B******o
发帖数: 496 | 1 Invitrogen的purelink maxiprep kit不错。每次yield都在1500ug左右
可以试试 |
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r****r
发帖数: 6957 | 2 Promega Wizard Maxiprep Kit. Best price, best quality |
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f****h
发帖数: 41 | 4 I have a question to ask people who know molecular biology. I have a plasmid
in DH5a cells and I can get 10ug DNA (200ng/uL, 50uL) from 1.5mL miniprep
culture. However, when I cultured 250mL for maxiprep, I only got 130ug DNA,
which is more than 10 times less than what I expected. The procedure of
extracting DNA should be fine because I got 900ug DNA from another plasmid
in parallel.
Can anyone give me some comments/suggestions? Thank you so much! |
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h*********g
发帖数: 18 | 5 我用maxiprep提取plasmid (2Kb)，跑胶得到2条带，还有些模糊的带，cut后也有几条
带，其中一条带是2kb, all the other bands are larger than the 2kb band。THe
restriction enzyme should only cut one site in the plasmid.Can I trust the
result? After that I will do the gel extraction. Why there are several bands
? Thanks. |
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n*****s
发帖数: 8 | 6 I used Qiagen plasmid plus Maxiprep kit to purify my construct. And I was
asked to do a second precipitation after the elution step in order to
further remove the salt contamination. I use -20C isoproponal centrifuge at
room temp for 30 min, 15000xg, then wash with 70% ethanol, and resuspend
the DNA in EB buffer.
I did not see the precipitation at the bottom of the 2ml tube after the 30
min, a senior phd student told me that sometimes even one can not see the
precipitation one will still get so... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 7 The bacteria may be over grow,
try to pick up a new colony.
I used Qiagen plasmid plus Maxiprep kit to purify my construct. And I was
asked to do a second precipitation after the elution step in order to
further remove the salt contamination. I use -20C isoproponal centrifuge at
room temp for 30 min, 15000xg, then wash with 70% ethanol, and resuspend
the DNA in EB buffer.
I did not see the precipitation at the bottom of the 2ml tube after the 30
min, a senior phd student told me that sometimes... 阅读全帖 |
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m*****z
发帖数: 1451 | 8 如果你是maxiprep的柱子elute之后加异丙醇沉淀没看到白色沉淀，十有八九是你的e
coli长老了。重新划板子挑新鲜菌落。
如果你确定在第二步沉淀前的确是有DNA的，那么你留的上清应该还是有用的，
Maxiprep这么多的DNA，加点NaCl就都能沉淀出来，50mM就够了。
我仍然很疑惑，maxiprep的产物最后都会用70%乙醇洗过，根本不存在高盐的问题啊，
不明白你这多一次的异丙醇沉淀意义何在 |
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r******k
发帖数: 446 | 9 我maxiprep的时候遇到过类似情况，miniprep没问题，但是maxiprep出来的consturct
，transfect到细胞里面的时候就是表达不出蛋白。后来发现可能是maxiprep的时候用
枪吹的太剧烈了，导致dna被切断了，跑胶的时候很多弥散。 |
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l*****d
发帖数: 7963 | 10 1-3月
maxiprep
fakeshawn
fatmingzhou
ch12
Alinghi
ladyred
4-6月
Promega
lglg
fakeshawn
fatmingzhou
VMR
hsm08
7-9
fakeshawn
fatmingzhou
ch12
amilyz
ycc123
10-12
fakeshawn
cloudi
fatmingzhou
steve1234
ch12
以上每人次奖励100伪币，多谢大家的辛苦付出！
奖励明细如下：
fakeshawn 400
cloudi 100
fatmingzhou 400
steve1234 100
ch12 300
maxiprep 100
Alinghi 100
ladyred 100
Promega 100
lglg 100
VMR 100
hsm08 100
amilyz 100
yc... 阅读全帖 |
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N2
发帖数: 81 | 11 1)I suggest use Sigma Maxiprep kit. Very fast and easy!
2)According to the yield, it really really depends on your plasmid copy
number( not only the origin). Your cloned gene, toxicity .... many factors
affect the copy number. If you can not get a good miniprep yield, you can
not expect a good yield in Maxiprep neither.
3) the other thing you can do is let a company do that for you. Many company
provide this service.They can provider 1mg plasmid at 1mg/mL with the cost
about 200-250 dollars per... 阅读全帖 |
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l*****d
发帖数: 7963 | 12 版面活动：
http://www.mitbbs.com/article_t2/I485/31188267.html
提问奖：
maxiprep 50
hyang25 50
zjs511 50
snow2015 50
huoshao 50
VMR 50
wqmc 50
moems2009 50
wendy2009 50
gogo0031 50
frankmeili 50
macos6 50
解答奖：
fakeshawn 400
cloudi 100
fatmingzhou 400
steve1234 100
ch12 300
maxiprep 100
Alinghi 100
ladyred 100
Promega 100
lglg 100
VMR 100
hsm08 100
amilyz 100
ycc123 100
请从版面金库扣除。谢谢 |
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m*********k
发帖数: 10521 | 13 "[I485]ladyred Jan 12 ● 【本版活动】每季度设提问奖三名，解答奖若干。"
成功奖励 400 伪币的用户: fakeshawn,fatmingzhou
成功奖励 300 伪币的用户: ch12
成功奖励 100 伪币的用户: cloudi, steve1234, maxiprep, Alinghi, ladyred,
Promega, lglg, VMR, hsm08, amilyz, ycc123
成功奖励 50 伪币的用户: maxiprep, hyang25, zjs511, snow2015, huoshao, VMR,
wqmc, moems2009, wendy2009, gogo0031, frankmeili, macos6
扣除版面:(I485)2800伪币成功 |
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发帖数: 1 | 14 在国外混这么多年，换个洗钱的行业海归吧
扛着陈水榕教授的Maxiprep Kit的变形金发师姐，再换个同学身份，
换个行业暴发户吧 |
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l*****d
发帖数: 7963 | 15 1-3 月 maxiprep hyang25 zjs511
4-6 月 snow2015 huoshao VMR
7-9 月 wqmc moems2009 wendy2009
10-12 月 gogo0031 frankmeili macos6 |
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n*****s
发帖数: 8 | 16 这个construct之后要包装成病毒，所以需要remove the salt contamination，另一个
实验室在等着我的maxiprep，但是我现在都不敢用isopropanol的，我觉得问题可能出
在-20C 的 IPP上，本来我的volume就小，可以用room temp几分钟的。。。 |
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f**u
发帖数: 346 | 17 呵呵，你这样能沉淀下来DNA才奇怪呢。DNA的酒精或者异丙醇沉淀是需要一定的盐浓度
的，常用的是0.3M NaAc。如果盐浓度不够是沉不下来的。你做Maxiprep的时候洗脱的
那一步是高盐洗脱，所以你第一遍沉淀不需要自己加盐，但是当你把沉淀溶解了以后二
次沉淀进一步纯化的时候一定要加盐才行。
另外说一句，你想把DNA里的盐完全去掉从化学上就是不可能的，磷酸骨架上的负电必
须要有正电的阳离子去中和，即使你用水去溶你的沉淀，或者用水从柱子上洗脱DNA，
都免不了有微量的盐。所以更可行的办法是找到一种和你的病毒包装实验compatible的
盐。由于Qiagen的elution buffer里的盐对于有些实验是不好的，所以有时候的确是需
要二次沉淀，不过沉淀前一定要自己调整盐浓度，一般来说加0.1体积的3M NaAc (PH 5
.2)，然后再用1体积异丙醇，或者三体积酒精沉淀。我的经验温度是不重要的。冰箱不
冰箱无所谓。
另外向Maxi这种很麻烦的，建议你离心以后把上清留着，这倒确认最后得到了DNA。另
外对于Maxi，绝对不可能看不到沉淀，你肯定能看到很大很大的沉淀才对，否则肯定是
哪... 阅读全帖 |
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w******a
发帖数: 1527 | 18 Qiagen maxiprep有时候真的很恶心。我后来换成zymo的了~~~~ |
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c**y
发帖数: 127 | 19 zymo maxiprep只需要～40分钟？
这么快阿？
真是out了。。。 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 20 you need more salt to precipitate DNA.
besides, never throw away the supernatant after maxiprep or precipitating
DNA, until you are sure you get what you want.
just my 2cents. |
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B******o
发帖数: 496 | 23 定义费时先。
一般一次也就3-4小时。一次产量大概是qiagen的两倍，算省时么？ |
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L**********O
发帖数: 1761 | 24 哈哈~~
比如QIAGEN的是相当费时。。看着那一滴一滴的，我就想抓狂~~~ |
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B******o
发帖数: 496 | 25 它家的柱子比qiagen好像厚些，bind的DNA多些。至于滴的速度，跟你的裂解液是不是
离心彻底很有关系吧 |
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L**********O
发帖数: 1761 | 26 啊。。我忘记具体原理了。。我就记得zymo的可以直接离心，不用等着重力作用滴啊滴
~~~~
难道invitrogen的也不能离心呀？ |
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B******o
发帖数: 496 | 27 俺可怜的包子呢，这年头。。。吃口包子这么难。。。。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 28 Qiagen有一套快速的kit, 不需要离心，不需要流，柱子统统做在针筒上，
全部都是只要推针筒就行了。 菌体收集好了以后（这步要离心），其他的
一个小时我看差不多就够了。 |
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s***o
发帖数: 326 | 29 omega的么？直接用注射器和真空泵。这个比较快 |
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L**********O
发帖数: 1761 | 32 Thank you guys~
Can you tell a little bit the reason when you recommend? |
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p******d
发帖数: 3737 | 37 我自己做，每次的纯度和得率都很不错，也不用滴滴答答的等。不知道这位的感觉怎样。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 38 lz能展开谈谈为什么不要qiagen和zymo么？ |
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L**********O
发帖数: 1761 | 44 Thank you all~
Happy New Year~
Check your baozi~ |
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z*******6
发帖数: 679 | 46 有个叫nucleobond的midi，我每次做都是1mg左右的yield。。。不明白为什么在这边不
流行。。。 |
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L**********O
发帖数: 1761 | 47 我用他家的miniprep kit还不错~~~ |
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s********r
发帖数: 312 | 48 we always use Qiagen to maxiprep for ES electroporation. Concentration is 1-
1.5ug/ul, not high enough for your purpose? |
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s******s
发帖数: 13035 | 49 origene powerprep HP plasmid maxiprep, 比qiagen的好很多 |
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s******s
发帖数: 13035 | 50 Origene的Maxiprep kit
我倒是没做过BAC，正打算做，今天下午刚向实验室一美国帅哥请教，他
大概抽过几十个BAC了。说一般200ml能拿到1mg。 |
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