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h****k
发帖数: 182 | 2 请教一下化学系的同学。配制50mM Citrate buffer (pH3.0) 的时候，网上写的是按比
例混合 50mM citric acid monohydrate （C6H8O7•H2O FW=210.14) ,and 50mM
trisodium citrate dihydrate （C6H5O7Na3•2H2O FW=294.12) . 我想问如果不
按网上写的，从citric acid monohydrate开始配，然后再加酸HCl或者碱NaOH 调到pH3
.0 这样配出来的和网上写的是一样的吗？ |
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h*****o
发帖数: 240 | 3 谢谢各位
请给看看如下程序哪里有错？
为何不出线图？
data ar1;
u1=0.95;
u2=0.75;
u3=0.2;
u4=-0.9;
n = 15;
do h=0 to n by 1;
ph1 = u1^h;
ph2 = u2^h;
ph3 = u3^h;
ph4 = u4^h;
end;
run;
SYMBOL1 V=star C=red I=JOIN width= 1;
proc gplot data = ar1;
plot ph1*h;
plot ph2*h;
plot ph3*h;
plot ph4*h;
run; |
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发帖数: 1 | 5 早有科学研究证明，生男生女的决定因素是女子阴道的酸碱度。性生活频繁，碱性激增
必然导致生女娃的机率增加。
当年国内晚婚晚育独生子女政策下，未婚先孕和婚前同居是为社会所不齿的。大龄男女
新婚后尽兴尽欲的高频度性生活，造成女娃的比例大幅度高于男娃，这就是今天国内城
市剩女现象的致因。
生男生女是由男性决定的，所谓的两种不同的染色体。 携带男性染色体在碱性环境的
活性较高。因此相信阴道偏酸性会有较大的机率生女孩。这并是说偏酸性的环境就不会
生男孩，只是个相对几率的问题。
那么为什么说性生活频率高会导致阴道偏酸性？ 为什么阴道要弱酸性？ 正常情况下，
阴道内寄居着大量的微生物群，其中大部分是乳酸杆菌，乳酸杆菌也被誉为阴道卫士。
保持pH3.8-4.4的酸性环境，这种弱酸性环境可以抑制有害病菌的生长和吞噬外来细菌
。
精液的pH值为7.2—7.8。性生活频繁，为了保持阴道的弱酸性，身体就会对抗因精液导
致的pH升高。就会有过多的乳酸杆菌产生乳酸。这是人对抗外界的正常反应。结果会在
该怀孕的那天，阴道还是要对抗精液的高pH。当然会有过多的酸性物质分泌出。结果..
...。 |
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h**********t
发帖数: 545 | 6 你只是说不让新买的米不长虫不要被虫吃，又没有没说你要吃。也许是你让米不长虫是
为了收藏那些米呢？
另外，食品用谷物用溴甲烷熏蒸曾经是usda标准防虫措施，现在由于破坏臭氧层已经被
禁用了，改用ph3 |
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L*****i
发帖数: 237 | 7 甲型肝炎的预防和治疗（转载）
甲型肝炎是由通过感染甲型肝炎病毒(HAV)引起的急性肝脏炎症，主要经粪——口途径
传播，是我国常见的肠道传染病之一，在病毒性肝炎中发病率及感染率最高。
甲型病毒性肝炎（简称甲型肝炎）主要由粪--口（或肛--口），通过消化道传播的甲型
肝炎病毒（简称甲肝病毒）而得病。人体感染甲肝病毒后，通常约有1个月的潜伏期，
此时没有症状，之后可出现无其他原因可解释的发烧、乏力、食欲减退、恶心、呕吐和
皮肤发黄，有的病人有腹胀或腹泻，尿呈褐色，大便色浅，检查肝脏有肿大和触痛或叩
痛的体征。肝功能检查显示谷丙转氨酶（ALT）明显异常。患者血清甲肝抗体呈阳性或
滴度明显升高。症状轻重各异，轻症病程1－2周，重症可致数周或更长。
黄疸前期 起病急，有畏寒、发热、全身乏力、食欲不振、厌油、恶心、呕吐、腹痛、
肝区痛、腹泻，尿色逐渐加深，至呈浓茶状。少数病例以发热、头痛、上呼吸道症状等
为主要表现。本期持续1-21日，平均5-7日。
黄疸期 自觉症状可有所好转，发热减退，但尿色继续加深，巩膜、皮肤出现黄染，约
于2周内达高峰。可有大便颜色变浅、皮肤骚痒、心动过缓等梗阻性黄疸表现。肝... 阅读全帖 |
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g********e
发帖数: 4442 | 8 由于女性的排卵期各不相同，而性交时间又不一定，这就要求精子必须等待卵子的时间
，以增加相遇的机会。所以精子在女性生殖道内生存的时间长短与生育有重要关系。
1、精子在女性生殖道内存留时间：
阴道酸性分泌液平常为pH3.5～4。虽然理论上只要有一个活的精子就可以受精，但实际上
在阴道的酸性环境下，大部分精子进入阴道没多久就死光了，只有在一定量精液的缓冲下，才
有可能使极少数生命力强的精子存活的时间得以延长，获得进入子宫和受精的机会。
如果没有大量精子的牺牲，如果没有一定量的精液缓冲改善阴道里的酸碱环境，单独一个
精子或极少量的几个精子在阴道酸性环境里是不可能生存下来并受精的。
一般情况下，精子在阴道内的存活时间是：性交之后2小时，90%死亡；36小时，连死的也
看不见了。在孕妇的阴道内，酸度越强精子死亡越快。
2、精子在宫颈处的存留时间：
宫颈粘液酸碱度的变化，对精子的穿入有很大影响。pH小于6.5时，精子停止活动，pH7
时，有轻度穿入能力，pH7.5时，穿入能力正常，pH8。2时穿入能力更强。
在宫颈外口处有许多粘液阻塞，导致许多 |
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w********s
发帖数: 343 | 9 shorted bet. 1.53-1.56, now in down trend. no ph3 |
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o****n
发帖数: 281 | 10 同意LS
成功的非常显著的二期都有很大风险在Ph3 fail掉，这种<1的药谷不要碰。 |
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w**********s
发帖数: 1881 | 11 PH1 PH2 PH3 这是玩的什么 嘿嘿 没懂..... |
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c***c
发帖数: 6234 | 12 FT.不用知道，你是PH5呀，偏酸，当然是小酸了。要是PH3就是硝酸，硫酸和王水了，
我们该叫你强酸了，虽然你在游泳上就是个强酸。 |
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m****i
发帖数: 3416 | 13 另外，阿司匹林水溶液是偏酸性的(pH3左右）,在新水没有缓冲能力的情况下对pH的影
响是很大的，新水慎用 |
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b****d
发帖数: 6 | 15 按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，
0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，
pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度
（温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）
16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳【 在 allice (羊儿乖乖) 的大作中提到: 】 |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 抗原没有必要连到bead上。
除非你说的是纯化步骤或者下游其他应用。
但是对于单抗而言，根本不需要用抗原纯化
（因为细胞只产生一种抗体）
用普通的protein A/G bead 就可以了。
我们是用pH3.5 Tris-Glycine 洗下来的。 |
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b*******H
发帖数: 830 | 17 pH2.8 PLUS 1/20 V of pH9.4, or pH3.5 elution plus 1/10 V of pH8.5 could be
better. otherwise, sample going to be diluted too much.
remember doing it at RT, and no more than 15min.
equal |
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m*p
发帖数: 226 | 18 They did not say how long they pulse label the heart with BrdU. But, since
their data indicates the percentage
of BrdU positive cells is almost equal to Ki67 percentage, that means the
BrdU labeling time will be more than
24 hours. When you label an E14.5 hearts with Brdu for 24 hours, more than
half of the cardiomyoctyes will be
positive if you know how fast the embryonic cells proliferate in vivo,
however they only found about 20% cells
were positive.
Their Ki67 staining is not the right sta... 阅读全帖 |
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w*e
发帖数: 740 | 19 完全可能，因为用PH3只能捕捉到很少一部分增殖的细胞（刚好在很短的M期）
而BRDU可以连续注射，注射次数越多，你标记到进入S期的细胞就越多。 |
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f******s
发帖数: 288 | 20 关键是国内批的“新药”很多其实还是仿制药。按照法规的定义来讲，在中国境内生产
的药，只要该药还未在中国上市，走的就是“新药”渠道，这其中大多数是国外药物的
仿制药，所以说sfda要等fda批准了再批，从实际上讲是对的。但是这点并没有被写到
regulation里去，真的被写成白纸黑字的，只有对进口药（境外生产的药）的要求，比
如必须要提供fda出具的一个已批准证明，sfda才接受进口药的新药上市申请。
但是sfda批没批过真的的“新药”，也有，比如有些gene therapy 之类的就是sfda首
批的，当然，也要考虑当时sfda内部的政治环境和现在不一样。
现在谁都不愿意担责任是真的，他们好多圈内人是这么觉得的，但是现在的趋势还是好
的，比如加强了GMP要求，现在也有趋势准备向美国欧洲日本体制来学习。
不过，话说回来，咱们不是要八卦wxd的公司么，我觉得他们不会太轻易把自己弄成仿
制药厂吧，只要人家的政治关系过硬，自然还是有办法的。而且，其实如果他们要是就
是遵从美国这边的小biotech模式，基本到不了ph3，基本就会把产品卖出去的了吧。 |
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c********b
发帖数: 363 | 21 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
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c********b
发帖数: 363 | 22 不知道大家是怎么纯化抗体的，挂IgG的proein A柱子得到的肯定不纯。
如果是用antigen－affinity purification就会好很多。只是有时候那个his－tag还是
会干扰。一个师兄教我先用一个带HIS6的无关蛋白把non-specific的先去掉（比如
sunnyday最喜欢的actin就被我加了his6来干这事），然后再来做antigen－affinity。
如果是intein－tag提出来的这一步都可以省掉，只是intein得到的蛋白量好像没有his
－tag提出来的多。
要提到的是这个protocol在我手上得到的抗体浓度很低，我一般用1：100稀释，但是很
特异。还有就是不太适用于IP。
这个方法不用挂柱子，跑SDS－PAGE，直接转到膜上，block之后先把血清和actin－
his6（in my case）的膜放2hr，然后上清拿出来和block过的antigen的膜泡2hr，
Wash with 1XTBS（contains 0.02％ sodium azide) twice, 10 min each，Elute
with glycine（pH3）... 阅读全帖 |
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T****u
发帖数: 424 | 23 RT-PCR 结果的计算方法
未名 三楼楼长 03-25-2011
RT-PCR 技术已经推广了有些年头。但从众多已发表的文章中不难看出，很多试验
者的计算多多少少都存在问题。甚至，有些介绍算法的文章都存在明显的错误。因
此，有必要对试验人员讲解计算方法。这样不仅可以尽可能避免计算错误，也能更
好地理解RT-PCR 原理。以下讲解只针对单色RT-PCR，也就是说，在任意一个
well 里，只能用一对primers 检测一个样品。
一、RT-PCR 到底要测什么？
RT-PCR（这里，RT 指 real-time。区别于rt：逆转录）是量化基因表达的一种方
法。如果说western blot 是针对蛋白水平，RT-PCR 就是针对mRNA 水平。
基因表达在蛋白水平上，已经经过了多个数量级的放大。或者说一个mRNA 模板
分子可以翻译出无数蛋白分子。所以，蛋白可以很容易地用抗体探测到。但
mRNA 数目太少，直接用探针检测有困难。所以必须要人为放大扩增才能检测
到。这就是PCR 的目的。
不管是先做逆转录得cDNA，再做PCR，还是逆转录+PCR 一气呵成，RT-PCR 归
根结底是以m... 阅读全帖 |
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j*****4
发帖数: 189 | 24 实验中要用到PH3。请问大家知道去哪里购买好吗？在http://www.praxair.com上询价，需要近1万美元一瓶。sigma-aldrich上10g也要1000美元。不知道有没有更便宜的。
另外如果购买，实验室自制的话不知是否安全，多谢！ |
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l**j
发帖数: 651 | 25 pH 差不多
ionic strength可能不一样 不在乎ionic strength的无所谓
50mM
pH3 |
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y*****s
发帖数: 1047 | 26 no matter how you mix 50 mM citric acid and 50 mM trisodium citrate, you
have a 50 mM citrate buffer at a certain pH at the end
if you mix 50 mM citric acid and HCl or NaOH, you will have a < 50 mM
citrate buffer with some NaCl at the end depending on the ratio between you
final and initial volumes
50mM
pH3 |
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h******o
发帖数: 976 | 28 幽门梗阻会代碱，为什么血液会偏酸呢？比如blood pH3.0了~ |
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s*****l
发帖数: 1844 | 29 Heard almost set for this year. Not sure about next year. Merck made a
mistake to buy SP, with several Ph3 drugs died, and the approved Boceprevir
facts a lot of competition and means nothing to Merck. However, they YY it
as a billion doller drug... |
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f*********e
发帖数: 1144 | 30 can somebody pls share thoughts on building biosimilar in China? It's not
looking good for biosimilar in US, how about the industry in China?
1. do they need to do clinical trial again in China? Ph1-Ph3? same patient
scale as in the states? how to evaluate clinical data comparability to
branded ones...
2. which local companies (Wuxi pharm?)have the capacity for manufacturing
and conducting related CQA tests? full cGMP compliance to which std?
3. Chinese FDA will invest the manufacturing and/or a... 阅读全帖 |
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f*********e
发帖数: 1144 | 31 来自主题: Pharmaceutical版 - 找工作这事 hmmmmm, curious where do you get this impression from?
no...although not sure about early stage conjugation in research
but speaking of process development for ADCs ph1->ph3->commercial, it is
all in protein analytical chemistry dept.
we handle small molecule part (the drug of ADCs)as well
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