H*******g
发帖数: 6997 | 1 ☆─────────────────────────────────────☆
caonimadebi (caonima) 于 (Wed Oct 3 04:13:11 2012, 美东) 提到:
很多大龄剩女尽管年龄已经很大了，但是仍要求对方年龄比自己还大。说穿了，就是想
对方怎么能照顾我，迁就我，让这我，关心我。想找个老爸，哥哥，生怕自己吃亏了，
自己变成了姐姐妈妈。
但是女的一般比男的长寿，大龄再找个年龄更大的，以后老了很可能是自己照顾对方，
于是又感到非常吃亏，在年龄的矛盾中纠结不已，耿耿于怀。
其实何必这么心眼如针尖小呢。 事事算计，患得患失，最终不幸福得是自己，要求别
人做到什么，先想想自己能不能做到。爱是付出，不是索取，只想索取的，适合继续剩
下去
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blueriver7 (blueriver) 于 (Wed Oct 3 14:05:02 2012, 美东) 提到:
显然不是所有人这样啊，当我快３０岁的时候，突然发现比自己大４岁以上的人都无法
接受，还是同龄人或者比自己三岁... 阅读全帖 |
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y***d
发帖数: 2330 | 2 哦，直接就狗血了
往常一样，导师把一份样品给了范闲。样品来自中东，是从某个军方的实验室转寄过来
的，样品包装盒已经破损得比较严重，上面的"Classified"的字样几乎看不清了，可见
该样品曾经辗转了许多地方
心跳血压等生命体征，却没有腐烂，甚至没有半点腐烂的迹象，范闲用手轻轻戳了戳老
鼠的皮肉，仍然很有弹性。让范闲最为惊讶的是，样品寄过来时，只是放在一个普通的
盒子中，而且，盒子中没有
简略的记载着，一年多以前，美军驻中东的某个小队清剿了一个恐怖分子用于研制生化
武器的秘密据点，在那次行动中发现了该样品。至于那些大兵为什么会单单对这一只老
鼠感兴趣，以及军方实验室
然不能确定能否如愿采到血液样品。范闲戴上手套，撕开刀片的包装，将刀片安在刀柄
上，左手摁住老鼠，右手轻揉的用刀片在老鼠的尾巴上抹过，锋利到刀片在柔软的尾巴
上拉开了一道伤口，霎那间
器，一不留神，tip从pipette上滑落，滚到了实验台右侧的抽屉下面。
沾染了少量的有毒化合物或者致命病毒，所以用过的tip要扔到一个标有骷髅图案的盒
子中，待攒满一盒，须把盒子用胶带密封，高温消毒，然后深埋到地下。
后颈，仿佛有人突然间 |
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c****t
发帖数: 19049 | 3 AN ORISON OF SONMI~451
On behalf of my ministry, thank you for agreeing to this final interview.
Please remember, this
isn’t an interrogation, or a trial. Your version of the truth is the only
one that matters.
TRUTH IS SINGULAR. ITS “VERSIONS” ARE MISTRUTHS.
… Good. Ordinarily, I begin by asking prisoners to recall their earliest
memories to provide a
context for corpocratic historians of the future. Fabricants have no
earliest memories,
Archivist. One twenty-four-hour cycle in Papa Song’s is i... 阅读全帖 |
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P**********n
发帖数: 6311 | 4 你是哪级的？
我听 LP 说做生物有因为用 Pipette 用出工伤的... |
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b**x
发帖数: 3451 | 5 98级的。
对啊，用pipette很容易大拇指关节出问题，还有就是肩膀脖子这些地方。 |
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r******y
发帖数: 21907 | 6 听说我们使用的pipetter如果每次不调到最大，很容易坏，我现在每天都调，甚至有时
候做完一个实验就调，然后过不了一会儿就用，用完再调，不然我心里就不舒服。刚又
闷头把键盘用95％酒精擦了一遍，痛苦ing... |
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b*z
发帖数: 48 | 8 there are so many things that can go wrong in a pcr expt. your purpose would
be defined to carry out an expt without appreciable contamination rather
to figure out what has gone wrong.
typically if you want to find what's wrong, you would change one variables
(any buff, pcr station, even a pipette can be considered a single varibable)
at one time, repeat pcr expt and figure out what has gone wrong.
I would not do that though. you only have to figure out whether your own pcr
station has contamina |
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r****o
发帖数: 105 | 9 本文献给YL
（七）口吸管和蓝珠子
上一篇提到子宫冲洗出来的囊胚只有针尖大小，要想方便快速的转移囊胚需要用一种
特殊的工具叫做口吸管（mouth pipette）。在我的印象中，不能用嘴吸溶液是从中学就
开始强调的常识。所以刚开始用这个工具时感觉特别新鲜。课程结束后，我还把自己用的
口吸管带了回来，算是纪念品。
口吸管的结构很简单：首先是一端拉细了的毛细玻璃管，这个毛细玻璃管通过一个接
头固定在一个硬塑料管（直径大概半个厘米，长大概四五个厘米）上；硬塑料管的另一边
接着一条长大概半米的软塑胶管；最后软塑胶管另一头接着一个硬塑料的吸口。
口吸管结构中最重要的是用来吸取胚胎的毛细玻璃管。要实现精细的控制囊胚的吸取
和喷出，毛细玻璃管的直径应该稍大于囊胚的直径，但又不能太大。上一篇提到囊胚的直
径大概是一百微米左右，而一般的毛细玻璃管直径却有1.5毫米，很显然必须拉细毛细玻
璃管才能使用。拉毛细玻璃管的过程很简单，首先用酒精灯的火焰烤融毛细玻璃管的中间
位置，然后把两头向相反方向用力一拉，形成一个细丝。然后把拉细的部分按在大姆指上
，用指甲把拉细的部分给压断。这样就做 |
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p****e
发帖数: 105 | 10 发在这里，斑竹留情，材料都是生物版的同学们每天用的pipette, syringe filter,
tubes, O-ring。 |
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D******9
发帖数: 2665 | 12 到50睡的时候，你老还能pipette吗？ 我认识一个50岁的美国research associate, 天
天担心被fire，找了几个小学校想去教书， 可是现在经济危机， 也还没有拿到offer
。 |
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a***e
发帖数: 1010 | 13 why not dilute your sample, and then use 1-2 ul? |
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X***n
发帖数: 366 | 15 还是这样的老板好。
要是俺老板，也就问，“pipette带了吗？试管呢？”人家才不会理呢。 |
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j*****5
发帖数: 24 | 16 我觉得是你的样品太多了，一要多加点lysis buffer. 然侯多pipette几次就会好了。 |
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h****n
发帖数: 2552 | 17 I suggest you not doing a sonication since it may kill some proteins. If
your cell lysis is very sticky just vigorously pipette your samples up and
down several times untill foaming. |
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k*****d
发帖数: 177 | 18 带友发文，请勿回站内，谢谢~
以下为全文：
I am rotating in a lab and struggling with the chick embryonic neural tube
injection. I have
already practised for at least 5 times and still could not get it. Now I can
see the neural tube
under the dissection microscope, but I feel really hard to blow and do the
injection. I think the
main problem I have is my failure to dip the micropipette in a correct way.
Or maybe I did not
blow in the correct time point, or maybe the pipette does not have a proper-
sized hole. I feel |
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g*******8
发帖数: 6 | 19 老板让我学做 RealTime pcr去quantify some sample dna。 但我做了好几次，
standard 四个点总不能连成很好一条线。我现在非常frustrated. 不知是standard 做
的不好还是加sample前mix的不好。无论怎样我猜都是mix的问题。我是这样做的： add
3ul standard into 27ul H2O to make 10 fold dilution 。 then pipett up and
down for 20 times to mix it and use it to make another 10 fold dilution. I
am not sure if I mixed very well before I make another 10 fold dilution.
Is vetex better? I am afraid vetex will break dna. So I tried not to use
vetex. If I can use vetex, which setting I shoul |
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f*********r
发帖数: 1233 | 20 做标准曲线，这里面很有道道。我给你慢慢说。
1，做标准曲线，进行系列稀释。
我不管各文献、各产品说明书上怎么写的，最佳稀释方案永远是1：1稀释。a, 因为你
不用换枪，b, 也不用调容积。
a, 象你3-30的10倍稀释，必然要换枪，那么枪不准就不好了。不过这并不是你回归不
好的真正原因。就算你枪不准，比如2.7和28，只要你每次加样都很稳定，那么你的系
列稀释将保持2.7:30.7这样一个比率。回归的时候一样都落在直线上。
b, 因为你要换枪，因此不会用一把枪来回调容积。不过我还是讲一下。有的时候做1:3
、3:4这样的系列稀释，就不换枪了。但是要来回调容积。还是一个道理，如果你的枪
不准（而且肯定不准，没有谁的枪是准的），那么你肯定不是准1:3稀释。但只要你加
样技术过关，每次稀释比率是一定的，回归也应该落在直线上。
所以，楼上说的枪不准的问题不是你回归不好的原因。
2，液体混匀。
如果按照上面说的1:1稀释，那么不用20次，pipette5次就能混匀。技术再差也匀了，
不匀我磕死。但是，你那20次pipette用的是3ul还是27ul？如果你用3ul，那么这20次
还不如用27u |
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c********g
发帖数: 15 | 21 你有没有streak for isolation 以后 take single colony,然后把antibiotics和
medium都换过吗？
inoculate的时候小心些，不要用什么牙签之类的，也不要用wire loop。。试试用长的
sterile的pipette
看着跟bacilli似的 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 22 我都是从streak的fresh plate上挑的单菌落。Medium和antibiotics肯定是好的。
inoculate我都是用sterile pipette tips。
如果是bacilli，为什么一开始会是正常的cloudy的菌液，然后慢慢变清出现这种悬浮
纤维状物质呢？我没养过bacilli，不知道它的生长状况是如何的。
第二张图里那种一团团的菌体是什么呢？除了它之外，那管菌液本身的生长状态和浊度
倒是挺正常的。 |
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g*********r
发帖数: 9366 | 23 我用打断的 25 ml 的 plastic pipett 装过gelfiltration column , 用洗耳球储液兼
加压 |
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s********n
发帖数: 2939 | 24 我查了一下，96-well filter plates很多，但384-well的就比较少，比如这一款：
FiltrEX™ 384 Well Filter Plates with 0.45µm PVDF Membrane。我不
确定这一款filter plate能否hold住media很长时间，你可以打电话问问他们的技术支
持。
如果不行的话可以这样，先在原来的384孔板培养细胞，然后用robot pipette打散细胞
，transfer一定体积的culture到这种filter plates，再离心或者用vaccum去除media
，估计这样就可以得到比较consistent的结果。
祝你好运！
了. |
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f*********r
发帖数: 1233 | 25 我不直接回答你的问题，只是提供一个貌似更好的、而且可行的方案。
与其用trizol，加什么氯仿、异丙醇，最后是乙醇这么多步骤，不如用RNAzol一步完成
。pipette的时候，不用担心多吸会有下层液体的污染。因为rnazol根本没有液体分层。
不管用那种试剂，你这种从活体组织提取rna的情况，根本用不着100mg。尤其象肝脏。
有两三粒芝麻大小的组织就完全可以了。当然，还是用1ml试剂比较稳妥。
另外，在加异丙醇（或者别的醇）沉淀rna的时候，不一定按照说明那样离心。可以采
取小一些转速。这样出来的pellet比较松。用酒精洗就会洗得干净。最后溶解的时候也
更容易。不用担心低转速会导致低收获量。你有足够的样品，不存在收获量低的问题。
只要动作快，不用担心常温、低温。比如用rnazol，从匀浆化到形成rna沉淀pellet，
不超过20分钟。从头至尾都有保护：试剂可以保护溶解状态rna不受降解，沉淀状态的
rna也不容易降解。
为了提高匀浆化效率，可采用sonication。10秒钟可以完全打散任何组织。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 26 除了上面说的，加一条。
可以根据目标条带的分子量，把整张膜剪成多个横条。把横条放在大小刚刚合适的容器
里，比如放盖玻片的盒子里。这样抗体用量可以缩小到2毫升以内。
回收的时候，用pipette仔细吸干净。
按1：1000的比例稀释，每次只须2微升抗体。这个1：1000的抗体，至少可以用5次。1
瓶100微升的抗体，一共可以250次WB。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 27 You can use sterile pipette tips. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 28 我们实验室用prepacked的sterile PCR tubes和pipette tips，不autoclave。
但是我在以前的实验室也用过autoclave的，没有问题。
理论上来说autoclave是可能成为contamination source的，但是我感觉概率不大。除
非你已经排除了其他可能的污染源，才值得考虑autoclave的问题。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 29 这是个典型的例子，即便别人给了protocol，仍然不能重复。
几点建议：
1，DNase能不用就先不用。
2，loading buffer里先不要加bromophenol blue。或者不要加太多。至少要清亮，能
看到里面是透明还是混浊还是沉淀。
或者可以先用lysis buffer，处理完了再加浓缩的loading buffer。
3，pellet加上lysis buffer以后，不要用pipette打匀。而是直接用sonication冲击。
sonication是很强的，别说一个pellet，就是坚韧的大块骨骼肌组织，都能轻易打碎。
确认pellet被彻底打散并溶解了。
4，打碎以后离心，如果不理想可以考虑超高速离心。
5，取上清（这个时候应该一点都不粘了），加loading buffer，煮，跑胶。
6，如果条带形状扭曲，可以考虑把running buffer里面的tris含量酌情加量（2-3倍，
只要低分子量的蛋白仍然跑得开，跑不开的可以用4-20%的胶）。
7，如果还不太理想，可以考虑弃用glycin running buffer，改用taurin running
buff... 阅读全帖 |
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j***r
发帖数: 316 | 30 靠，我还不认识学金融数学的？ 我真忍不住想吹牛了。
反正太多的话我也懒的说了，这么讲吧，你还处于做学生的阶段，很多事情你还没有经
历过，还不懂。我说点什么东西呢--这话可能噎你--你就听着，理解的执行，不理解的
就把它像九阴真经一样硬记下来，现在不理解，也许某一天拿着PIPETTE加样的时候突
然就悟了。 |
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s****9
发帖数: 932 | 31 Lymph collection:
After the mice were killed, the peritoneal cavity was washed with 6 ml
of RPMI medium and then its contents were exposed ventrally. About 500&#
8201;µl of blood was aspirated from the inferior vena cava. Under a
stereomicroscope, the cysterna chyli was identified as a small cream-
coloured sac located dorsal to the left renal lymph node. A fine
borosilicate glass microcapillary pipette (Sutter Instrument) was then
inserted into the cysterna chyli and lymph fluid was ... 阅读全帖 |
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p****n
发帖数: 9263 | 32 当年念皮挨着地时候，一个修pipetter的大叔在得知俺家LD
也是念这个的时候，叹了口气说，那以后怎么活啊
几年后俺明白了他有多正确 |
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w******a
发帖数: 1527 | 33 Check this one:
Reagents
* TRIzol from Invitrogen #15596-108.
* Mini RNeasy plus kit from Qiagen #74134.
* Phase lock gel from Eppendorf #2302830.
* Keep TRIzol at 4C.
* Use RNase-free tubes and tips for all steps.
* Prepare 70% ethanol using DEPC-H2O and keep it at -20C.
RNeasy plus kit contains a genomic DNA elimination column. It can replace
the DNase I digestion step of regular RNeasy kit.
1. Add 1.2 ml TRIzol reagent to cells/tissues (5~10X 106 cells/ml or 50~100
mg ... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 2939 | 34 如果还是不行，你可以试试这个protocol:
1. 挑一个colony加到5 ul solution 2 （plasmids prep）；
2. pipette几次确保细胞裂解了(可以加热到100C for 2 min)；
3. 加入0.5 ml 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) or H2O;
4. 15,000xg for 5 min;
5. 用上清作为模板(0.5 or 1 ul)；
6. 这个上清可以保存在-20C供下次再用。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 38 看这个帖子之前我一直以为他们家是专门山寨gilson的。。。
刚才跑去确认了一下，带锁定那把原来也是rainin的，
确实很好用啊。。。 |
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t*********1
发帖数: 418 | 39 多谢楼上各位的信息。可是我上了RAININ的网页，没找到呀，能给我一个catlog number
吗？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 40 我用的是Pipet-Plus LTS系列，挺好用的。不过枪头也得用Rainin家的LTS系列枪头。
别的系列应该也有可以锁定的，你仔细看那些小图片，很多都有个lock ring在头上的。
number |
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h********n
发帖数: 4079 | 41 我以前做PCR太多, 大拇指有点损伤, 所以我现在基本都用电动的. |
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s**a
发帖数: 293 | 43 前些天做实验的时候，因为很少用排枪不太熟悉，吸量液体的时候出了点误差
被指出以后就改过来了
但是跟我一起做实验的一个高年级学生竟然告到老板那里说我不会用pipette，估计说
得很严重，因为老板不仅单独叫我去谈了话，还让我去找系里的director去谈，
director也说她得到的说法是我有serious basic experimental problem
但是如果问题这么严重那我做实验岂不是基本不可能成功，之前做过的n个克隆难道是
凭空冒出来的？而且这次的实验虽然刚开始不久，但之前也已经做过一次，两个人平行
操作，结果几乎是一样的，现在被这么说简直要气炸了…… |
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m*********7
发帖数: 606 | 44 这个，真的不太想打击你，不过很有可能是你自己操作存在问题。
注意一下每次加样时不要有交叉污染，换tip自然不用多说了，实在不行你好好把
pipette清洗干净，每次使用前和使用后都用kimwipes沾上70%乙醇擦拭几遍。 |
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b****r
发帖数: 17995 | 45 据我所知这个license就是给你出诊断报告的license，如果做实验不需要承担任何责任
，那不就
是随便找个技术员就行了
实际上起码对于genetics diagnosis的fellowship，出来了除了要能发报告，还得具有
一定的和
病人解释报告的能力，这也是training的一部分。当然这个对于纯PHD是劣势，不过想
想那些都没
怎么碰过pipette 的MD两年内也得要练得可以自己做实验，帮技术员troubleshooting
，这个难度
是不是也不小
当然我也只
是听说而已）。 |
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h****n
发帖数: 2552 | 46 那中国的赤脚医生可不可以叫MD，来美国当千老？美国的MD不仅是临床，science也要
做的。尼玛本科临床出来的pipette都拿不来，还说啥MD？看得人真TMD的蛋疼 |
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s******r
发帖数: 2876 | 47 有几个MD做research？
那中国的赤脚医生可不可以叫MD，来美国当千老？美国的MD不仅是临床，science也要
做的。尼玛本科临床出来的pipette都拿不来，还说啥MD？看得人真TMD的蛋疼 |
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h**********r
发帖数: 671 | 48 我在实验室用的Thermo，貌似work的不是很好。
Yeast DNA Extraction
(The protocol was modified by housepainter on December 28, 2009 according to
manufacture’s instructions)
Yeast DNA Extraction Kit, Thermo Number Description: 78870
Storage: Store at 4°C; if precipitant has formed, gently warm DNA Releasing
Reagents A and B at 37°C for 1-5 minutes.
Kit Contents:
Y-PER Reagent, 25 ml
DNA Releasing Reagent A, 20 ml
DNA Releasing Reagent B, 20 ml
Protein Removal Reagent, 10 ml
1. Pellet a 10 ml S. cerevisiae culture gr... 阅读全帖 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 49 能吃，我们曾经直接用pipette取几十微升egg吃，有待开发新的recipe。。。 |
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