s**********e
发帖数: 2888 | 1 我想问的问题是，这种assay, 是不是给药（putative angiogenesis stimulator/
inhibitor) 只可能加在Matrigel里面？
如果给老鼠注射或者口服药物的话，会不会药物根本不会进入Matrigel,最后看到不到
Matrigel里面的效果？
谢谢了 |
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z********i
发帖数: 610 | 2 以前都是直接把细胞打进去，等几个月让瘤子长出来。看到有些文章用matrigel，也想
试试，不知道这样是不是瘤子长的更快? |
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m******f
发帖数: 25 | 3 想用分子量为50kd的大分子物质处理3D培养的细胞，将大分子物质溶在培养基中，不知
道能否穿透matrigel 与细胞接触。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 4 I don't know if they use matrigel or not. I always giggle when I saw people
using matrigel and then states that the tumor is gone. Hello, the matrigel
plug is always there unless you injected badly or not at all. For subQ
xenograft, you have to let tumor establish first i.e. growing, and then
start your treatment because the establishment was never 100% sometimes it
could be less than 50%.
However, for systemic xenograft for leukemia it is so damn aggressive and
its engraftment rate is 100%. |
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s******e
发帖数: 370 | 5 glutaraldehyde的auto fluorescence很麻烦啊
我用0.1%固定matrigel都太高，不加的话matrigel又会化掉…… |
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x**********h
发帖数: 36 | 6 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
ｙ．
同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
下！ |
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J******6
发帖数: 18 | 7 Try to use 50% Matrigel mixed with the cells and then inject. |
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D******9
发帖数: 2665 | 8 在养人ips细胞时， 发现在好的ips克隆周围有一些长得像FIBROBLAST的细胞，我的ips
已经挑选过了， 现在长在MATRIGEL上， 想知道这些细胞是由HUAMN ips来的， 还是污
染的MEF 细胞？thx |
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g***e
发帖数: 4 | 9 我也怀疑呢,没测proliferation,划痕就做了一次,似乎趋势和transwell一样.
我看有人说matrigel tube formation和细胞的侵袭,运动,还有什么什么有关,但我也在
很久以前貌似看到有篇很老的文献说迁移得弱的tube formation反而强,还说tube
formation不等同于在体的血管发育中的任何过程,只是一个间接反映细胞功能的指标.
但是这回出了这结果,再一查文献,都说迁移弱的tube formation也弱,简直是,难道当初
是做梦?
现在简直哪个结果都怀疑,恨不得都重新做一回. |
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g***e
发帖数: 4 | 10 我也怀疑呢,没测proliferation,划痕就做了一次,似乎趋势和transwell一样.
我看有人说matrigel tube formation和细胞的侵袭,运动,还有什么什么有关,但我也在
很久以前貌似看到有篇很老的文献说迁移得弱的tube formation反而强,还说tube
formation不等同于在体的血管发育中的任何过程,只是一个间接反映细胞功能的指标.
但是这回出了这结果,再一查文献,都说迁移弱的tube formation也弱,简直是,难道当初
是做梦?
现在简直哪个结果都怀疑,恨不得都重新做一回. |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 In principle, matrigel tube formation has something to do with cell invasion
, including the secretion of MMP and the formation of invapodia.
However the transwell migration reflect the overall chemotaxix property that
has very little relevence to invapodia.
These two assays measure very different aspect of cell motility. Therefore,
tube formation has nothing to do with transwell asssay, in principle.
Thise people who claimed they have a relationship are simply saying whatever
that is convenient |
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g***e
发帖数: 4 | 12 谢谢回复,又看了看文献,我现在有些怀疑tube formation的增强是由于stress fiber被
抑制了(然而尚无证据,纯yy),但是文献净是说stress fiber促进tube formation(说来
说去就围绕vegf一个例子).我相信促进stress fiber的可能促进angiogenesis,然而仅
对于matrigel这个模型,我认为抑制stress fiber的促进tube formation,这是模型和实
际的差别(同样尚无证据,纯yy) |
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C******r
发帖数: 790 | 13 能不能用量子理论来解释
普通肿瘤细胞打老鼠，一般打1百万个细胞吧，有的甚至还用matrigel来辅助
1百万的数量挺大了，有一两个比较变态的细胞能规避免疫攻击，理论就能生存下来，
所谓林子大了什么鸟都有
毕竟免疫系统也不是设计来专杀这些肿瘤细胞的，跟氨苄能杀光大量非氨苄抗性菌还不
太一样
楼上只被扎了一下，也没推注射器，顶多漏进去几十个细胞，不看好会长起来。保险起
见，还是向学校相关部门报备，万一万一有事儿，还可以搞个工伤医疗。 |
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w******h
发帖数: 102 | 14 这个我接触过一点，从成年老鼠肺里提取2型干细胞（中文大概是这个 英文Tii cell）
，混上matrigel之类的注入到肺的蛋白骨架里，培养一段时间后干细胞可以分化。但我
接触的那些别说移植，Tii正常存活都还是个问题，肺的结构也基本没有了，还有这个
移植手术的难度不是一般的高。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 15 Use matrigel for consistency, and expect about 2 out 10 mice won't even
engraft. You also need about 10 million cells per injection. |
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s******s
发帖数: 13035 | 16 上次那个日本人做matrigel上长in vitro眼球结构的让我的眼球也一亮，哈哈
不过，如果paper太亮了大家要怀疑造假了
master |
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s******y
发帖数: 28562 | 17 3D CULTURE 一般而言就是把细胞培养在一个泡在培养液的立体网络里，
而不是普通的平板里。最简单和普通的3D CULTURE就是把细胞养在用类似matrigel 这
种东西堆成的结构里。
3D CULTURE对于构造器官和组织结构的研究是一个非常关键的问题。对干细胞研究的直
接下游应用有关键意义。目前有非常多的未解决问题，比方说立体网络用什么材料构造
，如何保证养料和氧气的供应，等等。 |
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L*****o
发帖数: 48 | 18 RT. I could NOT get pretty well-formed tube on Matrigel when doing tube
formation assay.I am not sure if the cell starving is required before the
the tube formation assay? Usually how long is the starve duration? Can
anyone help me answer this question? Thanks! |
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b******9
发帖数: 425 | 19 看了好多paper，好像大部分都是用HE或者cyrstal violet染一下细胞然后数细胞，请问能做antibody immunostaining吗？如果可以的话，有详细的protocol可以share吗？另外如果想收细胞提RNA什么的应该怎么操作呢？
谢谢！ |
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b******9
发帖数: 425 | 20 顶一下，没有人知道么？
请问能做antibody immunostaining吗？如果可以的话，有详细的protocol可以share吗
？另外如果想收细胞提RNA什么的应该怎么操作呢？ |
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s**********e
发帖数: 2888 | 21 不是直接回答你的问题，我一般是用DAPI染色，然后这样数细胞很清楚。这个assay不
稳定，需要很多次的重复，才可以拿到比较consistent的细胞数目变化的结果。所以，
我估计如果你想进一步作antibody，问题可能更大。
我似乎发现癌细胞还好做一点，primary endothelial cells似乎更难做。
请问能做antibody immunostaining吗？如果可以的话，有详细的protocol可以share吗
？另外如果想收细胞提RNA什么的应该怎么操作呢？ |
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a*******o
发帖数: 16 | 23 一般用结晶紫染。。。antibody还真没试过 |
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T**********r
发帖数: 287 | 24 之前用24 well plates+martrigel:
1.100ul cell suspension + 100ul matrigel,放在24 well plate里，on ice 10 min.
2.37C for 30 min.
3.Add 4% PFA, fix for 30 min.
4.Immunostaining.
这个protocol有两个缺点：
a. 过程中细胞损失太多，2000 cells 最后剩下不到200.
b. 在martrigel厚的地方的cell没办法被抗体lable.
希望大家指点一下。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 25 我们通常用BD的trans-well。
如果看migration就直接把细胞分进去，
要是看invasion就先用matrigel coat一下，然后再把细胞分进去。
然后根据细胞migration/invasion的能力，过一段时间后，把里面那个well上层的细胞
擦掉，fix一下，用Dapi染染底部穿过去的细胞数目。时间要提前摸一下，太久了细胞
可能就掉下去了，太短了穿不过去。。。
版大赏个包子吧：） |
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y****y
发帖数: 123 | 26 不好长的话可以试试看
我是能不用尽量不用
当然我的细胞一般两周就长出来了
一个是细胞不好混匀经常一坨一坨的
另外冰冻不好切 |
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f*****f
发帖数: 195 | 27 我用Matrigel，半小时就贴上了，轻微晃动不会掉。 |
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n**********s
发帖数: 228 | 29 3D Matrigel culture of cancer cells,BrdU immunofluorescence
总是得不到好的染色（核染色很少），请问固定后用HCL 处理是最好的方法吗，也看到
有人用Ethanol 固定，不知哪个更好些？另外BrdU incorporation 有的人用3个小时，
有的文献是overnight，从来没试过overnight，不知道对3D culture, 后者是不是更好
些？
烦请有过经验的牛人帮忙解惑一下，不胜感激！！ |
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x*****e
发帖数: 309 | 31 请问有没有办法分开不同大小的 Sphere 推荐？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 不太懂你在问什么。你是想找一个方法来分开不同大小的球状物体（Sphere）？ 还是
想找一种作为尺度分离柱(size exclusion column)的树脂胶体（resin Sphere)？
对于蛋白和特别小的球状物体（小于10nm)，可以用滤膜或者分离柱来分开。分离柱材
料最常见的就是sephedex, 不同规格有不同的分离能力，具体看产品标定。
对于球状物体，如果体积比较大（超过10nm)，可以用gradient centrifugation离心法
来分离。 |
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H******y
发帖数: 183 | 33 文献求助
如果谁方便请帮忙下载Nat Protoc文章
Nat Protoc. 2012 May 17;7(6):1138-44. doi: 10.1038/nprot.2012.053.
Increased initiation and growth of tumor cell lines, cancer stem cells and
biopsy material in mice using basement membrane matrix protein (Cultrex or
Matrigel) co-injection.
非常感谢。请发至信箱h********[email protected] |
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A******y
发帖数: 2041 | 34 1. It will not attach to the plate. If you want the cells to attach to the
plate for immunostaining, you have to using fibronectin or matrigel etc.
2. The split is cells/mL. K562 should be sub-cultured at 200k/mL and no
more than 1 million/mL. However, it is very hard to kill K562 cells, so
even 1.5 to 2 million cells are possible. |
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发帖数: 1 | 35 新发现丨细胞常温运输的高效简易方法！
2017-06-03 邓文生 等 细胞
2017年4月18日，武汉科技大学生命科学院邓文生教授在美国公共科学图书馆的期刊上
发表一篇题为“The analysis of viability for mammalian cells treated at
different temperatures and its application in cell shipment”的研究论文。主
要验证了在室温下运输细胞的简易方法的可行性。
目前，传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法。细胞存活率较高，但是都只
能短距离运输，花费高。近几年，也还有一些关于细胞运输方法改进的报道，例如有用
agarose胶或matrigel基质与细胞混匀后，再在室温运输。这种种方法都非常繁琐复杂
，影响因素较多。
邓教授在英国做实验时，一个小的失误，意外发现室温下放置的细胞在第二天仍能保持
较高的活性。就想是否能够直接在室温的条件下运输细胞，从而简化细胞的运输方法。
为了验证这个方案的可行性，该实验室采用其常用的细胞系M2进行一系列验证。首先确
定细胞密度为1*105 ... 阅读全帖 |
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