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c*********r
发帖数: 19468 | 2 你说的是105mm PGK吧，这个现在是优先性很低的项目，陆军都还没有列装，更别说特
战司令部了
AC-130J也没有列装PGK的消息，事实上它的105mm炮火控就是直瞄的
非要改成视距外武器技术上没问题，但完全没有这个必要，因为那个距离上就直接上
SDM和导弹了
即便用PGK，CEP只是20m量级，非要远程从空中轰榴弹炮纯属2B行为……
至于说特种部队参与到反装甲作战，不是不可以，但绝无可能作为特战武器的设计需求
，特例和常态你不要搞混掉了…… |
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c*********r
发帖数: 19468 | 3 只能杀伤炮兵，不能保证摧毁硬件吧，不过这样也可以瘫痪对方炮兵了
问题是象神剑这样的制导弹药，即使不用底排，射程也能达到24km，精度5米
而这个距离上，普通炮弹的精度就要接近200米了
其实对于打击炮兵阵地这种任务使用低成本的PGK就可以了
改装每枚炮弹只需要一个$3000的PGK引导头，精度就能达到30米 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 4 认为精确弹药一定贵是没有道理的
比方，射击25+km的目标，你用传统的增程弹精度只有150-200米
但是用PGK，第一阶段就能达到50米了，第二阶段会提高到30米
但一个PGK套件只要$3000而已，你省下的弹药都多少钱了？ |
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c*********r
发帖数: 19468 | 5 不需要太久的时间，排雷这样的工作都是无人车来完成了
然后无人机负责战场监视，攻击型无人车掩护，同时向高地投放一批无人传感器
高地上的敌军如果先开火，那也就暴露了
炮营向每个火力点发射两发PGK即可解决问题
其实都不用炮营支援，两个步兵连就有4门120迫了
发射MGK（类似155榴的PGK）足以压制敌方火力了
这个更快，都不用经过营指挥中心，敌人火力点一经暴露，清除也就是分分钟的事 |
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f*******a
发帖数: 671 | 6 不好意思我是克隆白痴。这个vector上面是不是没有PGK promoter? 否则为什么只标注
PGK primer?为什么要这么设计？
直接用这个vector能表达Cre吗？谢谢！
链接如下。
http://www.addgene.org/20781/ |
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n****3
发帖数: 543 | 7 想利用polyA trap 做基因打靶：long arm-PGK-neo-ires-EGFPFlpe-SD-short arm ，
target 细胞以前整合有Frt-stop-Frt RFP表达盒，平时不表达RFP. 如果转染FLPE表达
质粒，可以切掉stop片段而表达红色萤光。现在想利用polyA trap打靶方法将PGK-neo-
ires-EGFPFlpe－SD片段knockin到目的基因的内含子内. 如果打靶成功，该细胞将可以
表达双荧光，我想尽量减少我筛选打靶事件的工作
转入的片段尽管没有polyA,但启动子和融合蛋白的编码区是完整的，
questions: 那随机整合或瞬时转染会不会也能转录出mRNA(缺少polyA)？如能转录
，这个缺失polyA的mRNA会不会翻译出有功能的EGFPFlpe融合蛋白，并有可能激活红色
荧光蛋白的表达呢？ |
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s**d
发帖数: 18498 | 8 ft，炮弹密集度一般是射程的1/300，24公里就是80米。同时命中多发没有问题。连PGK
都算上了，离进入现役还早着呢。 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 9 一片阵地也是一门炮一门炮的组成的啊
每门炮一个点嘛
开火时可以一门炮盯一个点，如果用神剑，基本上每发炮弹就能清除一个点
如果用PGK，两轮齐射下来也就OK了吧 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 10 普通弹药哪有那么高
美军对M777项目的要求是25km上CEP不超过200米，目标值50米
实战中有200米就算不错了
PGK |
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s**d
发帖数: 18498 | 11 不要考虑PGK这种没进现役的东西。
每门炮那个点的坐标你怎么确定？ |
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c*********r
发帖数: 19468 | 12
各种传感器啊，小型无人机都装备到普通的步兵排了
btw，PGK预计今年就开始服役了 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 14 战术网络建立起来以后，测量对方炮兵阵地各门炮的坐标算什么难事吗？
连各个传感器获得的实时战场图像全都能随时上传到营指挥中心了
如果用30米精度的PGK，一轮齐射对方就瘫痪了，再一轮就不剩什么了 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 15 确实不一定非用制导炮弹，只不过制导炮弹会逐渐成为主力弹种
根据具体情况，也许还是会碰到目标精确的定位信息无法获得
必须使用传统的方法压制敌方的时候
但是这种作战方式恐怕会越来越少
毕竟类似PGK这样的弹药，只不过比普通弹药贵个三、五千刀而已
综合使用成本会比普通弹药还要低吧 |
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c*********r
发帖数: 19468 | 16 坦克当然也会用
我们谈论的本来就是不久的将来对不对？
不如我现在明确一下，我说的是Army Modernization计划改造的部队服役以后的事情
如果你非要强调现在，那连神剑都还没有大规模服役，PGK也还没有装备，那还有什么
说的 |
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p*********m
发帖数: 619 | 17 update:修好把车取回来了
换了一个叫作relay-mini的part $21，加上200多labor最后付款$240多
过程主要是
checked for crank signal at starter, signal is no present.
inspected starter fuse/relay, found after market relay with antenna.
inspected ignition keys and found after market anti theft system
replaced relay with known good relay. tested, vehicle started.
reinstalled after market relay and vehicle would not start
tech recommends remove after market anti theft system and replayce relay
removed and replaced starter relay.
不知道star... 阅读全帖 |
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B******o
发帖数: 496 | 18 pubmed上有不少啊。不过需要注意的是，你的lentiviral vector的promoter最好是EF1
或者PGK的，CMV之类的promoter在hES会被silence掉。所以如果你看到某篇文献用CMV
之类的vector然后讨论说MOI多少的时候效率有多高，基本是忽悠。据俺所致，比如像
su-chun zhang的lab用lentivirus还是需要有建立稳定细胞系的过程
另外，如果要enhance transduction, 除了polybrene，可以再加上spinoculation |
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z********i
发帖数: 610 | 19 没有接触过virus infection。
转染后24小时换液，24后收virus（2ml)，因为没有超速离心机，所以没法浓缩。测试
的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
然后用1ml/well virus 感染mouse ES cell（6 well)，发现根本没有GFP
pgk promoter，6 ug/ml polybrene
不知道那位大侠能给点意见？
谢了先 |
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r***e
发帖数: 2539 | 20 1. mouse cells are much more difficult to infect than human cells.
2. pgk promoter is very weak under microscope, check FACS. |
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B******o
发帖数: 496 | 21 你说的plasmid转染还是病毒感染？
lentivirus从感染细胞到整合到基因组到表达蛋白都需要时间
你能给个24时就能看的reference么？
俺先给俺的吧。System biosciences的protocol明确写了3天。Openbiosystems明确写
的2天。自己的经历也是至少2天。无论是CMV,PGK,or MMLV promoter。 |
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H*********8
发帖数: 323 | 22 用某个 基因 的启动子驱动cre ，用 的 是bac载体，转进一个报告 基因中，如果cre
work，报告 基因就转换颜色。用电穿
孔转这个bac，有对照组，用的商业性 的pgk启动子驱动cre，几乎80％以上 细胞颜色
转 过来 了。但bac里 转的 没有，这
个bac智力绝对没 问题。我怀疑电穿孔转bac效率太低，但用15kb的智力试电穿孔 的
效率能 达到25％多。我的 bac大概
250kb，大家 有 什么 好的 方法。做了1－2个月了，很郁闷。请赐教。 |
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C***Y
发帖数: 61 | 23 I am trying to generate cell line with inducible knockdown. I used Tet-pLKO
-puro, in which a puromycin resistant gene is placed downstream of pGK-TetR-
IRES. The problem I am having now is that the expression level of puromycin
resistant gene was so low that all the cells were killed by puromycin. I
heard that the single vector Tet-induicible system selling by Clontech is
not very good either. Have anyone found any system satisfactory?
Thanks. |
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h********n
发帖数: 4079 | 27 高人们能不能推荐一个lentiviral vector, 可以表达两个外来的gene, 比如
luciferase 和 Cre, 同时还能表达一个shRNA?
tyler jacks的那个 UbC.Luciferase.PGK.Cre 好用吗?
谢谢谢谢. |
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s******s
发帖数: 13035 | 28 pgk比较弱，或者ubiquitinC,这个更弱一点 |
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s******s
发帖数: 13035 | 29 换pgk吧。cmv这玩意儿虽然比较强，但是问题多多 |
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r***e
发帖数: 2539 | 30 除非你用的是特殊的integrate deficient的病毒，否则整合没什么问题。基本上就是转
进去的基因或shRNA对生长不利。最好报一下是什么细胞？
另外cmv没这么容易silence，除了es cell之类的。pgk表达量非常低。另外一种极端的
情况是，cmv受NFkB影响，如果你的基因能抑制NFkB。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 31 我说了，自己试验经验，除了es，有几个细胞系cmv也不行，当然也有
好用的时候，否则这个promoter也不会popular.
pgk一点也不低，算是中高的promoter，虽然比不上cmv，但是比大多数其他的强多了
是转 |
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r***e
发帖数: 2539 | 32 我用的不多，但是自己经验是pgk比cmv弱很多（只有10-20%）。
你说的大多数有哪些？我想了解一下，当然说的是通用promoter，不是tissue-specifi
c promoter。 |
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b******9
发帖数: 425 | 33 做了个construct，转primary newborn astrocytes，用hygromycin来筛选stable
transfection，可是一直都没有筛出来，细胞全都死光光了。转染效率还算可以，是电
转，有30%左右。hygromycin浓度也不算高，50ug/ml。
hygromycin是用TK promoter表达的，不知道是不是因为promoter不行。试了别人的一
个puromycin construct，是pGK promoter，也基本上死光了。想问一问版上牛人有没
有经验可以传授。多谢多谢！
另外我是用CMV promoter来表达我要的基因，先转细胞，然后筛选stable line打到老
鼠上。听说CMV promoter在体内可能会被shut down，是不是也应该换掉呢？谢谢！ |
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V******t
发帖数: 444 | 34 CMV promoter 在mESCs里面会沉默，对吧，比如mE14、J1，用CMV驱动表达是不行的。
但是我想用minimal MCMV promoter，前面接一个multimerized DNA binding sites，
后面表达mCherry，在ES细胞表达能结合DNA的转录因子，看mCherry。这个会有问题吗
？我的载体将会是
-DNA binding sites-minimal MCMV promoter-mCherry-PGK-puro-
如果不行。pGL4载体是用minimal Promoter，驱动luciferase，想问这个minimal
Promoter是啥？能用在mE14吗？可以用GFP换掉后面的luciferase吗，有这样的载体可
以分享／买的吗？最后得到一个这样萌萌哒的载体：
- DNA binding sites - minimal Promoter - mCherry - SV40 early enhancer/
promoter- hygro -
这个用在mE4没问题吧？
谢谢！ |
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V******t
发帖数: 444 | 35 找了一下午，也没找到。
希望是GFP／YFP等任何荧光蛋白，前面有minimal promoter 或者TATA box之类的，可
以再前边接自己想要的序列；后面有PGK之类的promoter驱动的neo／hygro／puro等任
何筛选标记。
求推荐，在线等，谢谢！！ |
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f*******e
发帖数: 354 | 36 不要用mscv，cmv这些常规retrovirus的promoter，很快会被silence，可以用plenti，
psin，phage等，ef1a, cag, pgk可以坚持一段时间，但是也存在被silence等现象.转
质粒总体比较困难，病毒是最高效的方法。在细胞传代的同时加lentivirus，
polybrene，然后spin半小时，效率会很高. rock inhibitor记得加，不然细胞会死光
光.病毒含血清的话几个小时后就可以换掉，如果要drug selection，过夜也没事，第
二天可以继续加rock inhibitor，浓度可以降到5um。
good luck！
: 非常感谢！我好好读下pMSCV retroviruses的manual。你觉得用pCDH是因为这些
: transgene被silenced吗？还是有其他的原因？非常非常感谢！
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Q**********r
发帖数: 214 | 37 我需要一些同时含有positive和negative selection marker的vector（比如PGK-neo+
tk)，哪些公司有这样的vector卖？
另外有能用在E coli上的这样的vector吗？ |
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