j******i
发帖数: 939 | 1 SBI关于他家minicircle DNA描述：
'For dividing cells, expression of the minicircles lasts up to 14 days. For
non-dividing cells, expression of the minicircles drops slightly after the
first week, but then can continue expressing the transgenes for months.'
可能入核跟size也有关系。minicircle DNA小，更容易进入细胞核。 |
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h******y
发帖数: 351 | 3 minicircle DNA的优势主要有两点。一是size小，转染效率高。二是最主要的，因为去
除了在bacterial中复制和筛选所需要的细菌DNA元件，从而降低了在真核细胞中被识别
成异源而排除的几率。有的minicircle DNA上加了S/MAR元件，从而可以以episome的形
式在细胞中长期存在，实现外源基因的长时表达。 |
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B***v
发帖数: 113 | 4 我现在想我可能不需要minicircle DNA, 我只需要把我的construct (promoter-insert
-polyA)两端加上黏性末端连成circle DNA就行了。我给这个公司打电话了，
minicircle DNA backbone有1.2 kb, 如果我直接连起来连这个1.2 kb都没有，更小。
就是不知道这两种format哪个表达更好
linear promoter-insert-polyA vs. circular promoter-insert-polyA |
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B***v
发帖数: 113 | 5 关于minicircle DNA的“backbone”我打电话问这个公司了，https://www.systembio.
com/，他们说1.2 kbp的backbone，不是parental，我觉得是可以更小的，但他们就这
么说的，我的insert 1.7的话，整个就2.9
你说的这个1，2，3都是对的。
我之所以想自己搞是因为如果我直接把insert连起来连这个1.2 kb都没有，更小，最精
简的表达单元。而且
minicircle DNA的制备很tricky，条件稍微不合适效率很低。我没有一手经验，这个公
司的人如是说。 |
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j******i
发帖数: 939 | 6 生物在做肿瘤治疗什么的 有一个主任是发明minicircle DNA的 现在拿来跟治疗结合
这个所好像开了不少公司 不知道股权怎么分配 PI不知道能拿多少股权 |
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j******i
发帖数: 939 | 7 google一下，确实是有。很奇怪，有人在做这些。另外一些，却做相反的事情－把多余
的序列都去掉，只留下expression cassette 来产生minicircle DNA, 表达效果却比普
通的plasmid好很多。 |
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j******i
发帖数: 939 | 8 陈志英的minicircle DNA不错。很经典的工作。免疫治疗只能算半路出家。他的斯坦
福老板 Mark Kay是基因治疗领域的大牛，但也不是免疫治疗的行家。 |
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B***v
发帖数: 113 | 9 你这个有点意思，我头一次听说，3kb确实很小，比我现在加个polyA之后1.9kb也大不
了台多。我研究一下。Minicircle DNA应该稳定性更好？转录效率更高？ |
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j****x
发帖数: 1704 | 10 minicircle DNA的“backbone”只有几十bp，就只是两个重组臂的残留序列而已，你说
的1.2kb指的是parental plasmid，在最终的mcDNA里面是没有的。
线性片段不是不可以，但有几个问题：
1. 线性DNA的转染效率会显著低于超螺旋结构的DNA。
2. 细胞内的稳定性显著低于超螺旋闭环DNA，因为对DNase更敏感，更容易被降解。
3. 缺少稳定的大量制备方法（PCR？）
insert |
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B***v
发帖数: 113 | 11 电话里告诉我的：
minicircle without insert 1.2k bp
CMV 350 bp (这个很小，一般600-700bp)
SV40polyA 131 bp（这个也很小）
总觉得这个1.2还包括其他东西。 |
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s**f
发帖数: 20 | 12 请发到z*****[email protected],多谢！
Phys. Rev. Lett. 110, 148105 (2013) [5 pages]
Thermodynamics of Writhe in DNA Minicircles from Molecular Dynamics
Simulations |
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