L****e
发帖数: 499 | 1 想用NIH3T3 作细胞模型研究 FGF21，但是不知道NIH3T3 是否表达 FGF21的受体
betaKlotho 和FGF1Rc，因为不是主要的课题，所以不想也没钱去买这两个抗体验证了
，想请教一下有没人知道或者有这方面的经验。另外NIH3T3 是实验室用得很多的一种
细胞了，它的基因表达谱不知这么去查？
多谢了 |
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p*****9
发帖数: 32 | 2 本人想用nocodazole treat NIH3T3 cell 看G2/M phase arrest. 请问用100ng/ml
treat 20 hour 后细胞形态应该是什麽样的呢？ G2/M phase 的细胞都应该是圆圆的吗
，好象还比较小。
以前没用过nocodazole, 请用过的人指点一二。多谢 |
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O***n
发帖数: 13127 | 3 我别成了民科，hoho
动物实验证明，亚硝胺能诱发动物食道癌，而阻断胺类的亚硝基化能预防食道癌的发生
。林县人群尿中发现的一种新亚硝基化合物-亚硝基异脯氨酸，可引起 NIH3T3细胞的恶
性转化，接种裸鼠形成纤维肉瘤。近年来陆士新等应用林县环境中发现的NMBzA与人胎
儿食道上皮共同培养三周后，将上皮移植到 BALB/C裸鼠肠系膜上，同时以NMBzA继续喂
饲裸鼠，结果在肠系膜上发生鳞癌，对照组裸鼠中无肿瘤。从NMBzA诱发的肿瘤组织提
取DNA中发现存在AIu序列，结果证明诱发的肿瘤来源于人类组织。这些结果首次证实亚
硝胺能诱发人食道上皮鳞癌，为林县食道癌亚硝胺病因提供了直接证据。 |
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p*****9
发帖数: 32 | 5 请问Nocodazole treat 后 多少percentage 的细胞会变圆, arrest 到G2/M? 是 100%,
或是大多数的细胞吗? 我做只有10-20% 细胞变圆, 感觉不太对头呀.
多谢了. |
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y***i
发帖数: 11639 | 8 google Nocodazole synchronization
必须用 Thymidine-Nocodazole double treatment。而且之前必须从让cell不断的分
裂几次，让cell处在活跃的proliferation 状态才行。结果好坏部分靠运气。最好能到
7~80%。
%, |
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p*****9
发帖数: 32 | 9 多谢高人指点, 请问在 double thymidine treat 前, 一般plate 多少cell density
比较合适? 自己觉得不能plate 太高的density, 20% 左右(double thymidine
treatment 开始时) 合适吗? |
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l******g
发帖数: 83 | 10 3T3 用Nocodazole synchronization 的效果是不太好，我以前做的时候，几个cell
line， 3T3 treat后变圆的比例最少。用在Hela 还有293 上效果很好。
%, |
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i******0
发帖数: 17 | 11 用retrovirus deliver transgene into NIH3T3 cells. 以前都用一次infection, 然
后就做selection. 蛋白表达不太高. 请问如果我infect 两次, 或者是三次, 会增加蛋
白的表达量吗? 若要这麽做, 每次infection 之间需要做selection 吗?
请高手指教, 谢了. |
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i******0
发帖数: 17 | 12 本来做的NIH3T3 stable cell line, 表达一个基因, 本来养得好好的. 冻在液氮里储
存了一段, 再解冻了养, 现在长得很慢了. 也没见太多细胞死. 有什么可能?
多谢 |
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l*****m
发帖数: 122 | 13 谢谢你的建议:)
具体说说我的virus载体和transduction的过程吧~
1> retrovirus用的是MSCV based带有mir155 backbone的一个载体（某postdoc自己构
建的）有GFP marker。因为它只侵染dividing cell, 所以就在collect BM的当天做一
次spin infection （用fresh virus containing sup from transfected 293T cells)
，之后两天各做一次spin infection，然后让细胞在有GMCSF的medium里面继续分化到
day7 (中间换一次medium). 最后收细胞染色FACS. 现在结果就是no virus control分
化没什么问题，通常我得到90％ CD11c+细胞，其中MHCII+大概15％；问题是无论是
control virus (empty vector)还是有target shRNA的virus，细胞就不表达CD11c了 (
<10%），MHCII到没怎么变，还看过CD86之类的co-stimulatory molecul... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 14 如果不把它当293那样的细胞做蛋白的话
作为研究模型，它一般可以用来做哪些研究呢？
比如哪些器官的发育？ |
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i******m
发帖数: 495 | 15 We just use it as 293 cells |
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j********r
发帖数: 156 | 17 多谢楼上回复。EGFR (也叫HER1）和HER2 可能算是这样的例子，这两个在众多cancer
中都有过表达，也有大量研究propose their oncogenic functions. 可拿EGFR来说，
野生性transform体外培养细胞的例子好像只有在NIH3T3中，而且需要the addition of
EGF。
理论上，这似乎涉及到一个问题，蛋白表达量增加多少才有可能会产生质的飞跃？相比
之下，很多oncogene只有在突变的情况下才能有效转化细胞。这也比较容易理解，因为
许多oncogenic allele编码的蛋白一直是处于功能活化的状态。
如过楼上看到哪个野生型的oncogene （over)expression 能 transform human
epithelial cells, 麻烦告诉我一下。谢谢！ |
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m******5
发帖数: 1383 | 18 the financial situation is a little bit tight
so there would be no chance for me to try too many antibodies……
so could you recommend a pair of antibody anti p38 and phorsphorylated p38
to detect if this pathway is elevated?
Thank you much! |
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Y*Z
发帖数: 1301 | 19 cell signaling works for me |
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h******y
发帖数: 1374 | 20 CST:
Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP™ Rabbit mAb #4511
1:2000 dilution |
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n****n
发帖数: 434 | 24 There are a couple of things you may need to know (assuming the gene is
indeed the correct TS gene):
1. A TS gene may not inhibit cell growth when overexpressed. This is because
the TS gene product may need to be activated. If your cells are not
challenged with the right condition, they may not respond to the TS. If the
TS gene product is analogous to some kinases, phosphatases, receptors, you
may be able to construct a constitutively active mutant and then use this
instead. If you suspect your... 阅读全帖 |
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m***7
发帖数: 62 | 25
No. There are many cell lines which are not cancer cell lines, like NIH3T3
cells. But since it is a cell line, there must be some mutations, like p53
mutation.What is MDCK?
It depends. But generally speaking, there should be some difference. |
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m******5
发帖数: 1383 | 26 你用的什么cell line? Hela好像特别容易进核，换NIH3T3或者293T试一下
不过楼主你做这个NES的目的是干嘛？ |
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x****u
发帖数: 530 | 27 谢谢大家的回复。
下面这篇文章是说GFP half life是2.8h吗？
Automated live cell imaging of green fluorescent protein degradation in
individual fibroblasts.
Halter M, Tona A, Bhadriraju K, Plant AL, Elliott JT.
Source
Abstract
To accurately interpret the data from fluorescent proteins as reporters of
gene activation within living cells, it is important to understand the
kinetics of the degradation of the reporter proteins. We examined the
degradation kinetics over a large number (>1,000) of single, living cells
from a... 阅读全帖 |
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q**********0
发帖数: 335 | 28 Which cell line is good on the study of cell cycling and cancer? NIH3T3,
Hela, HepG2 or Huh 7? Thanks a lot! |
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e**r
发帖数: 1144 | 30 NIH3T3,
偶然发现有一片细胞长出了这样一个东西 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 31 可以，我做过。hras transform nih3t3然后kd |
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V******t
发帖数: 444 | 32 比如实验需要NIH3T3敲除某基因，能否用老鼠胚胎干细胞打靶的原理，做基因敲除呢？
怎么很少看到有人做这样的事情呢？ |
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r******g
发帖数: 600 | 33 http://pnabio.com/products/KOCells.htm
你们看
Cell lines that we have generated knock-outs or knock-ins
HEK293 cells
HeLa cells (hypertriploid)
SKBR3 cells (hypertriploid)
HCT116 cells (diploid)
MCF7 cells (Hypotriploid)
K562 cells (hypotriploid)
CHO cells
NIH3T3 cells
We have successfully generated knock-out clones up to 4 copies in one round.
应该不难做吧
成功率应该不低，好想自己试一下 |
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