z******5
发帖数: 30 | 1 总是问很弱智的问题，希望各位大牛包涵。
pLVX-puro可以用psPAX2和pMD2.G包装吗？ |
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S*****s
发帖数: 287 | 2 如果 GFP 和 质粒一起做 cotransfection 的话很可能会遇到这样的问题，在难转染的
细胞上差别更明显。如果你把 GFP 和你的要表达的基因克隆到同一个质粒上应该就不
会有这个问题。我用 BAC 可以连另一个单独表达 GFP 的质粒，如果你要表达的基因比
较小，可以考虑用 IRES GFP。我们隔壁实验室用 Clontech 的 pLVX-IRES-ZsGreen1
克隆基因然后转 Neuron，效果也很不错。荧光强度比较高，而且每一个带 GFP 的
neuron 都能有基因表达，在电生理上能看到区别。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 5 多谢诸位！
查了下前面给出的Addgene上的载体，感觉不是特别合适（表达shRNA和mRNA有一个很关
键的差别），最后还是决定自己手动改造了。根据Clonetech的pLVX-TetOne载体合成一
段大约3kb的cassette，置换到pLenti载体的backbone上，不含插入gene的话大概是9kb
，这样表达2kb以下的ORF应该问题不大，更大的插入就像铁牛所说，要严重影响包装效
率了。 |
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