h********n
发帖数: 4079 | 1 lentivirus construct 上两个LTR之间的长度是不是有上限? 好像是8K?
我手头这个construct一共13.3Kb, 其中5'LTR -- sin LTR有7.5Kb, 有没有可能插入一
个2K的promoter+gene?
做lentivirus的高人请指教一下,
谢谢 |
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f***n
发帖数: 781 | 2 reference ltr
recommendation ltr
same mah? |
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N****a
发帖数: 513 | 3 帮你查了一下。你应该有权当时就看video footage. FERPA 是federal law btw, 就是
说每个州都应该遵守。
FERPA Request
Help the parent write a letter to the school, requesting a complete copy of
the child's cumulative and confidential files, omitting nothing. Under the
Family Educational Rights and Privacy Act (FERPA), parents have a right to
have access to their children's educational records. The video tape is an
educational record under FERPA.
FERPA is a federal law that affords parents the right to have access to
their childre... 阅读全帖 |
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l*****e
发帖数: 3343 | 4 1652 RMB/ton
density of crude: 0.87 kg/Ltr
1 ton=1149.4 ltr =9.63 barrels
=> 171.37 RMB/barrel
RMB/USD=6.5
Conclusion: $26.36/barrel crude
原油1.24亿吨，增加11.8%，进口均价为每吨1652.6元，下跌35.3%； |
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x********n
发帖数: 1188 | 7 本地有支700P LTR 在卖，看着像是支LTR TWS。附图如下，要价＄1200. 如果是tws好
像价钱还不错，是不是？纠结的地方是，这枪是不是除了打猎，平时就只有看着做狙击
手的梦拉？如果就是50，100yard的 靶场，他们给用这种枪吗？ |
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a***a
发帖数: 8941 | 8 好些年前看 @飞猪 玩tikka，知道这枪很准。
然后是 @txcowboy 买了一把243口径的tikka T3 lite，也是很准。接着我也跟风赶
deal买了一把 300wm口径的tikka，此后一直就是我用得最多的猎枪，我绝大部分猎物
都是用tikka拿下的，对tikka很有感情。
以前玩tikka的时候，tikka还有些小众，什么配件都找不到，偏偏tikka有个缺点就是
塑料件多。如果把这些塑料件换掉，tikka立马高大上。但是以前tikka几乎没有after
market的配件。所以我也死了这条心，准备以后还是搞个雷鸣顿700玩玩。
一晃多年过去，我现在开始物色一把308口径的轻型狙击步枪，20寸枪管就行，空重在9
磅以下，靶猎兼用。有好几个候选。
首先很看好FN的TSR，温切斯特70的枪机，三位保险，CRF，全长抽壳钩，固定抛壳挺，
枪栓和枪栓柄一体，recoil lug和receiver一体，结实可靠，rifleman's rifle，一直
是我的梦想。但是这枪现在到处不见踪影。另外有个缺点是重量偏重，几乎是我能接受
的上限，但是如果把hogue的枪托换成更好的枪托比如... 阅读全帖 |
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M*****e
发帖数: 11621 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
volontaire (volontaire) 于 (Sun Dec 22 11:47:31 2013, 美东) 提到:
说它经典是因为，曹雪芹在红楼梦里说，情产生的过程，“既悦其色，复恋其情”。这
是比较自然的，人本来就是动物，人最先感知的也是一个人生物特征，生物特征的相互
吸引，带来了情感和肉体的交流，然后是各种社会经济现实，决定了最终的关系走向，
李瓶儿和西门庆是情，欲，钱，交织的关系，这种关系也是最真实的男女关系
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charmed (仙境别红尘) 于 (Sun Dec 22 11:55:55 2013, 美东) 提到:
情，欲，钱，交织的关系，的确是最真实的男女关系，不过我就读不进金瓶梅，它太不
风花雪月了，不适合YY。。。
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volontaire (volontaire) 于 (Sun Dec 22 11:59:0... 阅读全帖 |
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a*****a
发帖数: 112 | 10 although your comment seems offensive - but i agree with you.
all M43 lens should be small like the M.Zuiker...
does not make sense.
銆愬湪daye520 (鍝堝搱)鐨
勫ぇ浣滀腑鎻愬埌: 銆:浣滀负涓釜钘曠矇锛岄粦鏉句笅鍌诲ぇ榛戠矖娌′粈涔堜
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onmouseover="_tipon(this)" onmouseout="_tipoff()">阅读全帖 |
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s**********i
发帖数: 11 | 11 另外楼上说我想多了的，如果这是一个business trip，双方为了省钱订一个房间的话
我一点都不忐忑，也知道怎么相处。可问题是这是一个date啊，而且是first date，再
说我现在也不了解她真实的想法是想LTR还是ONS。别说我是WSN，我还是挺想LTR的。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 12 PI/AP after 6 year tenure track if did not passed evaluative process to
Tenure Asso. Professor or even passed evaluation but no Grants supported from this year
you can try
alternatively other countries likes CH or NO if still hoped higher income:
i. e.
Institute of Clinical Medicine, Division of Cardiovascular and Pulmonary
Diseases
Institute for Experimental Medical Research
Professor or Associate Professor of Medicine (Clinical Physiology)
Salary based on salary level:
Professor Ltr.: 76 - 82... 阅读全帖 |
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Z******5
发帖数: 435 | 13 多谢楼上两位。
病毒最后包装的部分应该是HIV-5'LTR到HIV-3'LTR之间的部分吧。pll3.7载体上这部分
大小是5kb，我改造后大小是6kb。我要分别构建两个转录因子的载体，一个是500bp，
另一个1.4kb。我想应该没什么问题。 |
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x******o
发帖数: 76 | 14 想把6kb片段连进8.5kb的lentiviral vector里，试了几次都不成功，求助一下。
我是这么做的，单酶切得到6kb insert，切胶纯化，载体单酶切，去磷酸化，切胶纯化
。1:1比例4度连接过夜，转化stbl3感受态42度45秒，recover 1小时涂版，30度过夜，
板子上长几十个斑。挑斑入LB+amp 30度摇过夜，miniprep，酶切鉴定。跑胶时，总是
得到大概2kb的片段，无论是否酶切过。拿最近的一次质粒直接跑胶结果来看，12个克
隆，9个是2kb band，2个是degraded DNA（1-2kb size），1个是5kb左右（经酶切鉴定
可能是contamination）。 现在基本怀疑是LTR重组导致片段丢失，觉得自己已经考虑
了很多可能导致LTR重组的因素，所以只能问问大伙有什么建议。 |
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x******o
发帖数: 76 | 15 试过DH5a也做不出来，而且DH5a难道不是不适合做unstable clone吗？
我觉得主要问题可能是LTR之间片段丢失，所以总是得到小片段的质粒（2kb）。
我的LTR之间有10kb长，是不是太大了？ |
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j****x
发帖数: 1704 | 16 之前没留意过，近期突然发现，Clontech家的所有Lentiviral vector系统，包括其经
典的Tet-on/off/one lentivector，尽管宣传是最安全的第四代载体系统，但其中的
HIV-1 5'/3' LTR居然都是wildtype的而并非是被几乎所有其他商用载体所一致采用的
truncated/∆U3 LTR，作为self-inactivating (SIN) vector。这是件很奇怪的
事情，有哪位对Lentiviral vector比较熟悉的能讲讲吗？谢谢 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 17 要看ltr到ltr的总长度。1.8k不小了，如果你的载体里面本来花样就不少，那么插进你
的片段以后可能会超过上限，病毒滴度会降几个数量级
也许你把ires gfp什么都删掉效果会好不少， |
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f********0
发帖数: 583 | 18 Q1 有过ONS否？
有过
Q2 对ONS反感否？
5 非常喜欢（在有固定伴侣之前，我当然会ONS）
Q3 ONS与LTR矛盾么？
3不矛盾（ONS后找到了自己喜欢的，要是两情相悦，就LTR） |
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r**e
发帖数: 2504 | 19 干脆改为100 rmb/ltr，城市交通拥塞情况立即好转。ok? |
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b*****r
发帖数: 26 | 20 suan.
check this one out.
dou me di, die ni a na die ci juo!!
[In hungry1 (Looking)
masterpiece mentioned:]: Ha ha ha, 銆 鍦╤ungry1 (閬ユ湜) 鐨勫ぇ浣滀
腑鎻愬埌: 銆 : 鍝堝搱鍝堬紝 |
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b*********s
发帖数: 823 | 21 【 以下文字转载自 Sex 讨论区 】
发信人: alex100 (alex100), 信区: Sex
标 题: escort 术语大全
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Aug 2 21:43:34 2014, 美东)
AAMP Apartment Asian Massage Parlor. Based in a residential apartment
instead of a commercial storefront.
AAMP Asian-American Massage Parlor. This is the politically correct acronym.
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... 阅读全帖 |
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R********n
发帖数: 3601 | 22 难道不是西雅图马工先遭殃
Fukushima Radiation in Pacific Reaches West Coasthttp://www.counterpu........ |
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l*******d
发帖数: 3343 | 25 还有孤芳自赏的作曲家、美学鉴赏家等…
LGBT老将毛轮倭轮穆斯林[发表自未名空间手机版 - http://m.mitbbs.com" x-apple-data-detector........ |
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g*****p
发帖数: 790 | 26 该枪为雷明顿700P TWS的轻型版（Light Tactical Rifle—LTR），使用短枪管和减重的枪托，配有脚架，0.308英寸口径，使用308子弹，据说用了一种名为X-Mark的击发机构，选用各种弹药射击的散布都降到0.5MOA。 |
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l****o
发帖数: 258 | 29 大陆是最大输家
看了台湾方面民众反应，其他方面反映，总结几点
1。明天台湾大选，这件事是为民进党当选最大的催票，其威力相当于阿扁参选前的老
共打的两颗导弹，阿扁第二次前挨的两颗子弹。国民党预计惨惨惨败
2。台湾普通民众，更加反中，原本反中的大量在辱骂叫嚣大陆；中间派也不少变反派
。原因平时他们就认为被欺负，这次看到16岁的小孩子被“逼迫”欺负成这样，百姓气
炸了
大陆真想统一的话，获得台湾的民心是必须要做一下的，但是，这件事又把民心搞成零
了。
http://youtu.be/t57URqSp5Ew" x-apple-data-detectors="true" x-apple-da........ |
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