S******e
发帖数: 393 | 1 想用SalI-NheI double digetion,
NEB suggest sequential,
但我看到SalI和EcoRI double digestion 用 E.coRI buffer
NheI 和 EcoRI double digestion 也用E.coRI buffer
是不是SalI-NheI double digestion 就可以用E.coRI buffer，
而不用sequential了？
多谢回答！ |
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d**********9
发帖数: 981 | 2 一个质粒上只有两个酶切位点NheI和AscI，但是我要连接两个不同来源的PCR产物，酶
切后一段含NheI和BamHI,另一段含BamHI和AscI,可不可以直接将3段连接？有什么办法
可以提高效率？请求高手帮忙，多谢多谢！ |
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z********u
发帖数: 1 | 3 职位描述：
为适应我国医疗体制改革的发展与需要，卫生部卫生经济研究所国家编码与支付制度研
究中心现向海内外聘请DRG研究专业人士，致力于开发与制定我国DRG支付制度。本职位
要求如下：
1、公共卫生、社会医学、卫生政策、卫生事业管理学、医院管理学或其他相关专业硕
士或博士学位。
2、有浓厚的研究兴趣，有吃苦耐劳的精神，决心致力于我国DRG支付制度的研究，具有
良好的人际沟通能力和团队合作精神。
3、工作语言以英语或德语为主。能熟练阅读、翻译专业外文尤其是德文资料者优先；
有较强的口语能力。具备较强的逻辑思维能力、分析能力和文字表达能力。
4、国内外在岗、应届毕业生均可，有德国、澳大利亚、美国或其他国家从事DRG研究工
作经验者优先。
5、能熟练使用SAS等统计软件。
卫生部卫生经济研究所是我国医疗卫生改革与卫生政策制订的智囊机构，详情请浏览网
站：
http://www.nhei.cn/
有意者请将简历发至：
y*******[email protected] |
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M****e
发帖数: 70 | 4 with my experience, the suggestion is to check the PCR product
first. i would rather not digest the PCR product, actually, it
is better if you can subclone it first. for double digest with
NheI and XhoI, if you are using NEB buffer, use buffer2. digest
the insert and vector for enough time, and make sure your enzymes
are good (i think so from your description). unless the cloned
gene is harmful to the bacteria host, the cloning problem often
come from incomplete digest for such cloning strategy. |
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q*****d
发帖数: 445 | 5 Plasmid pYD1-CipA1(3)-EGII was obtained by cotransforming G10A1-HR1, G10A1-
HR2,G10A1-HR3, G10A1-HR4, HisG-EGII, and DrdI/NheI-digested pYD1-
CipA1(3) into EBY100. All plasmids were purified from S. cerevisiae and
thentransformed into DH5a, recovered, and confirmed by DNA sequencing.
以上是我在一篇文章里找到的句子，有两个问题不明白，特来请教：
1.这是不是一种多片段克隆的方法，他是把vector和n个要插入的片段纯化之后不用连
接酶直接转化大肠，这种方法成功率如何？多少个片段都可以吗？
2.他的质粒纯化怎么用酵母呢，有什么优点吗？
谢谢大家，因为我有一堆克隆要做，急需要多片段克隆的方法，一个载体有14个片段要
插入！ |
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