u********u
发帖数: 8196 | 1 对方ID:
PMSF
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Gift Card
我的评价:
Trusted seller, good communiction:) |
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b*****y
发帖数: 83 | 2 对方ID:
PMSF
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GC
我的评价:
good seller |
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b*****y
发帖数: 83 | 3 对方ID:
PMSF
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GC
我的评价:
good seller |
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h****k
发帖数: 182 | 5 cell lysis 的时候用到PMSF, 知道毒性很大，现在要自己用买来的粉末配好
isopropanol的溶液，有好的方法避免接触到吗？ |
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t**t
发帖数: 27760 | 6 【 以下文字转载自 Hardware 讨论区 】
发信人: PMSF (PMSF), 信区: Hardware
标 题: 请教：apple的app有哪些是有用的？
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 21 23:17:20 2009, 美东)
周末看了zune hd，觉得屏幕挺好啊，样子个人觉得也比touch要漂亮，网上的review基
本上都差不
多，听音乐，看video用hd，上网因为浏览器的原因，hd慢些，但也不是没法用。不过
想要app的就不
要考虑hd，选touch。我比较土，想像不出什么app是真的有用，需要老是放在手边的，
这个大概是影
响大多数人选hd还是touch的因素吧，请高人指点一下。 |
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l*******g
发帖数: 27064 | 7 看着名字就是要处方才能买的
还不一定有的卖，
搜了下，网上没有
搜了下，还有个PMSF有得卖，是不是同一个东西？
看介绍，和camostat mesilate都是丝氨酸蛋白酶抑制剂serine protease inhibitor |
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m****s
发帖数: 18160 | 8 此表为精华区内所有feedback的统计（从04/01/2006开始）。制作此表的目的是为了让
大家能够了解近期feedback情况。由于feedback数量庞大，在制作此表的过程中采用了
电脑程序，以后也将继续使用此程序。所以，希望大家以后在留feedback时，能采用模
板发文，这样才能保证feedback能被正确的统计。
[0] MITBBS
[-] MITBBS
以下这些feedback题目都不合格：
1) 【＋】MITBBS
2) ++++++MITBBS
3) (+) MITBBS
4) [+] MITBBS, JIAOYOU8, HUAREN (只有第一个ID会被统计到)
5) [MITBBS]+++++
6) [+] 未名空间
最后更新：
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- feedbacks updated to Jul 29, 2012.
?? 3 0 0
?JINGO 1 0 0
A321321321 3 0 0
A7 17 0 0
AAAAA1 3 0 0
AAABBC 2 0 0
AAAPPP 1 0 0
A... 阅读全帖 |
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K****D
发帖数: 30533 | 9 此表为精华区内所有feedback的统计（从04/01/2006开始，更古老的feedback已经
删除）。制作此表的目的是为了让大家能够了解近期feedback情况。
由于feedback数量庞大，在制作此表的过程中采用了电脑程序，以后也将继续使用
此程序。所以，希望大家以后在留feedback时，能采用模板发文，这样才能保证
feedback能被正确的统计。
正确的题目格式为 (replace MITBBS with the ID you are leaving feedback for):
[+] MITBBS
[0] MITBBS
[-] MITBBS
以下这些feedback题目都不合格：
1) 【＋】MITBBS
2) ++++++MITBBS
3) (+) MITBBS
4) [+] MITBBS, JIAOYOU8, HUAREN (只有第一个ID会被统计到)
5) [MITBBS]+++++
6) [+] 未名空间
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- feedbacks updated to Jun 30... 阅读全帖 |
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m****s
发帖数: 18160 | 10 此表为精华区内所有feedback的统计（从04/01/2006开始）。制作此表的目的是为了让
大家能够了解近期feedback情况。由于feedback数量庞大，在制作此表的过程中采用了
电脑程序，以后也将继续使用此程序。所以，希望大家以后在留feedback时，能采用模
板发文，这样才能保证feedback能被正确的统计。
[0] MITBBS
[-] MITBBS
以下这些feedback题目都不合格：
1) 【＋】MITBBS
2) ++++++MITBBS
3) (+) MITBBS
4) [+] MITBBS, JIAOYOU8, HUAREN (只有第一个ID会被统计到)
5) [MITBBS]+++++
6) [+] 未名空间
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- feedbacks updated to Aug26, 2011.
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m****s
发帖数: 18160 | 11 此表为精华区内所有feedback的统计（从04/01/2006开始）。制作此表的目的是为了让
大家能够了解近期feedback情况。由于feedback数量庞大，在制作此表的过程中采用了
电脑程序，以后也将继续使用此程序。所以，希望大家以后在留feedback时，能采用模
板发文，这样才能保证feedback能被正确的统计。
[0] MITBBS
[-] MITBBS
以下这些feedback题目都不合格：
1) 【＋】MITBBS
2) ++++++MITBBS
3) (+) MITBBS
4) [+] MITBBS, JIAOYOU8, HUAREN (只有第一个ID会被统计到)
5) [MITBBS]+++++
6) [+] 未名空间
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m******s
发帖数: 665 | 12 自2006年1月份以来二手市场建立了feedback制度，方便大家在交易的过程中给大家提
供一个公平交易的评价方式。
为了便于大家查找信誉，请标题用规范的格式。
以下这些feedback题目都不合格
1，【+】MITBBS
2，+++++++MITBBS
3，(+)MITBBS
4,[+]MITBBS,JIAOYOU8,HUAREN(只有第一个会被统计到)
5，[MITBBS]+++++
6,[+]未名空间
本次统计的截止日期为：
+ 的统计截止日期到 Sun Aug 15 2012
- 的统计截止日期到 Sun Aug 15 2012
id + 0 -
?? 3 0 0
?JINGO 1 0 0
A321321321 3 0 0
A7 17 0 0
AAAAA1 3 0 0
AAABBC 2 0 0
AAAPPP 1 0 0
AAATY 1 0 0
AADDOO 5 0 0
AANON 6 0 0
abao2000 2 0 0
abc111 1 0 0
ABCD123 5 0 0
ABCDEFGHIJK 1 0 0
ABED 32 1 0
ABERDE... 阅读全帖 |
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m******s
发帖数: 665 | 13 p51668 10 0 0
PA 2 0 0
PAAT 14 0 0
PAGE 3 0 0
PAK 2 0 0
PALADIN 1 0 0
PaladinHL 2 0 0
PALADINYT 1 0 0
PALAFOX 1 0 0
PALAMA 9 0 0
PALMOLIVE 31 0 0
PALOSCHI9 1 0 0
PANDABAMBOO 1 0 0
PANDAMALONE 46 0 0
PANDATOLEDO 8 0 0
panera08 1 0 0
PANGPANGWUDI 1 0 0
PANGXIONGX 2 0 0
PANGZHUTOU 19 0 0
pangzhutou 1 0 0
PANPANJIAO 2 0 0
panpanpan 1 0 0
PANYS 1 0 0
PAOPAODOG 1 0 0
PAOPAOP 2 0 0
PAP2 4 0 0
PAPABEAR 6 0 0
PAPADA 2 0 0
PAPAIN 9 0 0
PAPERABC 16 0 0
PAPERTIGER 3 0 0
PAPILLON 2 0 0
papiyas 1 0 0
PARABABY... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 14 cell signaling # 9803
Cell Lysis Buffer (10X)
____________
1X Cell Lysis Buffer:
20 mM Tris-HCl (pH 7.5)
150 mM NaCl
1 mM Na2EDTA
1 mM EGTA
1% Triton
2.5 mM sodium pyrophosphate
1 mM b-glycerophosphate
1 mM Na3VO4
1 μg/ml leupeptin
adding 1 mM PMSF immediately before use. |
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x********a
发帖数: 157 | 15 我的裂解液成分是：
50 mM Tris-HCl (Ph 7.4)
150 mM NaCl
2 mM EDTA
5% glycerol
1% Triton
然后每1毫升上述的液体加 10 ul 0.1M PMSF 和 20 ul Protein inhibitor cocktail. |
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K**********e
发帖数: 188 | 16 1 用agrose resin做IP，吸的时候即使把枪头剪掉了，还是吸不准怎么办？这样不通样
品之间加的量就有点不同了啊。
2 洗涤resin的时候，吸到最后经常会带起来一点resin，洗几次岂不是损失了一些样品
3 最后加loading buffer的时候，总是会有些残余的液体，不同组间残余的量不一样，
这样最后打算把IP产物如果一半做
wb，一半做银染，岂不是分不准了。
4 以前我提蛋白从来不加蛋白酶抑制剂！因为老师说“会降解的蛋白加了也会降解，不
会降解的自然不需要加”。现在开始加
PMSF，100mM溶解于异丙醇，按500X加。异丙醇加进去会不会对蛋白不好啊？ |
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m******5
发帖数: 1383 | 17 3，残液再离一次吸就干静了。。其次，你都不是用一种方法染，分得准不准和你的结
果没关系
4 加蛋白酶抑制剂混合物，个人不爱加pmsf 以前纯化时觉得对蛋白有毒性 |
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m**z
发帖数: 787 | 18 50% 可溶，如果表达良好的话还是可以接受的。
杂蛋白，到底是impurity还是degrading product? gel-filtration分不开，能不能试
试ion exchange column,比如monoQ.用的什么蛋白酶抑制剂？PMSF? 试试看sigma的
inhibitor cocktail?
最后拿到的蛋白纯度大概有多少？如果有80%的话，也许做binding也可以了。mass
spec可以确定那些是不是降解产物。如果是的话，还可以告诉你是在哪里降解的。也许
可以通过mutate那个residue来达到减少降解的目的 |
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m********r
发帖数: 124 | 19 sonication的时候加了PMSF和sigma的 cocktail了；
“还有RLUTION以后的FLOW THROUGH都做一下看看”是啥意思？我们这一步已经很纯了
，所以就是过柱，flowthrough，然后300mM咪唑洗了，这两部分都没我要的蛋白。 |
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y********g
发帖数: 782 | 20 1、每个reaction大概需要多少细胞。
2、sonication时，当时tube中裂解液的体积是不是很重要，大约多少ul比较好？
3、用液氮闪冻一下，是不是必须的？
4、PMSF要不要加？磷酸化酶抑制剂要加么？
5、用磁珠的话，也要preclear么？
十分感谢！！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 21 在通风橱里操作，避免直接吸入和接触就好了，没事。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 25 有这么可怕么？
我们从来没有在通风橱操作过这个 |
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h*******n
发帖数: 2052 | 26 how about DFP? I heard it is very very toxic. I am afraid to use it. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 27 Better Safe than Sorry. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 28 普通操作已经七年过去了
没有任何问题
生的宝宝也很健康
这种东西你不吃下去
不吸进去
不要沾到皮肤上（戴手套）
也就行了
而且它的粉末不是那么容易四处浮散的
要想吸进去那得挨多近啊？ |
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a*********n
发帖数: 2526 | 29 PMSF 太毒了，不想用，市面上的一些cocktail效果又不是很好 |
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h*******n
发帖数: 2052 | 30 I am using DFP, much much much more toxic than PMSF.
55555........... |
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a*********n
发帖数: 2526 | 31 PMSF 见血封侯，沾到白大褂上都得扔，难道DFP是传说中的含笑半步颠？ |
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r***e
发帖数: 2539 | 32 PMSF有这么严重吗？
只是觉得溶剂比较容易挥发。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 33 有那么夸张吗？我沾到PMSF不知道多少次了，不也活得好好的。。。 |
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d*******d
发帖数: 1341 | 34 我看了看，PMSF毒性3接触4，确实很毒了啊。谢谢楼主吓唬，以后注意点 |
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w*********n
发帖数: 439 | 35 如果我chip Elute DNA是100ul的话，你取10ul作realtimePCR？
你用RIPAbuffer wash的时候 是不是要加PMSF和Proteinas Inhibitor? |
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k******0
发帖数: 1073 | 36 你的buffer有没有protease inhibitors，如PMSF， pepstatin等，它们是Tev
protease的抑制剂。有没有DTT，通常我们做Ni－NT不加DTT，好像TEV protease最好有
些DTT存在。还有，in column proteolysis
通常不如in solution digestion有效，多加些protease。 TEV protease特异性很强，
加多了也不怕。如果可以，还可以在20C水解，比4C有效。 |
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D**A
发帖数: 311 | 37 protease inhibitor 加够推荐的量就可以，多加浪费钱，效果还不一定好，可以加点
PMSF, benzamidine, EDTA之类的便宜inhibitor, 隔1-2小时补加一次就可。15%
glycerol.
先用液氮冷，然后快速解冻, 加冷的lysis buffer试试。
蛋白在室温下过夜会水解。
能想到的就这么多了。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 38
非常感谢！我也是实在没办法，多加了inhibitor。PMSF也加了。
加了inhibitor的lysis buffer放在冰里遇冷，然后从液氮里拿出tissue，立即
homogenize。。。。
我说的室温过夜是加了6xloading buffer，另外我的buffer里还有2%的SDS，这样也会
降解吗？ |
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v**********m
发帖数: 5516 | 40 无水乙醇就行了。甲醇毒，异丙醇味大。
PM sf毒性大，在水溶液里容易水解不稳定。去罗氏买pefa bloc替代PM sf比较好。 |
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a*********n
发帖数: 2526 | 43 以前听说PMSF见血封喉, 其实也没有那么毒. |
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O**********a
发帖数: 317 | 44 很简单，我给你个protocol：
1. 要配15%的胶，注意组蛋白分子量10多K，不要跑出去了。
2. 酸抽：收集细胞，PBS洗干净；用TEB buffer（TritonX100 extraction buffer：
PBS＋0.5% TritonX100（v/v）＋2mM PMSF），冰上裂解10分钟，每10X10^6个细胞用
1ml TEB buffer。6500 g，4度离心10分钟，去掉上清，pellet就是nuclei。加0.2N
HCl（in水溶液），重悬起来，转轮上4度过夜，每10X10^6个细胞用250ul 0.2N HCl。
第二天6500 g4度离心10分钟，保留上清，就是histone。盐酸中的组蛋白，保存在－20
度、biorad测蛋白浓度，都没问题，不用TCA沉淀。
3. 一般取2-5ul，直接加SDS loading buffer就可以跑胶。不用改pH值。加了loading
buffer溴酚蓝会变色，因为pH太低，不过无所谓。跑胶转膜，ponceau S染色就能看到
清晰的三条组蛋白带（H3、H2A／2B，H4），一般还能看到上面一条组蛋白H1。weste... 阅读全帖 |
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