c********l
发帖数: 39 | 1
）
香水：夏天 ck
其他季节versace or Armani
手表：夏天tissot钢带
其他季节oris or raymond weil 皮带
车：破破的三菱 |
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l*****g
发帖数: 49 | 2 I agree with wildThing's list on CS theory fields:
algorithms
computational complexity
logic/lamba calculus
Then, how much do you know? Can you give example-list on your so-called CS the
ories? I am glad to see them. :) |
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s****u
发帖数: 24 | 3 这样的经典还没有出现.不过有几个可以作为候选的:
INSIDE C# from M$Press
Programming C# from Ori.. |
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n******7
发帖数: 12463 | 4 【 以下文字转载自 Game 讨论区 】
发信人: nowhere7 (折腾), 信区: Game
标 题: 10个包子求解决child of light启动不能的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 22 05:32:53 2017, 美东)
刚玩了ori，正爽，看这个差不多就买了
steam买的
结果第一次遇到这么挫的游戏
玩不了，每次一启动过一会儿就windows出错，说child of light停止工作了
能试的都试了
重装steam，uplay，游戏本身
uplay装C盘，uplay装D盘
uplay用steam装，自己官网装
uplay offline，uplay直接启动，uplay xxx
管理员直接run 游戏.exe，各种兼容模式run
改游戏uplay setting.xml启动模式2->1
都不行
用X201试了一下，现装steam ，游戏，uplay，居然成了
但是fps=11...
系统windows10
显卡GTX950
发现网上有这个问题的一堆，爆了几年了，居然还是这样
也是服了
有个人去ubi官网报告
support上来就说，你CPU... 阅读全帖 |
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d*******r
发帖数: 3299 | 5 我居然看出了老赵的游戏宅情怀, 难得呀.
推荐你玩新出的 Ori and blind Forest, 不输 vanillaware 的胧村正.
不过现在手游就是分2类, 传统的 polished game, 和新兴的联网氪金游戏.
第2种因为简单粗暴(心眼坏, 就是奔着上瘾坑钱去的 :D ), 现在风头劲. 不过我觉得
第2种也会在保留其优点的前提下, 向第一种转化. 其实 Zlike 那个就是在做这种转化
尝试.
另外, 我不同意 WOW 不好, WOW 我虽然不太玩, 但也认为那确实是神作, 是集2种游戏优
势于一体的神作, 又是 polished game, 又上瘾坑钱. |
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B*******e
发帖数: 3882 | 6 I guest is ia virus or trojan. Search ur computer for this ntfs.exe
Windows 2000 or windows xp does not have ntfs.exe.
some info that may be related:
Trojan.Win32.Filecoder
Filecoder is a trojan program that renames and encrypts files into subdirect
ories of local and network drives. It is written in Delphi and compressed by
the UPX utility. The compressed size is 137 KB; the uncompressed size is 35
3 KB.
This virus program is sent via e-mail, proclaiming itself to be "a very usef
ul tool".
Inst |
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p*****n
发帖数: 981 | 7 ☆─────────────────────────────────────☆
iamabigpig (温暖企鹅) 于 (Fri Feb 2 16:49:49 2007) 提到:
Just constructed two new revised plasmids and found that the copy number for
one is really low in the cells. Any method to increase the copy number?
change the ori? Thanks!
☆─────────────────────────────────────☆
HENBEN (benben) 于 (Fri Feb 2 17:11:12 2007) 提到:
Use chloramphenicol. Check Molecular Cloning for details.
☆─────────────────────────────────────☆
iamabigpig (温暖企鹅) 于 (Fri Feb 2 17: |
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d*****r
发帖数: 2583 | 8 ☆─────────────────────────────────────☆
lanfang (yang) 于 (Tue Feb 17 23:22:23 2009) 提到:
新的NATURE文章会在下周出来, 表明NATURE EDITOR支持我的态度.关键时刻是同胞们在
帮助我(DEVELOPMENT上的中国FACULTY),非常感激.NIH ORI拒绝重新调查,有类似经历的
人告诉我可以上告到OGI.我明天就打电话.
☆─────────────────────────────────────☆
wsbioguy (postdog) 于 (Tue Feb 17 23:23:28 2009) 提到:
good!
support
☆─────────────────────────────────────☆
lanfang (yang) 于 (Tue Feb 17 23:32:15 2009) 提到:
NEW NATURE:
Jorgensen, H. F., Chen, Z.-F., Merkenschlager, M. and Fisher, A. |
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s******y
发帖数: 28562 | 9
有蛋白产生？ 非常疑惑 。
Most plasmid for transient expression will carry their own promoter upstream
of the expression codon.
DNA可以吗？
single strand DNA is degraded easily and practically not ideal for
transfection.
本不整合到细菌基因组的吧。我们摇菌用的细菌自己有自己的质粒对不对？
Yes. Most of them have their own replication origin site.
If you look at the vector map you will notice things like "F1 Ori". |
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r***e
发帖数: 2539 | 11 你是说带有sv40 ori的质粒能被T antigen复制吧
？ |
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s********n
发帖数: 2939 | 12 我没有去看那篇文章，只是他们的主要作者过来做报告听了一下，感觉还不错，大概有
以下几点：
1）他们是做Mycoplasma，主要是基因组小，大概0.5M，合成起来相对E. coli容易一些；
2）忘了是哪个species了，暂且称为A和B；
3）他们先在E. coli里合成A的基因组片段，但是好像不稳定，可能是重组吧；
4）然后改在yeast里合成，分段测序验证，最终得到完整的Mycoplasma A的genome（当
然带有yeast的ori和antibiotics resistance gene和一些其他的序列）；
5）把Mycoplasma B的genome去掉（一个很复杂的技术，反正我不太了解），将合成的
Mycoplasma A genome转入Mycoplasma B的细胞质内，培养所得到的杂合体；
6）经过多代培养后验证得到的细胞已经完全是Mycoplasma A自己的核糖体及其他的细
胞组成。
虽然还不能真正称得上artificial cells，但至少阐明了可能性和发展了一些关键的技
术，还是很有意思的。 |
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i*****i
发帖数: 154 | 13 包装入病毒的是3LTR和5LTR之间，含有packaging sequence的那一段，除此之外的序列
是不会包进病毒的，例如神马氨苄抗性基因，puc ori等东西。所以计算的时候要扣除
这些东西。整个质粒10kb，包装的RNA估计8K左右（去掉2k的零碎）。所以应该没有什
么问题。Open biosystem的pTripz shRNA的质粒有13K，照样包装。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 14 这个真不知道。不过BL21(DE)3的rossetta系列都有额外的tRNA,在一个p15 ori的低拷
贝质粒里，名字一般为pRARE或者pRARE2. |
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j****x
发帖数: 1704 | 16 不同质粒之间会有不相容性，同一个质粒上应该没啥问题吧，而且用的都是同一套复制
系统。。。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 19 Thanks, Dengy and huiee. |
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f**u
发帖数: 346 | 20 我记得好象细菌染色体上是不能有两个origin的，
很奇怪为什么质粒就没问题，有人知道为什么吗？ |
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g********0
发帖数: 6201 | 21 retractionwatch.wordpress.com/2011/08/09/two-papers-to-be-retracted-after-ori-finds-misconduct-by-boston-university-cancer-researcher/ |
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S******l
发帖数: 14311 | 22 这么底端的paper也作假？太不值了，至少在CNS上吧？
ori-finds-misconduct-by-boston-university-cancer-researcher/ |
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c**i
发帖数: 6973 | 23 Dennis Normile, Where to Locate Taiwan? Chinese Co-Authors Disagree. Science
, Aug 12, 2011
http://news.sciencemag.org/scienceinsider
/2011/08/where-to-locate-taiwan-chinese-c.html?ref=hp
Note:
(a) Yi RAO 饶 毅
(b) Ann-Shyn CHIANG 江 安世
Lou-Chuang LEE, minister of Taiwan's National Science Council 行政院國家科
學委員會主任委員 李 羅權
Cheng-Hong CHEN 陳 正宏
-----------------------------Separately
Sheng WANG. Office of Research Integrity,US Department of Health and Human
Services, Aug 5, 2011
http://ori.hhs.gov/... 阅读全帖 |
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e***o
发帖数: 344 | 24 问个很土的问题，转染时，带有一种ori的质粒只会有一个copy在一个细菌里。也就是
plasmid incompatibility。google了一下，好象没有得到很专业的回答。大家有清楚
这个的吗？ 谢谢！ |
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y****6
发帖数: 196 | 27 Want to try this?
Oris™ Cell Migration Assay |
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y*********u
发帖数: 183 | 28 请教大拿一个问题
手上有一个30k大的BAC transgenic plasmid
构建时想过可以在culturing cell上试验，于是引入了一个SV40 replication Ori
目前刚拿到plasmid，准备表达，请教一下用哪个转染试剂比较好？
听说Lipofectamin LTX行？ |
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F*Q
发帖数: 3259 | 30 The director of the ORI once told me it is safe to do so if you generate
your own data. You will be in trouble if you just publish the data generated
in your former boss' lab. |
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b********s
发帖数: 9 | 31 怎么觉得3LTR的方向放反了？
如果3LTR没有问题的话，有可能是细菌的ori的作用。 |
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b********s
发帖数: 9 | 32 记得以前看到过文章中说细菌ori整合到真核染色体上会导致染色体不稳定而丢失。再
具体就不知道了，我也不是做这行的，仅仅提供一个思路而已。 |
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B******o
发帖数: 496 | 33 The vector does look weird. First, what is the promoter for the viral
expression. Usually, if it is MMLV, then the promoter is contained in 5'LTR,
so the viral genome is transcribed from there. Otherwise, people will put a
CMV in front of 5'LTR to express it. Without a promoter, the viral genome
will not be expressed and packaged into virus particles.
Second, I never saw anybody inserted Ori within a viral genome. It is very
weired. Not sure how it will affect your gene expression.
Third, poly A... 阅读全帖 |
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H*******i
发帖数: 196 | 34 各种方法都有优缺点，合理使用才是关键
如果要构建大量同系列克隆，酶切连接自然有优势（至少不用成天买primer），而且在
最后成环一步，酶切连接也是最robust的方法之一（有时二级结构对Gibson/Slic有点
影响，尤其是一律50°C的反应，基于PCR和recombination的问题就更多了。） Scar
只要用overlapping PCR解决就是了。
当然完全构建一个全新的，一次性的需要大量不同片段的东西，自然Gibson assembly
类方法有优势（做特别大的片段也有优势）
Gibson得话 T5 exonuclease https://www.neb.com/products/m0363-t5-exonuclease
Taq ligase https://www.neb.com/products/m0208-taq-dna-ligase
加上polymerase
就两三刀吧。
Slic一样片段，只用T4 DNApolymerase，两片段效率大概低两个数量级。
另外LZ你需不需要额外纯化是根据你片段性质来得，你7kb的是啥？ insert得话必须
纯化，无论什么... 阅读全帖 |
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H*******i
发帖数: 196 | 35 举个例子，如果你构建一大堆东西结构都是类似的，并且你需要尝试不同的组合
part1=Ori+resistance part2=upelements&promoter part3=rbs part4=cds
如果用gibson，要么使用一段长的共同序列作为连接部分，否则任意两个的组合都需要
一个引物，如果使用酶切连接，只需要在分割位点给一个scar就可以了（如果需要
seamless，可以使用BsaI类的酶）
至于我选用restriction enzyme，如果确定了，就会一直用下去，只是为了标准化构建
，不会去考虑cds里面有没有这种问题的（有就突变掉，如果因为有就要换酶那么当然
不如Gibson/CPEC类的策略） |
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r******a
发帖数: 285 | 36 talk to your institute ORI |
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F*Q
发帖数: 3259 | 37 Nobody that really has influence would care. The ORI is just a fig leaf of
the broken academic system. |
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j****x
发帖数: 1704 | 38 plasmid在非分裂期通过NPC入核当然是可能的，但是需要特定的DNA序列支持，比如
SV40 ori或者NLS bingding sequence的存在，importin介导的质粒入核不是无条件的
，这点已经非常明确了。真核表达质粒往往都会包含这些sequence element,所以会让
人产生错觉，觉得是理所应当的，其实不然。
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j****x
发帖数: 1704 | 39 前面提到过几次了，质粒上带有的SV40 ori就可以介导入核，或者带有NLS binding
seq也可以。
外事不决问google |
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l**********1
发帖数: 5204 | 40 Pls check,
>This underlines the importance of identifying the presence and
understanding the function of these antisense non-coding RNAs. The
information concerning strand ori-gin is often lost during conventional RNA-
Seq; capturing this information would substantially increase the worth of
any RNA-Seq experiment. By manipulating the input cDNA during the template
preparation stage it is possible to retain this vital information. This
forms the basis of strand-specific RNA-Seq. With an ability ... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 2939 | 41 ethidium bromide plasmid curing |
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j****n
发帖数: 3370 | 42 Serial culture in antibiotic free medium
Spread to antibiotic free plate
Replicate the plate to both antibiotic containing and antibiotic free plates
Pick up the desired clones
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7 |
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M******g
发帖数: 152 | 43 you can use coumermycin to cure too. google search "coumermycin curing"
you will find some reference. |
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s********r
发帖数: 312 | 45 随便什么backbone都可以，越简单越小越好，最好就是只有ori跟amp这样的 |
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h**********r
发帖数: 671 | 47 大家常用的表达蛋白的 E. coli Rosetta(DE3) 系列，氯霉素就是维持P15 ori的质粒
的，这个质粒上装了一些稀有的tRNA。没钱搞基因合成的，可以把这个装到自己感兴趣
的宿主菌里面，可能有助于基因表达。 |
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T*****e
发帖数: 247 | 48 从manual里面copy过来的：
Bovine growth hormone (BGH) polyadenylation signal
Efficient transcription termination and polyadenylation of mRNA (Goodwin and
Rottman, 1992)
这应该是3'UTR吧，正常就是3'UTR后面
肯定在neomycin和它的SV40启动子前面，也跟f1 ori没啥关系
所以就在bgh signal的后面 |
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j****n
发帖数: 3370 | 49 没有 yeast可以一起转几个plasmids 虽然ori都相同 |
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