H****S
发帖数: 40 | 1 我自己的实验中取liver先要用perfuse PBS, 然后perfuse 4% PFA,再取下liver泡进4%
PFA过夜。不perfuse的话，liver里面的血对后续的immunohistology有很大的影响。 |
|
b******s
发帖数: 1089 | 2 现在通常用的固定基本只有PFA和glut两种。
前者是可逆交联，并且在组织内移动速度快。后者铰链度更大，并且不可逆，固定得更
好。但是移动速度更慢。而且对抗体保存不够好。现在一般采用混合固定，4%PFA加0.5
%的glut。
如果是大的组织，先初步固定之后，再slice成小块继续固定。
如果是免疫荧光，glut的浓度应当低于0.5% |
|
H****S
发帖数: 40 | 3 4% PFA at 4 degree overnight.次日将tissue多次冲洗后，可以保存在4 degree一段
时间，或者直接切片（我用agar固定，然后自己切，厚度在45 um左右）。多次冲洗后
，切片时残余的PFA不会那么熏眼睛。 |
|
v***a
发帖数: 1242 | 4 以前只做过一般的dual-labeled 荧光显微镜，包括tissue和培养的细胞染色。请教如
果现用confocal，有什么不一样的地方需要注意吗，可以不改动protocol直接去看否？
比如细胞染色，我一般是用no.1的coverslip养在上面，现在看到paper里有人做
confocal用的是membrane inserts养细胞，还有的人是用的no.1.5的converslip。这些
都该如何选择比较好？fixative的选择有什么注意吗，我一般都不用Paraformaldehyde
，但paper里几乎清一色都是，而且是用ice-cold PFA fix几个小时。可以用RT PFA来
fix比较短的时间吗？
谢谢！ |
|
b******s
发帖数: 1089 | 5 固定剂的选择应当跟你的实验目的结合。methonal会使得蛋白变性而PFA只是可逆性得
交联蛋白。GFP变性了当然就看不到荧光了。用抗体应该还是可以看到荧光的，但是作
为细胞内蛋白的定位，还是应当用PFA。methonal对整个细胞的extraction太大，而且
会使核酸和蛋白发生聚集沉淀。
可能会有artifacts。所以ethonal和methonal只适用于组织形态学的实验。 |
|
f*****f
发帖数: 195 | 6 我倒没有直接在显微镜下看PFA影响，不过一般PFA 固定后用PBS洗后直接封片或IF标记
其它蛋白，荧光倒很正常 |
|
h*****4
发帖数: 36 | 7 4%PFA 会严重削弱YFP的荧光信号 听说用2%的PFA或许会好很多。不知能不能尝试一下
看看。 |
|
m**h
发帖数: 381 | 8 非常感谢!请问这个固定化是不是用PFA fix?如果是,那么固定化会不会影响蛋白的活性
和结构?还有,如果protein是在溶液中,是不是也可以fix?
不好意思,没有这方面的经验,如果你说的固定化不是PFA fix,可否详细一点说一下怎么
固定化溶液中的蛋白?谢谢了! |
|
z****u
发帖数: 1007 | 9 leaky 是组织细胞腐败降解了。 跟冻融没关系。单次的组织冻融不影响，比如-20度保
存很久的老鼠解冻后再固定也没啥问题。 leaky一旦发生就没法解救了，sample只有
扔掉。所以我的sample都是杀死后立马扔PFA. 一般来说GFP或者TdTomato 都不会被PFA
灭掉。 实在灭掉了那就上Ab . 很多公司都有很好的GFP antibody.很特异，很强。
组织一旦固定了就不用担心leakage 了。 |
|
b*******0
发帖数: 48 | 10 最近在做小鼠大脑切片的immunohistochemistry, 大脑是先心脏灌注PFA, 1:1 PFA :
sucrose 过夜，30% sucrose 3h.
OCT embedding. 然后cryostat 切片10um. 想染的蛋白主要是在cytoplasm。 先室温干
燥，然后extraction buffer 10 min, block 30min, Primary Ab 4oC ON. wash.
Secondary Ab . 试过Cy5 anti-rabbit, Alexa fluor 350 anti-rabbit. 好像都没有
荧光。
请问是Primary ab 浓度太低了，还是extraction buffer 不够啊。
谢谢。 |
|
f*******a
发帖数: 671 | 11 Flushing out the spinal cord using a needle does not work for PFA fixed
tissue, but if it is fresh tissue, it works very well.
If it is PFA fixed, perform a laminectomy from sacral to cervical spinal
cord. You need to have a very fine scissor. Just remove all the lamina with
its muscle as a whole. The whole procedure takes only 1~2 minute.
Sorry that I can not type Chinese here and my English is hard to understand. |
|
a*****i
发帖数: 4391 | 12 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
【 原文由 tingtone 所发表 】
我有一个在voa作记者的朋友，他到过美国几乎每个州，和无数见多识广的人聊国。见过
无数的case,没有一起官司，Chinese husband can win. 美国的司法对man, 特别是asia
man 有严重歧视
有一奇官司，女方违反法庭协定，不支服 child support, ex-husband 还是输了官司。
you can just check Kobe's case and 贺's case. 贺被控强奸，历经4年，丢了奖学金
，差点被赶出美国，有无数人帮，有免费的律师，最后才判定无罪。而女方，一点事也没
有。
在美国，老婆和你的女友，可以随时申请PFA,赶你出家门，她们有免费的律师，你没有。
申请PFA无需任何证据，无需任何物理伤害证据。
TAKE CARE, every man in here
乎
方
.
我想戴和曹两人,都是这件案子的牺牲者.婚姻需要两个人的经营,经营不好就会出问题,特
里
就
,
性
话 |
|
l*w
发帖数: 567 | 13 最近碰到的一个问题，估计做过冷冻切片的人都碰到过。
希望有大侠探讨一下啊。
就是鼠脑冷冻切片后经常有气泡trapped在里面。
光学显微镜下看，有气泡的地方呈暗色。
My procedure is as follows:
Perfusion: 1x PBS 3 min, 4% PFA 3min.
Fixation: 4% PFA overnight
Sucrose: 30% sucrose until samples sink. Normally 16 to 24 hours.
Embedding: OCT on dry ice.
Sectioning: -18 C with Leica cryostat machine.
有哪位大侠指点一二？先谢了。 |
|
s*****r
发帖数: 43070 | 14 【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: skiiwalker (Skiing), 信区: SanFrancisco
标 题: 斯坦福出了国人投毒事件
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 2 05:13:15 2015, 美东)
http://www.straitstimes.com/news/singapore/courts-crime/story/r
投毒者：Ouyang Xiangyu 新加坡籍，大陆出生 受害人： Xing Liujing，Zhao Ludan
“
In September, when graduate student Xing Liujing drank from her water bottle
, she felt an immediate burning sensation in her throat and mouth. She also
noticed that the water in her bottle smelt like PFA, a chemical the lab
researchers wer... 阅读全帖 |
|
|
f******1
发帖数: 727 | 16 【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 斯坦福那个投毒的其实只是生化实验室里面投毒的冰山一角
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Apr 14 21:50:56 2015, 美东)
那个学生脑子有问题，用PFA气味这么大的东西投毒，当然被发现，要是真的想害人，
肯定可以用一些无色无味无刺激，当时发现不了，几年后致癌的化合物，这些东西在生
化实验室里比比皆是。
投毒被抓的有这么多，其实没被抓到投毒成功的又不知几多，冰山水面下的部分是水上
部分的十倍，你看那些AP好多英年早逝得了癌症的，谁知道有多少是因为这个得的
呢。千老得癌症的也不少，只是没这么大影响力罢了。
刚进实验室的时候有个千老师兄叫我把杯子收好我还觉得他神经质，后来想想他应该就
是会给人投毒的那种人，所以以己度人会有防人之心罢。
今天哥刷试管的时候一直在想这个问题，明儿得把杯子锁起来了。 |
|
m****a
发帖数: 4032 | 17 美国华人传销也不少 什么如新 还有什么PFA金融 经常微信上骚扰你 |
|
T****t
发帖数: 11162 | 18 有象国内那种传销吗，把人关着，不让出来
: 美国华人传销也不少 什么如新 还有什么PFA金融 经常微信上骚扰你
|
|
o****p
发帖数: 9785 | 19 清华的人大多钻钱眼里，只要能赚钱什么都肯干，wfg啊pfa啊里头一堆清华的，可能作
为清华毕业的没有赚到大钱就会觉得丢脸吧。我欣赏浙大的，都很有灵气，很潇洒。我
不是浙大的，我们那时候基本没有谁家去外地读书，特别好的都被试点班弄去了。 |
|
P****i
发帖数: 12972 | 20 现在才出事，美帝也是搞笑。
Financial |
|
s*******u
发帖数: 1055 | 21 我吃惊的是这些人怎么刚刚才告。。。
Financial |
|
|
|
|
l******t
发帖数: 55733 | 25 叔刚登陆不久就被参加了一次WFG。没去过wfg的来的都是假美国 |
|
|
发帖数: 1 | 27 美国真的不管“华人圈子里的事”
就像唐人街食物安全问题，没人管一样？
[在 suzziechu (sssssssssssss) 的大作中提到：]
:我吃惊的是这些人怎么刚刚才告。。。
:Financial |
|
P****i
发帖数: 12972 | 28 这个全美性质的，不止华人搞。
当然，华人搞得很多就是了。 |
|
S*******l
发帖数: 4637 | 29 未必能告出结果。
美国这类公司很多，因为有产品，此处就是保险，所以法律上multi level marketing
不是金字塔scheme。 中文叫直销。
Mary Kay什么化妆品直销的都一样。
虽然本质上是老鼠会，上层收入主要来自于不停的新人加入。
类似的诉讼很多次了，这些公司依然存在。 |
|
发帖数: 1 | 30 Mary kay在国内都做成了传销似的
[在 StMicheal (archangel) 的大作中提到：]
:未必能告出结果。
:美国这类公司很多，因为有产品，此处就是保险，所以法律上multi level marketing
:不是金字塔scheme。 中文叫直销。
:Mary Kay什么化妆品直销的都一样。
:虽然本质上是老鼠会，上层收入主要来自于不停的新人加入。
:类似的诉讼很多次了，这些公司依然存在。 |
|
s*******u
发帖数: 1055 | 31 美国mary kay也是大量传销。。。
marketing |
|
|
S*******l
发帖数: 4637 | 33 还有个herbalife也很大。
但是搞笑的是multilevel marketing 在美国是合法的。 |
|
|
S*******l
发帖数: 4637 | 35 FTC Federal Trade Commission 说界定multilevel markeing是否合法关键看给上线提
成的钱是来自销售还是新成员缴的各种费。
所以，只要在卖产品，说提成来自于下线卖产品的钱，就合法。
所以，有志的将军可以去做，多发展下线在家躺着数票子。
这些公司的主要目标是stay at home moms。 |
|
|
f******1
发帖数: 727 | 37 【 以下文字转载自 Dreamer 讨论区 】
发信人: Dreamer (不要问我从哪里来), 信区: Dreamer
标 题: 斯坦福那个投毒的其实只是生化实验室里面投毒的冰山一角
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Apr 14 21:50:56 2015, 美东)
那个学生脑子有问题，用PFA气味这么大的东西投毒，当然被发现，要是真的想害人，
肯定可以用一些无色无味无刺激，当时发现不了，几年后致癌的化合物，这些东西在生
化实验室里比比皆是。
投毒被抓的有这么多，其实没被抓到投毒成功的又不知几多，冰山水面下的部分是水上
部分的十倍，你看那些AP好多英年早逝得了癌症的，谁知道有多少是因为这个得的
呢。千老得癌症的也不少，只是没这么大影响力罢了。
刚进实验室的时候有个千老师兄叫我把杯子收好我还觉得他神经质，后来想想他应该就
是会给人投毒的那种人，所以以己度人会有防人之心罢。
今天哥刷试管的时候一直在想这个问题，明儿得把杯子锁起来了。 |
|
|
l***2
发帖数: 486 | 39 前两天拿到口头OFFER （12个月CONTRACT，然后转PERM)，希望我6月中去工作。
今天得到一个不好消息，说我中国护照必须办一个Export License 才能去QUALCOMM工
作。
但我有EAD (L2 VISA）有效到2012年8月，以为可以为any emmployer工作。
但是他们说除了美国护照和绿卡的都还是要有export license,办下来要45天。
这个OFFER又等不了这么久，如果不能2周工作就收回。
请问大家去QUALCOMM工作的当时都申请了这个EXPORT LICENSE么？
谢谢！
I just got off the phone with the Vendor Management Office (VMO) at Qualcomm.
They tell me that since you are a citizen of China, they will need to get an
Export License
on your behalf before they can employ you as a consultant for Qu... 阅读全帖 |
|
l***2
发帖数: 486 | 40 前两天拿到口头OFFER （12个月CONTRACT，然后转PERM)，希望我6月中去工作。
今天得到一个不好消息，说我中国护照必须办一个Export License 才能去QUALCOMM工
作。
但我有EAD (L2 VISA）有效到2012年8月，以为可以为any emmployer工作。
但是他们说除了美国护照和绿卡的都还是要有export license,办下来要45天。
这个OFFER又等不了这么久，如果不能2周工作就收回。
请问大家去QUALCOMM工作的当时都申请了这个EXPORT LICENSE么？
谢谢！
I just got off the phone with the Vendor Management Office (VMO) at Qualcomm.
They tell me that since you are a citizen of China, they will need to get an
Export License
on your behalf before they can employ you as a consultant for Qu... 阅读全帖 |
|
G******i
发帖数: 5226 | 41 ☆─────────────────────────────────────☆
lea82 (Lea) 于 (Wed Jun 1 18:47:17 2011, 美东) 提到:
前两天拿到口头OFFER （12个月CONTRACT，然后转PERM)，希望我6月中去工作。
今天得到一个不好消息，说我中国护照必须办一个Export License 才能去QUALCOMM工
作。
但我有EAD (L2 VISA）有效到2012年8月，以为可以为any emmployer工作。
但是他们说除了美国护照和绿卡的都还是要有export license,办下来要45天。
这个OFFER又等不了这么久，如果不能2周工作就收回。
请问大家去QUALCOMM工作的当时都申请了这个EXPORT LICENSE么？
谢谢！
I just got off the phone with the Vendor Management Office (VMO) at Qualcomm.
They tell me that since you are a citizen of China, they will ... 阅读全帖 |
|
a**********6
发帖数: 1 | 42 金融理财公司正在扩大，急需3名产品经纪人， Part time or Full time. 兼职月薪可
达$3000-$5000, 全职月薪面谈。
要求如下：
1. 必须是美国绿卡或是公民
2. 有销售经验最佳，没有也无妨，我们提供培训机会
3. 年龄需在21岁以上
4. 能讲流利的国语或者粤语，英文至少能听能说
电话：4156026342
Email: [email protected]
/* */
Job Title
Financial Investment Associates
We are the number one financial broker nationwide in full living benefits
now looking for potential candidates who are open minded and self-motivated
to work with us due to the rapid business growth.
Job description;
Part time or Full Time
Requir... 阅读全帖 |
|
k***u
发帖数: 15 | 43 一张文凭用一辈子，一个单位呆一辈子，开个门面就赚钱的时代过去了……思想有多远
，就能走多远，不去改变脑袋，不去更新知识，就无法改变口袋…
30年前说下海能赚钱的人，被认为是骗子。20年前说炒股能赚钱的人，被认为是骗子。
15年前说保险能帮到大家的，被认为是骗子。10年前马云说互联网能改变人们的生活，
也被认为是骗子。
那些说别人是骗子的人，生活一成不変，生活质量一天比一天差！而那些当年所谓的
“骗子”却成了时代的标志！
每一次新的机遇的到来，都会造就一批富翁！当别人不明白的时候，他明白他在做什
么；当别人不理解的时候，他理解他在做什么；当别人明白了，他富有了；当别人理解
了，他成功了。
PFA, 颠覆美国金融界的一匹黑马，你跟上了吗？
欲了解详情，请电话：415-816-4378 或加微信：ken9516 |
|
k***u
发帖数: 15 | 44 一张文凭用一辈子，一个单位呆一辈子，开个门面就赚钱的时代过去了……思想有多远
，就能走多远，不去改变脑袋，不去更新知识，就无法改变口袋…
30年前说下海能赚钱的人，被认为是骗子。20年前说炒股能赚钱的人，被认为是骗子。
15年前说保险能帮到大家的，被认为是骗子。10年前马云说互联网能改变人们的生活，
也被认为是骗子。
那些说别人是骗子的人，生活一成不変，生活质量一天比一天差！而那些当年所谓的
“骗子”却成了时代的标志！
每一次新的机遇的到来，都会造就一批富翁！当别人不明白的时候，他明白他在做什
么；当别人不理解的时候，他理解他在做什么；当别人明白了，他富有了；当别人理解
了，他成功了。...
PFA, 颠覆美国金融界的一匹黑马，你跟上了吗？
欲了解详情，请电话：415-816-4378 或加微信：ken9516 |
|
k***u
发帖数: 15 | 45 人生要做好三件事：第一，找对平台；第二，交对朋友
（交对团队）；第三，跟对贵人。选择比努力更重要。PFA金融理财火热招聘创业人士
，欲了解请电：415-816-4378 或加微信：ken9516 |
|
k***u
发帖数: 15 | 46 人生最大的成本，就是在错误的人际圈里，不知不觉耗尽一生，碌碌无为度过一生！
人生最大的喜悦，就是，遇见一盏灯，他点燃你的梦想，激活你的能量，照亮你的前程
，指引你走过黑暗的旅途。可以说，他和你彼此支撑，相互成就！
在您的人生道路上，您是否遇到了这样一盏灯吗？
全美金融业PFA公司快速发展，现招聘创业伙伴，欢迎有志者加盟，请私信！微信：
ken9516 |
|
k***u
发帖数: 15 | 47 人生最大的成本，就是在错误的人际圈里，不知不觉耗尽一生，碌碌无为度过一生！
人生最大的喜悦，就是，遇见一盏灯，他点燃你的梦想，激活你的能量，照亮你的前程
，指引你走过黑暗的旅途。可以说，他和你彼此支撑，相互成就！
在您的人生道路上，您是否遇到了这样一盏灯吗？
全美金融业PFA公司快速发展，现招聘创业伙伴，欢迎有志者加盟，请私信！微信：
ken9516 或电话:415-816-4378 |
|
r*******g
发帖数: 32828 | 48 2、 购房政策： +Y
I/(ko=
LF Z%y)F
1） 对于已经在亚迪村购房的A/B级领导，可以在亚迪二村购置第二套房，但须以市
场价购买。 dNUi|IYm$
bd
5\t
2） 夫妻双方均在公司工作的，不能同时拥有两套公司住房；如果因其他原因，有两
套住房的，须将其中一套按照市场价补差价给公司以获得继续拥有该住房的资格，或者
退给公司，具体由人力资源处负责拟定。 .Wc<(pfa
xVf AlN37(
3） 夫妻双方均在公司工作的，如果其中一方离开公司的，另外一方需在G级（含）
以上的，方有资格继续保留该住房，并需要走流程，由离开员工所在事业部领导审批方
可。 &'ZU"_
Fw)#[
4） 由于住房资源有限，且公司的住房主要是为了留住人才，故对于12年合约期内离
开公司的员工，须将该住房退给公司。 |
|
M*****8
发帖数: 17722 | 49 股票符号 日期 最后价 跌幅 百分比
AAR, 20110520, 24.4999, -0.1624, -0.7
AAUKY, 20110520, 23.8300, -0.0513, -0.2
AAWW, 20110520, 63.9700, -1.4313, -2.2
AAXJ, 20110520, 62.6625, -0.3633, -0.6
AB, 20110520, 21.5300, -0.0545, -0.3
ABAX, 20110520, 30.8500, -1.4335, -4.6
ABB, 20110520, 26.3200, -0.0229, -0.1
ABCO, 20110520, 50.9300, -0.4103, -0.8
ABFS, 20110520, 25.3500, -0.7916, -3.1
ABW-A, 20110520, 25.2... 阅读全帖 |
|
|
