w**********9
发帖数: 242 | 1 several elements are important
1), bi-ventricular hypertrophy
2), ventricular muscle degeneration
3), interstitial lymphocytes infiltration in ventricular muscle
4), Sensory nervous system is impaired. Lesioned DRG + dorsal column + doral
nucleis in medulla-----> should be Romberg sign(+)--->ataxia |
|
l*h
发帖数: 4124 | 2 their 结肠低分化神经内分泌癌 could be correct, but i am not convinced by the
evidence presented. say the two common markers, what percentage is 部分?
what distribution and percentage is called 灶性? without proper description,
you don't even know whether they saw them on tumor cells or some normal
tissue.
in addition, there is almost no histological grading information. there is a
lot more than 低分化 in grading. what size are the cells? what do the
nuclei look like? what do the cytoplasms look like? |
|
l*h
发帖数: 4124 | 3 it's in the thalamus. it's not that easy even if it's very early. the
hemarrhage may have already torn long tract fibers and injured important
relay nuclei when the symptoms were seen. |
|
c*******u
发帖数: 12899 | 4 ☆─────────────────────────────────────☆
debonair (江南小生) 于 (Sat Aug 18 16:58:17 2012, 美东) 提到:
众所周知，中国虽然是乙肝大国，关于乙肝病毒的研究最发达的国家却是美国。
所以，中国医生嘴里的吃饭不传播乙肝病毒当然是转述自西方流行病研究的成果。但真
要探究吃饭是否传播乙肝病毒，还得考虑以下因素。
1. 目前现代医学的看法是，乙肝病毒携带者唾液里面的浓度远低于血液，所以唾液传
播并不是乙肝传播的主要途径。但注意不是主要途径不代表不是途径。
2. 中国人共餐，几乎每天和家人交换唾液。
3. 最要命的是中国人（包括第一代移民）口腔疾病多，牙齿牙龈有伤口出血是常事，
受感染的几率大增。
所以最有效的途径还是通过打乙肝疫苗，实行分餐。
☆─────────────────────────────────────☆
miaomi8 (miaomi8) 于 (Sat Aug 18 17:03:40 2012, 美东) 提到:
挺有道理
当然疫苗是王道
吃饭做不到分餐的话，用公筷公勺
★ 发自i... 阅读全帖 |
|
s********e
发帖数: 283 | 5 I did amnio test right before Christmas and got FISH result now but my
doctor is not coming back to work until next week. Her staff faxed me the
report but was not able to discuss it with me. My understanding is that my
baby is fine (not a Down baby). Can anyone help to interpret the result here:
Fish Result: Normal Fish Result
Findings and interpretation: FISH analysis was carried out using the probes
from Abbott Molecular as described above. One hundred interphase nuclei each
were examined.
Th... 阅读全帖 |
|
B******1
发帖数: 9094 | 6 School homework for a 7th grader: An Essay about Scientific Research and Its
Impact
- - - - - - -
Pave the Way for the Future
A few years ago while watching a documentary by Al Gore, I first heard of
global warming. We were living in San Diego, CA at the time. As you can
imagine, the idea of Southern California disappearing due to a rising sea
level was absolutely horrible to me. Global warming has started popping up
in the news more and more often since then. The culprit might be the
consumpt... 阅读全帖 |
|
L**i
发帖数: 22365 | 7 学习也麻烦你先看明白
列的第二个link，跟你说的没啥关系。自己看看那个increase percentage，1%不到
Results:
We found significant effect modification of influenza (p < 0.05) for effects
of ozone. When influenza intensity is assumed to increase from 0% to 10%,
the excess risks per 10-μg/m3 increase in concentration of O3 increased 0.
24% and 0.40% for hospitalization of respiratory disease in the all-ages
group and ≥ 65 year age group, respectively; 0.46% for hospitalization of
acute respiratory disease in the all-ages group; and 0.40... 阅读全帖 |
|
a*****e
发帖数: 4577 | 8 给你看一篇文章，也许对你有帮助
最终选择做中国人还是国际人只能follow your heart
个人以为多数自认为重要的选择最后都turns out mean nothing
反而是很多不经意的选择决定了人生的走向
读一九四七年黄昆给杨振宁的信，节选。
（人生态度的境界……）
……你說可能受了個人主義影響的話，使我想起B.C. 地質的王洪楨來Bristol時和我說
的話。他說我們中國的top intellectuals越來越和中國的根脫了連系，慢慢變成了一
種國際人，正和印度和猶太的intellectual走上了同一路徑。這種說法不能否認的正確
，很給我一個深刻的印象。同時他又說，他所最不能原諒的是，intellectual在國外打
起長久算盤的。他人很有正義感，見識也地道，所以他這樣說是衷心之語。但是事實卻
也不容否認，在英能久留的可能和在美國比自然小得多。因此，他可以在場外說話，格
外容易。但是我聽之下很有警惕之心。以我所知的，在美國停下來的真不少。這事也真
自然，看國內如今糟亂的情形，回去研究自然受影響，一介書生又顯然不足有挽於政局
，吃苦不討好，似乎又何必！不過我們如果相信我... 阅读全帖 |
|
S***p
发帖数: 19902 | 9 1947年4月黄昆给我的一封信*
杨振宁
黄昆和我在西南联大研究院是同班同学。我们于1944年得到物理学硕士学位。一年以后
，我们先后出国，去修读博士学位。他去了英国，我去了美国。出国以后我们不常通信
，可是每次提笔写信却总是写得很长。1947年2月或3月我给他写了一封长信。那时我正
在Allison的实验室工作，不很顺利，所以信上一定用了disillusionment一字。可惜这
封信我没有留下副本，而他也没有把原信保留下来。但是他的回信却在我的来往信件档
案之中。现在我把他给我的这封信打好复印在下面。
这封信很有意思。它描述了他（和我）作研究生时候的一些企求与失望的心态。也描述
了他对导师Mott的评价。关于Bernard Shaw的一段话也非常有意思。相信物理系的研究
生会从这封信中得到一些鼓励与启发。
附件二
黃昆1947年4月1日给杨振宁的信*
振寧：
......我對你所形容的感覺和disillusionment卻完全不覺得隔膜。你的煩惱不正是我
的
煩惱，因為我們「處境」不同，可是我知道如果我在你地位，感想大概差不多，幾乎無
疑的，disillusion 要更深一點。凡是... 阅读全帖 |
|
T**7
发帖数: 264 | 10 杂志是皇家化学学会的杂志，印象因子是6。
想审的同学请发给我：
1.名字
2.email
3.expertise 关键词（5个左右）
4.发表的文章
谢谢关注，希望大家好运
题目：Redox-triggered intracellular dePEGylation based on diselenide-linked
polycations for DNA delivery
ABSTRACT: Extracellular stability to protect DNA against nucleases and
stimuli-triggered intracellular DNA release are key factors in designing non
-viral gene vectors. In this study, diselenide-linked polycation mPEG-SeSe-
PEI was developed as a new type of PEG-detachable gene vector for redox-
responsive gen... 阅读全帖 |
|
y*****o
发帖数: 2364 | 11 April 3, 2016
USCIS
Attn: I-140
2501 S. State Highway 121 Business
Suite 400
Lewisville, TX 75067
RE: EB-1 Petition for Permanent Residency under the category of Alien of
Extraordinary Ability
Petitioner/Beneficiary: XXX YANG, Ph.D.
Classification Sought: 203(b)(1)(A)
Type of Petition: I-140
Dear Immigration Officer:
This letter is respectfully submitted in support of Dr. XXX Yang’s petition
for classification as a qualified immigrant under the first p... 阅读全帖 |
|
m******u
发帖数: 1213 | 12 药的名字在下面：
Revocon Tetrabenzine
中文名叫丁笨那嗪
亨氏舞蹈症也叫舞蹈症，目前有一种药物可以试试，英文名字叫 Revocon,
Tetrabenazine 中文名叫丁笨那嗪。
亨丁頓舞蹈症（Huntington's disease），又譯亨廷頓舞蹈症、杭丁頓舞蹈症等，是一
種遺傳性神經退行性疾病，起因於第4對染色體異常,病發時會無法控制四肢，就像手舞
足蹈一樣,並伴隨著智能減退,最後因吞嚥、呼吸困難等原因而死亡。該疾病由美國醫學
家喬治·亨丁頓於1872年發現，因而得名。這種病在歐美的出現率比在亞洲高，但以香
港為例，病例亦不少。
亨丁頓舞蹈症 (Huntington's chorea)，或稱亨丁頓氏症 (Huntington's Disease，縮
寫 HD)，是歐美白人較常見的腦部疾病，亞洲人罹患的機率只有百萬分之一。患者的四
肢和軀幹會如舞蹈般不由自主地抽動，造成日常行動不便。在發病初期，患者常會用一
些刻意的動作來試圖掩蓋手腳的擺動，所以週遭的人可能不容易發覺。伴隨這些抽動的
是認知和思考能力的逐漸退化，短期記憶衰退 (所以這部影片中的婦... 阅读全帖 |
|
|
l*******G
发帖数: 1191 | 14 Xie, Z. D. Condensation Nuclei Formation in the System of SO,-N-
02-03 in the Presence of Water Vapor. Doctoral Dissertation, Drexel
University, 1991
难道不是Drexel 毕业的？ |
|
M********e
发帖数: 2528 | 15 我不知道你是从哪里来的概念，比如“超过3个月以上喂养的实验概不算数？”，比如
科学实验从来不test超过3个月什么的，你是否读过任何文章啊？
下面是引用的综述的文章。
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0278691511006
在table3里列了很多研究转基因玉米及其他对动物的影响。在这个就有好几年研究啊。
这些研究结果都没发现转基因比传统育种的更risky。
不过我觉得我的确太闲了。
Table 3.
Impact of GM plant diets in multigenerational studies.
Plant Trait Reference & Funding Species Duration Parameters
Group (n = number of individuals per group) Mai... 阅读全帖 |
|
H**********k
发帖数: 2158 | 16 太牛了，原来您老是散逸大学的研究生院院长？
iq350
Dean, Graduate School
University of Notre Dame, Indiana, USA
7 years industry experience in computer science
3 years experience in financial risk analysis
4 publications in professional physics journals
Research topic: Theoretical Investigation of Tidal Waves in Nuclei |
|
w***s
发帖数: 7132 | 17 1947年4月黄昆给我的一封信*
杨振宁
黄昆和我在西南联大研究院是同班同学。我们于1944年得到物理学硕士学位。一年以后
，我们先后出国，去修读博士学位。他去了英国，我去了美国。出国以后我们不常通信
，可是每次提笔写信却总是写得很长。1947年2月或3月我给他写了一封长信。那时我正
在Allison的实验室工作，不很顺利，所以信上一定用了disillusionment一字。可惜这
封信我没有留下副本，而他也没有把原信保留下来。但是他的回信却在我的来往信件档
案之中。现在我把他给我的这封信打好复印在下面。
这封信很有意思。它描述了他（和我）作研究生时候的一些企求与失望的心态。也描述
了他对导师Mott的评价。关于Bernard Shaw的一段话也非常有意思。相信物理系的研究
生会从这封信中得到一些鼓励与启发。
附件二
黃昆1947年4月1日给杨振宁的信*
振寧：
......我對你所形容的感覺和disillusionment卻完全不覺得隔膜。你的煩惱不正是我
的
煩惱，因為我們「處境」不同，可是我知道如果我在你地位，感想大概差不多，幾乎無
疑的，disillusion 要更深一點。凡是... 阅读全帖 |
|
|
e********3
发帖数: 18578 | 19 The body is largely composed of water molecules. Each water molecule has two
hydrogen nuclei or protons. When a person goes inside the powerful magnetic
field of the scanner, the magnetic moments of some of these protons changes
, and aligns with the direction of the field.
前面已经有英文的reference，现在大多数体内的Rod都不是磁化的部件，不知道你
还在争什么。
你自己看看姚明自己说什么就知道到底照MRI是不是假新闻了。
姚明通过火箭公关尼尔森发表正式声明：“我一直都在努力回到场上，所以今天的新闻
对我来说很让人失望。我需要一些时间和我的医生商谈我未来的选择，但是我想感谢一
切这段时间对我表现出支持的人。我会等我们制定好一个计划后再发表评论。”
http://sports.sina.com.cn/k/201... 阅读全帖 |
|
B*****1
发帖数: 9127 | 20 你都没看懂那个哥们说的啥，还争神马啊
The body is largely composed of water molecules. Each water molecule has two
hydrogen nuclei or protons. When a person goes inside the powerful magnetic
field of the scanner, the magnetic moments of some of these protons changes
, and aligns with the direction of the field.
前面已经有英文的reference，现在大多数体内的Rod都不是磁化的部件，不知道你
还在争什么。
你自己看看姚明自己说什么就知道到底照MRI是不是假新闻了。
姚明通过火箭公关尼尔森发表正式声明：“我一直都在努力回到场上，所以今天的新闻
对我来说很让人失望。我需要一些时间和我的医生商谈我未来的选择，但是我想感谢一
切这段时间对我表现出支持的人。我会等我们制定好一个计划后再发表评论。”
http://spor... 阅读全帖 |
|
|
j******n
发帖数: 21641 | 22 【 以下文字转载自 Reader 讨论区 】
发信人: wonderlich (左岸，遁去), 信区: Reader
标 题: 一九四七年黄昆给杨振宁的信(节选)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 21 17:54:59 2011, 美东)
发信人: abalone (hope), 信区: Returnee
标 题: Re: 忍心入美国籍吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 21 14:12:56 2011, 美东)
给你看一篇文章，也许对你有帮助
最终选择做中国人还是国际人只能follow your heart
个人以为多数自认为重要的选择最后都turns out mean nothing
反而是很多不经意的选择决定了人生的走向
读一九四七年黄昆给杨振宁的信，节选。
（人生态度的境界……）
……你說可能受了個人主義影響的話，使我想起B.C. 地質的王洪楨來Bristol時和我說
的話。他說我們中國的top intellectuals越來越和中國的根脫了連系，慢慢變成了一
種國際人，正和印度和猶太的intellectual走上了同一路徑。這種說法不能否... 阅读全帖 |
|
l*****o
发帖数: 19653 | 23 看看这篇文章吧（放狗搜的）：
http://www.economist.com/node/21548151
QUANTUM effects are vital to modern electronics. They can also be a damnable
nuisance. Make a transistor too small, for example, and electrons within it
can simply vanish from one place and reappear in another because their
location is quantumly indeterminate. Currents thus leak away, and signals
are degraded.
Other people, though, see opportunity instead. Some of the weird things that
go on at the quantum scale afford the possibility of doin... 阅读全帖 |
|
g******i
发帖数: 581 | 24 杨振宁 国立西南联合大学-学士(1942),硕士(1944)
1957年以中华民国公民身份获得诺贝尔物理学奖，1986年获美国国家科学奖章，1993年
获本杰明.富兰克林奖章，1995年获 爱因斯坦奖章，与李政道提出弱相互作用中宇称不
守恒.与罗伯特·米尔斯一道提出了杨-米尔斯理论，即非阿贝尔规范理论，对基础物理
学产生了深远的影响，是粒子物理学的标准模型的基础
李政道 国立浙江大学物理系/国立西南联合大学-学士 芝加哥大学博士
1957年以中华民国公民身份与杨振宁以弱作用下宇称不守恒的的发现获得诺贝尔物理学奖
吴健雄 国立中央大学数学/物理学士，先后在国立浙江大学,中央研究院物理研究所工
作美国国家科学院院士 美国国家科学奖章获得者，沃尔夫奖获得者，曾任美国物理学
会会长
1957年验证杨振宁李政道的“弱相互作用下的宇称不守恒”，1963年实验证明“β 衰
变在矢量流守恒定律”
在制造原子弹的“曼哈顿计划”中解决了链式反应无法延续的重大难题
被美国物理学会宣布为最伟大的实验物理学家之一
Madam Wu is arguably the most admired female sci... 阅读全帖 |
|
n**e
发帖数: 2026 | 25 今年初，美国科学促进会（AAAS）和皮尤研究中心（Pew Research Center）联合公布
的一项调查显示，88％的科学家认为转基因食品可安全食用，持这一看法的公众只有37
％。报告认为差距如此之大的一个可能原因是，三分之二的公众认为科学家对转基因食
品的健康后果没有清晰认识。这就是真正的原因吗？
根据报告全文，皮尤中心给19，984名科学家发出了调查问卷，3748人（18.8%）完成了
问卷调查。其中生物医学学科背景的科学家占50%。报告没有说明50%的生物医学背景是
否能够代表科学家总体的学科构成。更大问题是在这50%的科学家人群中，有多少人的
工作是与转基因作物的研究有关，以什么样的方式相关。报告没有提供任何信息。
由于这些关键信息缺失，88%的科学家相信转基因安全的说法毫无意义。在一个没有代
表性并且无法排除偏向性的样本中调查，科学家相信转基因安全从1%到99%与88%没有任
何不同。好消息是超过半数的美国民众认为转基因不安全。
2012年10月，美国科学发展协会以官方名义（Board of Directors ）抛出了一个反对
转基因标识声明（附录1）。目的就是诱导民... 阅读全帖 |
|
b*s
发帖数: 82482 | 26 http://skyserver.sdss.org/dr1/en/proj/advanced/galaxies/spectra
When you look at the spectrum of a galaxy, you are really looking at the
combination of spectra from the millions of stars in the galaxy. So studying
the features of a galaxy spectrum tells you about the types of stars the
galaxy contains, and the relative abundances of each type of star.
Galaxy spectra also clearly show you whether a galaxy contains star-forming
regions called HII regions. HII is a spectral emission line that corre... 阅读全帖 |
|
H********g
发帖数: 43926 | 27 说是太阳系里有个叫做Oort云的东西，就是彗星的云存储，里面无数的潜在彗星，而且
基本是包着太阳系的（跟行星们共面的地方密度高一些），所以理论上任何方向看到彗
星都是有可能的 。
The Oort cloud is thought to occupy a vast space from somewhere between 2,
000 and 5,000 AU (0.03 and 0.08 ly)[90] to as far as 50,000 AU (0.79 ly)[71]
from the Sun. Some estimates place the outer edge at between 100,000 and
200,000 AU (1.58 and 3.16 ly).[90] The region can be subdivided into a
spherical outer Oort cloud of 20,000–50,000 AU (0.32–0.79 ly), and a
doughnut-shaped inner Oort cloud of 2,000–20,... 阅读全帖 |
|
d*********2
发帖数: 48111 | 28 看见好多人讨论的样子。
我转贴一小段学术吧
April 22, 2005
Change of Direction: Do SO2 Emissions Lead to Warming?
Filed under: Climate Forcings —
Many scientists believe that sulfur dioxide emissions, either from un-
scrubbed power plants or from large-scale agricultural burning, serve to
cool the planet’s surface temperature.
The cooling mechanism is fairly straightforward. Sulfur dioxide is
transformed in the atmosphere into sulfate aerosol, a fine particle that
reflects away the sun’s radiation. The particles also... 阅读全帖 |
|
w********h
发帖数: 12367 | 29 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: abalone (hope), 信区: Returnee
标 题: Re: 忍心入美国籍吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 21 14:12:56 2011, 美东)
给你看一篇文章，也许对你有帮助
最终选择做中国人还是国际人只能follow your heart
个人以为多数自认为重要的选择最后都turns out mean nothing
反而是很多不经意的选择决定了人生的走向
读一九四七年黄昆给杨振宁的信，节选。
（人生态度的境界……）
……你說可能受了個人主義影響的話，使我想起B.C. 地質的王洪楨來Bristol時和我說
的話。他說我們中國的top intellectuals越來越和中國的根脫了連系，慢慢變成了一
種國際人，正和印度和猶太的intellectual走上了同一路徑。這種說法不能否認的正確
，很給我一個深刻的印象。同時他又說，他所最不能原諒的是，intellectual在國外打
起長久算盤的。他人很有正義感，見識也地道，所以他這樣說是衷心之語。但是事實卻
也不容否認，在英能久留的可能和... 阅读全帖 |
|
|
s*********a
发帖数: 801 | 31 看到后面的那个链接，终于明白你在说什么了。
我还以为你很专业呢，你怎么也不研究一下就人云亦云呀。
- 声明一下，不是我译的。不过，就算“心脏”错用在“aortic arch”，对全
文无伤大雅。
vagus nerve 到 aortic arch 那里分叉，分出一条recurrent laryngeal nerve，正好
在主气管的下端，由下往上，控制颈部肌肉。有什么问题吗？
你贴的那个文章一开头就错了，什么绕过心脏，明明是在主动脉那里分出的支神经，你
最好量量看有多长，再决定是不是绕了弯路，可别把vagas nerve也一块儿量进去了。
我估计你贴的文章里就把vagas nerve也当recurrent laryngeal nerve算了。
－ 有问题，recurrent laryngeal nerve 的 nucleus (nuclei) 在哪里？
superior laryngeal nerve 在哪里从 vagus nerve 分叉处来的？同是通向 larynx,
为什么一条直接连接，另外一条拐了一个弯？recurrent laryngeal nerve 是控制“颈
... 阅读全帖 |
|
z****n
发帖数: 777 | 32 2004年7月18日-19日，“2004年碰撞物理暑期讲习班”的第二阶段的讲座在中国科学技术
大学近代物理系继续举行。会议由中国科学技术大学近代物理系、STAR合作组联合主办，
得到了中国科学技术大学外事办公室、人事处的大力支持。会议由中国科学技术大学近代
物理系高能组组长伍健副教授主持，有感兴趣的师生30多人参加。
Iowa State University的邱建伟教授（777校友）做了关于‘Theoretical
Understanding of Small x Physics’和‘Coherent QCD Multiple Scattering in
Nuclei’的报告；
Lawrence Berkeley National
Laboratory的许怒研究员（772校友）作了关于：‘Energy Dependence of Collective
Flow ’和 ‘Hydrodynamic and Equation of State (EOS)’的报告；
清华大学物理系庄鹏飞教授关于‘Color SuperConductivity beyond Mean |
|
n*******e
发帖数: 27 | 33 they are basically the same. the principle of run-on is that you first
isolate the nuclei and remove most of the proteins, but still keep the
RNA polymerase associated with nascent transcribed target gene. then
when you add NTP and p32 labeled UTP, the TXN will run on and then all
the product will be labeled. it allows mapping of the start point from
the size fractionated products.
run-off means that TXN occurs to in vitro DNA fragments, which are
typically restricted fragments with the start si |
|
a***e
发帖数: 1010 | 34 no method is perfect clean.
if you don't care about recovery efficiency, u can reduce the time of first
NP-40 treatment to get clean cytoplasm, but increase the time of second NP-
40 treatment to get clean nuclei. |
|
a***e
发帖数: 1010 | 35 separate nuclei and cytoplasm by 0.5% NP-40/PBS for 5 min on ice. then
standard purification of RNA.
there are also kits for these, just google. |
|
p****p
发帖数: 3360 | 36 google is your friend.
breaks the cells and spin down the nuclei. Then extract these two fractions
with TriZol. |
|
h*****d
发帖数: 210 | 37 加蛋白probe是不一样的， it is smear, but there is not a single distinct
probe. Could have some reasons for this, first of all, probe denaturing and
annealing is not good, I bought oligonucleotide, because it is highly
purified. the free probe is also smear which is about half length of the
smear with protein.
secondly, when I extract nuclear protein, I just use 250M sucrose in the
extraction buffer for nuclei and no further gradient centrifuge thereafter.
High/low salt method for getting nuclear protein( |
|
n******u
发帖数: 418 | 38 在salt浓度高到一定程度的时候比如750mM，1mM，普通离心好像是不行的，paper上用
的都是
ultracentrifugation的方法，请问有没有可以避免用ultracentrifugation但又可以在
高盐浓
度的情况下把nucleoplasm和chromatin分离的方法呢？ |
|
M*****e
发帖数: 279 | 39 McKusick-Nathans Institute of Genetic Medicine > News and Events >
Newsletter Stories > 2010_12
Fertile Ground: What 2010 Nobel Laureate Robert Edwards Did On His Summer
Vacation (in 1965)
October 2010- In 1965, Robert Edwards spent six weeks at the Johns Hopkins
University School of Medicine working as a visiting fellow with Howard W.
Jones Jr., M.D., then head of the crytogenetics laboratory, trying to
fertilize human eggs in a laboratory test tube. They failed. Or so they
thought when they pu... 阅读全帖 |
|
s****z
发帖数: 50 | 40 Is histone mRNA equally distributed in nuclei and cytoplasm? |
|
s******y
发帖数: 220 | 41 做subcellular fractionation， nuclear fraction 好像没得到。
看文献说，lyse the nuclei with 10 passages through an 18-gauge needle.
这个是不是就是把lysate suspension load 到syringe 里面，然后推出来，再重新
load，反复来十次呢？
有什么要注意的吗？ 谢谢。
还有就是好像最初的tissue lysate 在centrifudge之前也要filter 来去除debris，
能同样的用这种syringe filter吗？needle
也是18 gauge吗？
因为我的量比较少，大概300-500ul把，有什么好的filter 方法请推荐一下，谢谢。 |
|
i**o
发帖数: 76 | 42 http://www.nature.com/nmeth/journal/v8/n4s/full/nmeth.1557.html
The method for the isolation of individual cells can vary. Picking single
cells manually using a mouth pipette is the most straightforward option30,
41, although this can be time-consuming and technically challenging. Laser-
assisted microdissection or fluorescence-activated cell sorting can also be
used to isolate a specific subpopulation of cells based on cell-surface
markers or fluorescent reporters42, 43, 44, 45. Cells of higher... 阅读全帖 |
|
c********r
发帖数: 189 | 43 Histone H3 不应该主要在nuclei里吗？为啥我做cell fractionation, 分离nuclear和
cytoplasmic fraction, 每次western blot里cytoplasmic fraction的histone H3 最
多。
cell fractionation的问题 还是抗体的问题，还是本来就是如此？郁闷啊。 |
|
c********r
发帖数: 189 | 44 Histone H3 不应该主要在nuclei里吗？为啥我做cell fractionation, 分离nuclear和
cytoplasmic fraction, 每次western blot里cytoplasmic fraction的histone H3 最
多。
cell fractionation的问题 还是抗体的问题，还是本来就是如此？郁闷啊。 |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 45 Please go to
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2518226/
>Overall, our results suggest that PUB22 and PUB23 coordinately control a
drought signaling pathway by ubiquitinating cytosolic RPN12a in Arabidopsis.
Subcellular Localization
The sGFP cDNA clone was fused in-frame to the 59 end of the full-length
PUB22 and PUB23 coding region and ligated into the pBI221 transient
expression vector. The sGFP-PUB22 and sGFP-PUB23 fusion constructs
were transformed into protoplasts prepared from wild-typ... 阅读全帖 |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 46 please go to
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch03.Cell%
20Fractionation.pdf
its 3. 8. 36 protocol:
ISOLATION OF ENDOPLASMIC RETICULUM USING SUCROSE STEP GRADIENTS |
|
b**********8
发帖数: 349 | 47 最近开始做这个实验，大概流程如下，RSB+0.5% NP-40 分离nuclei，然后用NEB 公司
的 DNase I （浓度分别为0,8,16,32,64,128 Units/ml）在37度切25min，加EDTA(
final conc 5mM)混合后75度10min终止反应，蛋白酶k 56度过夜消化，酚氯仿抽提。取
2ug 基因组DNA跑0.8% TBE 胶，理论上随着DNase I 酶量加大，应该能看到一个DNA逐
渐变碎的过程，可是我做了几次，都只看到一个很微弱的趋势，我现在有两个问题想请
教大家，
1）是否一定要在DNase I 处理后看到一个明显的基因组DNA变碎的趋势？
2）NEB网站上建议的DNase I处理完毕后需要加一定量的的EDTA，再75度10min，但是我
看别的文献里说EDTA是用来保护mRNA不受降解的，适用于做reverse transcription之
前去处RNA样品中残留的基因组DNA。我这个实验里需呀尽量除去RNA，是否可以不加
EDTA而直接做heat inactivation？
请大家帮助，谢谢 |
|
c********r
发帖数: 189 | 48
salt concentration is the ~300mM
cells were treated with hypotonic buffer with Triton 100.nuclei is separated
by low speed centrifugation. NH4SO4 were added to a final concentration of
300mM to precipitate the chromatin; then centrifuge to separate nuclear
protein from chromatin, save the supernatant.
add 1:1 3M NH4SO4 to precipitate the protein, and then dissolve protein
pellet with your IP buffer. |
|
c********r
发帖数: 189 | 49
cells were treated with hypotonic buffer with Triton 100.nuclei is separated
by low speed centrifugation. NH4SO4 were added to a final concentration of
300mM to precipitate the chromatin; then centrifuge to separate nuclear
protein from chromatin, save the supernatant.
add 1:1 3M NH4SO4 to precipitate the protein, and then dissolve protein
pellet with your IP buffer. |
|
c********b
发帖数: 363 | 50 我觉得你还是好好先做好western或者GFP观察，然后在FISU，那个比你做western难多
了。出现表型不是什么好事，应该是你agroinfiltration失败了。你看看这篇文章关于
agroinfiltration （Studying NB-LRR Immune Receptor Localization by
Agroinfiltration Transient Expression），里面提到了关于植物需要的适宜条件。
首先植物需要种在23－25度，打完植物需要放在22度左右光照12小时以上，持续光照有
利于表达。另外，这么大的蛋白不加P19几乎肯定不会表达。但是加P19的比例需要摸索
。菌种也很重要。如果你用GV3101或者C58C1应该没有问题。如果你用的LBA4404,那就
一般表达效率要低（在烟草中）。最好的是GV2260,我刚发帖去求了，我的一个HA
fusion蛋白也是表达很低（绝对不是抗体问题，positive control每次都work）。
你先找个postitive control，随便弄个GUS或者GFP来fuse一个HA都可以。你必须要有
posi... 阅读全帖 |
|
