸收的时候是以中性分子（葡
萄糖，果糖，等等）的形式进入细胞，所以并不会带进额外的金属离子。然后这些糖代
谢后凭空的产生出大量的CO2（弱酸），所以最终应该导致细胞内呈酸性。
至于pound cake本身含的那些Na和K，他们如果不被吸收，或者如果以NaCl, KCl的形式
被吸收的话，对细胞代谢的酸碱性没有贡献。 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 15 我觉得sunnyday说的有道理，而且pound cake里碳水化合物太多了。Na K相对比例很低
。进一步说Na，K是以NaCl,KCl等形式被摄取的，对pH估计不会有太多实际贡献。
我很想学习一下你发表的文章，如果不方便公开的话，能私信吗？我认为有交流才会有
进步。谢谢 |
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D*a
发帖数: 6830 | 16 那一般是自己抄自己的，而且不能把KCL抄成KC1吧 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 17 你是要纯化总个DNA-protein complex还是拆开complex就纯化DNA?一般DNA-protein结
合，需要一定的盐浓度，高KCl浓度，象300mM就可以了。这是许多纯化DNA/RNA
binding protein，从affinity column上把蛋白里洗脱下来的条件。 |
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R****n
发帖数: 708 | 18 最近在做一个DNA和histone甲基化共染色，主要是想看在chromosome上的分布。先拿
colcemide处理2小时，然后放0.075M KCl，滴到玻璃板上。染了几次，细胞核都打不开
，也看不到一条条染色体。要是只用DAPI，能看到100-200个核中有一个能打开，但是
很不稳定。看protocol,有两个可能的问题。
1）我是悬空滴的，效果不如用cytospin?
2) 玻璃板没有poly-lysine coating,沾不住chromosome.
有人能提供点经验么？这方面是新手。 |
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x******h
发帖数: 838 | 19 花生此人嘴臭没啥好说的。本来我对这件事的观点和你挺接近，直到后来看到pbs那部
纪录片 the secret of photo 51。油管有，建议大家看看。
当然pbs的文科生做纪录片不见得能还原事情真相，但总体觉得还是可信的。如果就按
照它的说法，富兰克林被招到KCL时，富兰克林自认为自己是PI，而维金丝却认为她是
他的手下千老（当时维金丝是X光衍射部的头）。尼玛，这都能搞错？这都能有争议？
而就当时她的资历和性别歧视，我怎么觉得维金丝的说法更靠谱？不太靠谱的维基也说
富兰克林是research associate的身份。如果她真的就是个千老，维金丝是老板，那么
维金丝完全有资格得炸药奖也完全有资格把数据给其他人看，此片也提到花生和克里克
可能是从维金丝手里拿到照片的，那他们就不存在偷数据的问题了。
这片大打悲情牌，一开始就强调富兰克林犹太人家庭，从小英勇神武超级学霸；也确实
能打动大量大妈大叔咽泪涟涟。但对于知道点科学界习惯的人，反而觉得貌似不是那么
回事。 |
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c******h
发帖数: 4573 | 20 减压蒸馏？你的二酸的沸点多少？
或者真空干燥，溶于DMF，然后过滤。
或者先溶于水，然后加IPA， methanol，etc.让二酸沉出来，同时KCl还在水里。
不过这样重结晶要反复好几次，而且你得摸一下什么有机溶剂最合适。
DMF |
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c****6
发帖数: 1550 | 21 简单的很，找个脂肪提取器，找个有机溶剂，二酸不溶，KCl可溶或微溶，回溜洗掉盐。
或者用冻干法。把混合物溶到水里，结成冰，慢慢升温。
DMF |
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q****i
发帖数: 6923 | 22 支持这个，kcl的有机溶剂比较好找。比如THF就可以，处理起来也比DMF安全。
盐。 |
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O*******f
发帖数: 926 | 23 个人观点：
1。保护羧基（比如苄醇或者其他基团），溶于有机相，分液，去保护（氢解）得二酸。
2。如果二酸空间距离近，可以考虑脱水成酸酐，一般酸酐是可以溶在有机相中的，KCl
不溶，就可以分离了。然后纯粹水解酸酐得二酸。
3。用这个混合物继续下一步，再提纯。
DMF |
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c******n
发帖数: 16403 | 24 你们搞这么复杂做什么， 拿个desalt cartridge就搞定了。 本质就是个反相柱。
合成DNA或者peptide的实验室基本都有这些东西
酸。
KCl |
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b*******g
发帖数: 1309 | 25 真是反应做多了。。。
过desalting 的柱子又快又简单
量少的，上zip-tip
酸。
KCl |
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g******e
发帖数: 21 | 26 像KCl这样的盐溶液英语怎么说？能够完全水解的一元盐？
非化学出身，有错的地方还望见谅啊 |
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t******t
发帖数: 3045 | 27 溶液中的离子都是带水的，不是裸的啊
取决于你最后想要什么？
从KCl 到 KOH?
用离子交换柱把离子吸附了，再洗出来？ |
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q****i
发帖数: 6923 | 28 【 以下文字转载自 gardening 讨论区 】
发信人: Taraxacum (彩烟游士), 信区: gardening
标 题: 医生对我说：同学，你该吃化肥了！
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 15 11:12:03 2012, 美东)
每年都去医院体检一次，前几天刚去做过今年的体检。
在医院里，医生一边和我谈论橄榄球，一边从电脑里调出来我的体检结果。医生仔细看
了看，对我说：“你各项指标都正常，就是体内含钾量偏低。同学，你得补钾！”医生
在一张纸上写了该吃什么样的东西补钾。
“医生，我的骨头不够硬。同学们一表扬我，我就骨头发软，骨头发酥，还有点轻飘飘
的感觉。请问医生，有药治吗？”我着急地问医生。
“补钙！”医生回答得很干脆，哇，一听就知道是个水平很高、经验很丰富的医生。医
生在那张纸上又写了该吃什么样的东西补钙。医生还说，这两种药都不是处方药，很多
店里都有卖的。
出了医院，我就没再回单位，赶紧去买药，治病要紧呢。我先去了沃尔玛食品部，在那
里买到了补钾的好东西。在回家的路上，又绕道去了趟Costco，买了补钙的好东西。回
到家里，我坐在明亮的窗前，沐浴着... 阅读全帖 |
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t**o
发帖数: 1030 | 29 你说的是OpAmp？运放的仿真，比较简单。你要说基本原理，所有电路里基本原理都相
通，KCL和KVL就是了。 |
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s****2
发帖数: 921 | 30 难道不是直接用kcl和kvl，，，然后解？高中题目吧 |
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a******e
发帖数: 331 | 31 What kind of non-linear circuit? Normally the special simulation engine are
used for RF simulation such as Mixer, Oscillators etc.
从频域进行 Harmonic balance simulation, it is solving KCL/KVL in frequency
domain, in hspice, you can use .hb .hbac etc and ADS is strong in this.
Aother type analysis for non-linear RF circuit is shooting newton, in hspice
use .sn .snosc(for oscillators) .snnoise etc., in Cadence use PAC, PSS(
periodical steady state). Golden gate is good too. Popular for switch cap
circ |
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le
发帖数: 190 | 32 Try to understand resistor and capacitor...KCL, KVL, and charge conservation
If you know inductor, you can do RFIC design as well. |
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t******5
发帖数: 46 | 33 被测液体是基于KCL溶液的。
应该还好吧？
谢谢 |
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b**********9
发帖数: 442 | 34 一支KCL溶在500ml的液体中点滴是没有危险的，正常补钾途径，但是不能溶在10或20ml
的溶液中快速静脉推注，楼主不要太担心。 |
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m******e
发帖数: 432 | 35 我现在在做光电化学的测量，工作电极是ZnO on ITO，辅助电极是Pt线，参比电极是
SCE，电解液是0.1 M KCl (pH = 5)。主要是测量I-V curve， V 是偏压。
我们实验室有两台仪器，一台仪器需要斩波器，因为如果不用斩波器，电流漂移很厉害
；另外一台完全不需要斩波器，效果也很好！这是什么原因呢？
先谢谢大家参与讨论！ |
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b*2
发帖数: 5 | 36 有些事你能感觉出来，但并不是所有的事你都能。
比如过我说过的打静脉的例子，病人那会知道护士读错了doctor的order那。
你所说的我们作为病人都会有这种想法。有句话叫外行看热闹，内行看门道。
例子：一个护士走进来给你说，医生给你开的生理盐水，防止脱水，然后就挂上打了。
外行的人觉得没有违规之处，内行的人就会发现生理盐水的袋子没有标签。没有标签意
味着什么呢？意味着，这里面可能是所说的生理盐水，也可能是KCL,也可能是D5W, etc
, 这代药品是不是给你的，不确定；这点药品在24小时之后会不会被换掉，难说，因为
没有注明开始的时间和日期。能看出一二了吗？ |
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h*******8
发帖数: 115 | 37 都是些术后的病人，recovery的护士会先给你report,主要要弄清楚病人做的什么手术
，伤口在哪里，麻醉方式，给了多少止痛药，抗生素，还有就是失血量等等。病人从
recovery出来以后，先要检查伤口，看看有没有出血，然后vital signs q15m'until
stable, 如果病人有大出血，或者情况不稳定，要赶快送icu，也要注意病人的呼吸,如
果病人的呼吸很慢要给个药，叫nacan，应该是中文的那络铜吧。腹部手术的要注意术
后有没有排气。持续膀胱冲洗的要小心管子堵塞。。。。。。。
当然所有的病人第二天都要看H/H,KCL等的LAB，万一低了，要给医生打电话，输血啊什
么的。 |
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B*******n
发帖数: 8 | 38 我印象中NCLEX 是不允许nurse 加KCL 到IV bag的。 是药房的职责。
min |
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m******y
发帖数: 38 | 39 麻醉师对手术室的护士说，“先给她一袋Pepcid。来，我们对一下时间。”
手术室的护士回答，“14：14.”
我默念着14：14。心里还在苦苦地挣扎，到底要不要做这个手术。虽然脑子里很清楚
其实已经没有后路了。
至星期五的中午，除了吃些冰块，我基本上无进食近72个小时。IVF从开始的生理盐
水200cc/hr换成了D5NS with 20mEql KCL @175cc/hr. 我根本不敢打开电视，因为
每一个带有食物的镜头都让我眼睛冒火。
我把身子蜷缩起来，我不想感受它的存在。
自从星期三，我就开始Google胆结石的种种话题了。显然我是属于高危人群；4F,
forty—40岁，fair—身体一般，fat---肥胖，fertile –拖儿带女的。又在YouTube上
反复地观看了Lap Chole 的录像。看完录像的结果是我的胃痛成功地转移成了头疼。
更让我头疼加剧的是GI的医生和Surgeon的意见相左。星期三的上午，Surgeon来了
， 说先做ERCP吧。下午GI医生说，不行，我的血检指标还高，这样对胰腺没好处；这
样吧，让我先做个En |
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f****o
发帖数: 2770 | 40 便宜的不能赚钱的药都shortage了
悲哀啊。。。money talks in this world
KCl
dilaudid
a bunch of life-saving chemos
Mg sulfate, selenium, multi-vitamin IV, K Phosphate, calcium gluconate, |
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b**o
发帖数: 5769 | 41 考试题不能贴啦。
给一个我们的作业好了。
O.D. is a 18 YO F who presented to your hospital 5 days ago following an
intentional ingestion of Seroquel® after a verbal disagreement with her
mother. O.D. admitted to taking 20—300 mg extended release Seroquel®
tabs. Several hours later, O.D. collapsed and her eyes rolled back in her
head. The paramedics noted seizure activity, and O.D. was transferred to
the hospital for further care. She was noted to have a tonic-clonic seizure
lasting 30 minutes and was int... 阅读全帖 |
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r********r
发帖数: 352 | 42 The easiest solution is change to KCl suspension and give through G tube.
Call MD for a new prescription. |
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l******k
发帖数: 27533 | 43 Er... I don't think we are on the same page, but it's OK~
It's good to identify PO KCl and iron issues
increased
the
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7 |
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m*****a
发帖数: 67 | 45 不过, 原文中的症状象KCL吃多了啊
如果是氰化物中毒, 记得黏膜有粉红色泡沫状黏液或呕吐以及苦杏仁味.
至于K, 恩, 人对K的调节能力远差于Na.
( //kick myself, 敢愣充大头蒜) |
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t*****f
发帖数: 25 | 46
老兄, 偶记得KCl是工业用盐吧, 生里盐水中好象没有它呀. |
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m**d
发帖数: 21441 | 47
快速注射KCl(如直接推注到静脉)会致死,K离子可调节神经传导,引起心跳失常. |
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a*****t
发帖数: 81 | 48 K离子怎么调节神经传导 ? 你说的是synaptic 还是 axonal 传导 ?
我认为注射KCL 能引起心肌细胞去极化失去自动收缩能力, 或者
通过blood brain barrier 使大脑神经元去极化导致中枢紊乱.
消化系统吸收无机盐是用的被动运输方式, 就是说, 当吸收细胞
(主要位于小肠绒毛内的enterocyte)内K浓度过高时它会自动停止
吸收K. K仍旧能渗透只有一种可能性就是吸收细胞破裂, K直接进
入到循环系统, 但是消化系统的血液是先通过kidney 然后才进入
心脏的, kidney里也有 Na, K 离子感受器能排出多余的Na, K.
只有当 kidney 也被破坏以后, K 才能使人致死原因如上. |
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y****e
发帖数: 71 | 49
好象是心脏自律细胞失常导致心力衰竭。
喝KCl似乎死不了，除非静脉注射。 |
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a********g
发帖数: 38 | 50 结晶次序是很复杂的东西。当蒸干NACL 和 K2SO4 混合溶液时，NACL NA2SO4 KCL K2SO4
这四种矿物都处于过饱和状态，但具体谁会结晶出来，That's a totally different
story.
在不同条件下结晶顺序是不同的,地质学中有个理论叫bowen's reaction series。一类矿
物在高温时结晶成olivine，温度降低时olivine又与剩余的SiO2反应结晶出完全不同的py
roxene,温度再降低pyroxene又变成amphibole...... 另一类矿物在高温和低温情况下会
结晶出同一种物质，成份稍有不同。
K2SO4 |
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