c********n
发帖数: 225 | 1 更新后的Note部分：
（NBT 原文里没有）
Note:
1.NgAgo/gDNA system is extremely sensitive to contamination of intracellular
bacteria (including mycoplasma) which are widespread and leave no visible
signs of presence. Carefully excluding the presence of intracellular
bacteria before performing experiments.
编者注：不能有细菌污染
2.Because Agos need magnesium, avoid EDTA when detaching and seeding cells
into the plates for transfection. Alternatively, supplementing Mg2+ to 5 mM
(may need optimization to your cell type).
编者注... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 2 For those who can not access the link
I copied the content here:
>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>>
NgAgo
15 posts by 9 authors
Davide Seruggia
Jun 23
Hi,
I tried a couple of transfections with the NgAgo plasmid from Addgene and
the 5'P oligo against GFP from the paper, but I did not see a dramatic
reduction in GFP+ as seen using Cas9 and a GFP sgRNA.
Anybody tried as well and came to the same (dead) end?
Davide
k*****[email protected]
Jun 24
Hi, Davide,
I tried th... 阅读全帖 |
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K**********e
发帖数: 188 | 3 谢谢上面的和sunnyday。
1 哦哦。那还好，细胞培养基有点黄，但还是有点红。因为是悬浮细胞，稀释可以吗，
还是最好离心下来再用新鲜的培养基悬浮？
2 嗯嗯，原来载体拿限制内切酶切了的话就上带有磷酸基了啊。我没有用磷酸酶处理载
体。我合成的时候没有要求，就是当成引物让公司直接合成的。那我用T 4 PNK kinase
又处理了我的要插入载体的双链DNA片段，是不是就多了一个磷酸，反而连接不上去了呢？
可是指导我做实验的senior postdoc让我用T4 PNK处理，他也知道我是公司直接合成的
引物。这个postdoc以前做过很多这样的载体，应该很清楚呀。
其实我做的是合成hairpin DNA，克隆进载体，准备做sh RNA knock down。 |
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c********n
发帖数: 225 | 4 问题总结
1.实验材料来源（Hyclone vs Gibco的培养基，以及原文没有特别提到的“Biolab”T4
PNK）会影响可重复性吗？
HyClone以及其他 T4 PNK 供应商，你们是不是要想一想自己的问题在哪里了？
还有，ThermoFisher可要注意了，你们的Lipofectamine® 3000可能有问题！
2.原文用于plasmid和guides （DNA）的0.5xTE，更新后 改成NaOH调出来的pH8.0的水。
先不谈怎么来用NaOH调出这个稳定的没有缓冲液的pH8.0的水，如果原因是由于NgAgo对
于EDTA这么的敏感，那么原文中用到的大约0.015-0.025mM的EDTA，是怎么做出的NBT文
章中的结果的？
3.关于细菌污染问题。从新闻报道和照片上看，韩春雨老师他们做实验是经常不戴手套
的，看来他们这样做细菌污染机率会减少。所以这些重复NgAgo实验的人们，你们重复
NgAgo实验的时候，带手套了吗？你们的实验材料有没有被细菌污染呢？
4.看来Mg2+的浓度，在不同的cell type也需要optimize
5.看来ss gDNA 二次转染... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 5 1 北京大学生命科学学院魏文胜课题组
我们使用了文章中报道的高效ssDNA，同时自己设计了其他2条针对体内其他基因位点的
ssDNA，与NgAgo表达质粒共转HEK293T细胞与HeLa细胞，2天及5天后，用T7E1检测切割
效率，这三条针对2个不同基因的ssDNA，在HEK293T和HeLa两个细胞系中，无论转染一
次还是在8到12小时后再转染一次ssDNA，都没有检测到切割。
针对敲除后能使细胞有表型变化的某特定基因，我们设计了ssDNA，与NgAgo表达质粒共
转HeLa细胞5天后，发现细胞表现出了一定的对应表型，但是把这部分细胞收集起来提
取基因组，对靶位点测序，没有发现基因组序列的任何改变。
我们针对某特定基因设计了6种ssDNA，用特异的荧光报告系统检测是否有靶点DSB产生
，结果显示所有实验组均没有检测到对靶位点DNA序列的切割活性。
2 中科院动物研究所王皓毅课题组
我们在293T细胞中表达带有Flag标签的NgAgo ，在不同时间点检测NgAgo蛋白表达。发
现转染6小时后开始检测到目的蛋白，随着时间的延长蛋白量增加。在人类293T细胞系
中重复原文章中Figure ... 阅读全帖 |
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M*****8
发帖数: 17722 | 6 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, ABCP , 1.0000
#0011, ABT , 34.7400
#0012, ACAT , 51.5000
#0013, ACE , 92.3800
#0014, ACGL , 52.3700
#0015, ACH , ... 阅读全帖 |
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M*****8
发帖数: 17722 | 7 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, ABCP , 1.0000
#0011, ABT , 34.7400
#0012, ACAT , 51.5000
#0013, ACE , 92.3800
#0014, ACGL , 52.3700
#0015, ACH , ... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 8 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: XiuShi (致力为花街散财，造福散户), 信区: Stock
标 题: $【2018年9月13日700个股票的短期谷底高峰预测】$
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 3 10:33:45 2018, 美东)
$【2018年9月13日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准... 阅读全帖 |
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z**********e
发帖数: 22064 | 9 【 以下文字转载自 MiscNews 讨论区 】
发信人: Onews (OverseasNews), 信区: MiscNews
标 题: [ZGJD]T-90坦克的前世今生
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 3 20:22:37 2016, 美东)
俄罗斯的坦克一般以年份命名，T－90坦克是目前现役装备的坦克里年代最靠后的一款坦克，所以在不被了解的时候，经常被误认为是俄罗斯最先进的坦克。现在流行一种比较通俗的说法，T－72坦克是T－64坦克的简化版。而T－90坦克就是T－72坦克的升级版。从零部件使用的历史沿革来说，这种说法还可以被接受。那么，为什么说T－90坦克就是T－72坦克的升级版？这两款坦克之间又存在着哪些血缘关系？
上世纪80年代，美国、德国都已经列装了第三代主战坦克，中国的三代坦克也正在研制当中，而1979 年服役的T－80坦克从设计理念上只能算是二代半，所以当时的苏联还没有第三代坦克。获取三代坦克的途径有两条路，一个是通过对现有成熟车型的改进，提高车辆技术含量；另外一个途径就是重新研制一款新型坦克。对于财政上勉强维持的苏联来说，研制新型坦克费时费力，于... 阅读全帖 |
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j***y
发帖数: 1069 | 10 43,052 + ttl
Model: 8RB56A AUDI Q5 2.0 4-DR AUTO QUATTRO
Exterior Color: A2A2 BRILLIANT BLACK
Interior Color: CA BLACK
Options: 4I3 AUDI ADVANCED KEY
5PK ALL-WEATHER FLOOR MATS & TRUNK LINER
6W3 FRONT LICENSE PLATE - HOLDER
9VK BANG & OLUFSEN SOUND SYSTEM
AMI IPOD CABLE FOR AUDI MUSIC INTERFACE - NO CHARGE
PNK NAVIGATION P... 阅读全帖 |
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M*****8
发帖数: 17722 | 11 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: MB80528 (肥猫(Contrarian)[食MM而肥]), 信区: Military
标 题: Re: 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 9 22:18:23 2013, 美东)
2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, AB... 阅读全帖 |
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P**H
发帖数: 2272 | 12 这些都这两年5块以下的
上周的收盘价:
SYMBOL 5/20/2011
UFS 102.81
LULU 96.29
LCAPA 87.50
DTG 80.90
HTWR 77.61
APKT 77.33
PPO 68.69
TPX 64.05
VRTS 55.41
VECO 54.79
TRW 54.59
DDS 53.26
ULTA 52.50
SHS 52.31
ROC 51.65
TCK 50.00
MSI 46.78
PAY 46.62
ROSE 46.14
GRA 45.11
RAX 43.08
VIV 42.20
KWR 41.31
GIII 41.04
TEN 40.10
DNDN 38.98
OXM 38.94
ACTG 38.72
YZC 38.46
IMAX 36.41
TPCG 35.64
OVTI 35.54
RDWR 35.45
APL 34.99
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n**x
发帖数: 606 | 13 Russell 2000:
AAON
AAT
AATI
AAWW
ABAX
ABBC
ABCB
ABCD
ABCO
ABD
ABFS
ABG
ABM
ABMD
ABVT
ACAT
ACC
ACCL
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ACHN
ACIW
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ACO
ACOM
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ACTG
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ACUR
ACW
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ADC
ADPI
ADTN
ADVS
AEA
AEC
AEGR
AEIS
AEL
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AF
AFAM
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AGX
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AKRX
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ALIM
ALJ
ALK
ALKS
ALNC
ALNY
ALOG
ALSK
ALTE
ALTH
ALX
AM
AMAG
AMCC
AMED
AMKR
AMN
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AMRC
AMRI
AMRS
AMSC
AMSF
AMSG
AMSWA
AMWD
ANAC
ANAD
ANDE
ANEN
ANGO
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M*****8
发帖数: 17722 | 14 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: MB80528 (肥猫(Contrarian)[食MM而肥]), 信区: Military
标 题: Re: 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 9 22:18:23 2013, 美东)
2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
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#0007, AAP , 83.2000
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#0009, ABAX , 50.2800
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X****i
发帖数: 1877 | 15 $【2018年8月20日最新的490多个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就再次发最新并且更好更多机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 16 $【2018年8月22日最新的500个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
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1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 17 $【2018年8月23日最新的600个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一大部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 18 $【2018年8月24日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 19 $【2018年8月31日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
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花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
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5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其锐... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 20 $【2018年9月13日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
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对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
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5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其锐... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 21 $【2018年9月19日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其锐... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 22 $【2018年10月15日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 23 $【2018年8月20日最新的490多个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就再次发最新并且更好更多机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避... 阅读全帖 |
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X****i
发帖数: 1877 | 24 $【2018年8月22日最新的500个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
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X****i
发帖数: 1877 | 25 $【2018年8月23日最新的600个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
【顶到99楼，就发更多得多最新并且更好机会的预测。】
【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一大部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
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花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
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X****i
发帖数: 1877 | 26 $【2018年8月24日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
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【本想提供一千五百个预测，最后决定只提供一小部分。】
【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
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花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
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股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
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X****i
发帖数: 1877 | 27 $【2018年8月31日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
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股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
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1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
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X****i
发帖数: 1877 | 28 $【2018年9月13日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
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花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
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1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
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X****i
发帖数: 1877 | 29 $【2018年9月19日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
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花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
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X****i
发帖数: 1877 | 30 $【2018年10月15日最新的700个股票的短期谷底和高峰价的预测】$
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【原因是，股版XMJDH的居多，忌才，典型劣币驱逐良币。】
对比预测，如果股价越极端，散户获暴利的机会和风险其实反而越佳。
花街的捣蛋，挤空或砸价，其实是制造极端价供精明的散户收割暴利。
花街这么做绝非善意，而是要吓唬散户在其人为的极端价割肉出局。
花街有用之不尽的代理基金和资金充炮灰，可以任性的挤高峰砸谷底。
花街有别人的代理钱来任性，用大量炮灰钱可以买出涨价，砸出跌价。
股票最不定因素，就是花街每天对散户的捣蛋，尤其挤高峰和砸谷底。
以下是为蝌蚪们提供的最基本，炒股绝对须要遵守，的注意事项：
1. 预备大量(>=50%)现金，准备用来收割花街人为制造的捣蛋极端价。
2. 只用50%的现金做买卖的预算，分散风险在10到20个不同的股票里。
3. 一旦价格接近预测的谷底或高峰，就开始用短期的趋势线跟踪。
4. 如果价格比预测极端，意味花街可能在捣蛋，即挤空或砸价。
5. 既然花街意在制造极端价，那就耐心的避其... 阅读全帖 |
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M*****8
发帖数: 17722 | 31 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: MB80528 (肥猫(Contrarian)[食MM而肥]), 信区: Military
标 题: Re: 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 9 22:18:23 2013, 美东)
2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, AB... 阅读全帖 |
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l*******n
发帖数: 157 | 32 pnk is right...
that's the way for most SME here...
hehehe |
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M*****8
发帖数: 17722 | 33 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: MB80528 (肥猫(Contrarian)[食MM而肥]), 信区: Military
标 题: Re: 2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 9 22:18:23 2013, 美东)
2013年7月9日最新的1688个看跌的股票。
多数到顶。墙街已深入插管，吸血在即。
排列依次为，号码，股票符号，收市价。
#0001, A , 44.6000
#0002, AA , 7.9010
#0003, AAGIY , 17.1600
#0004, AAMRQ , 4.7300
#0005, AAN , 28.9700
#0006, AAON , 24.7400
#0007, AAP , 83.2000
#0008, AAUKY , 9.5300
#0009, ABAX , 50.2800
#0010, AB... 阅读全帖 |
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n******h
发帖数: 2497 | 34 回复得好详细，谢谢谢谢。pnk平衡的综合肥料，是什么名字，给个品名我去照着买。 |
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l******f
发帖数: 418 | 35 应该是不同品种，我买的是
Prunus mume Dawn Dbl Pnk-fl Ume Apricot |
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a**********a
发帖数: 59 | 36 【 以下文字转载自 HUST 讨论区 】
【 原文由 tzq 所发表 】
发信人: pnk (火球), 信区: StudentofHUST
标 题: 文科理科碰碰车 (转载)
发信站: 武汉白云黄鹤站 (Fri Jan 14 21:15:33 2000), 站内信件
文科生看文科生：潇洒浪漫。
理科生看理科生：聪明绝顶。
文科生看理科生：呆。
理科生看文科生：酸。
文科生口头禅：茴香豆的茴有几种写法，你会吗？（源于孔乙己）
理科生口头禅：1+1=？（源于陈景润）
文科生最头痛的事：1530元存了3个月零七天，银行利息2.14%，扣去20%的
利息税，最后总共是多少？
理科生最头痛的事：情人节的前一天，在烛光下苦思冥想，给女朋友的卡片
上写点什么才好呢？
文科生最常做的事：咬着笔杆发呆。
理科生最常做的事：扶着眼镜发愣。
文科生对文科生吹嘘：最近我对爱因思坦的相 |
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c*******o
发帖数: 8869 | 37 digestion of PCR product can be very tricky, what i do is following:
1 purify your PCR product with qiagen kit
2 use T4 PNK phosphorylate your PCR product's blunt end
3 ligate your blunt PCR fragment into any vector cutted with blunt end enzyme
(like EcoRV)
4 transformation and mini prep plasmid
5 then use hindIII and EcoRI cut the fragment out of vector
6 purify your hindIII-EcoRI fragment with kit and insert it into the vector
you want to use
this will add one more subcloning step but i am sur |
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a***e
发帖数: 1010 | 38 when u order oligo, the end is -OH, you have to kinase first by T4 PNK.
you can kinase (+) & (-) strands together in 50 ul volumn. then boil it
in water, let the water cool down on bench gradulately.
then it is enought for ligation. |
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b******k
发帖数: 1874 | 39 T4 pnk:
Catalyzes the transfer and exchange of Pi from the γ position of ATP to
the 5 -hydroxyl terminus of polynucleotides (double-and single-stranded
DNA and RNA) and nucleoside 3-monophosphates. Polynucleotide Kinase also
catalyzes the removal of 3-phosphoryl groups from 3-phosphoryl
polynucleotides, deoxynucleoside 3-monophosphates and deoxynucleoside 3
-diphosphates (1).
Thanks a lot.
sounds like I need to go over some basic, get confused.... |
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i*****l
发帖数: 51 | 40 艳阳天MM的回答准确，就按她的建议去做。 T4 PNK是用来末端磷酸化的，公司合成的
REGULAR OLIGO都是-OH末端， 直接和载体连接就可了
kinase
了呢？ |
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a***e
发帖数: 1010 | 41 if the 5'-end of your ssRNA is -OH, you can add a Pi by T4 PNK.
although your substrate is gamma-Pi from ATP, the product is alpha-Pi. |
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w******e
发帖数: 1187 | 42 RNA: in vitro transcription＋phenol＋Urea PAGE purification＋elutrap＋
column desalt。
radiolabeling：artarctic phosphatase，heat inactivate。PNK＋P32 ATP，
heat inactivate。column purify+desalt
thx! |
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s********8
发帖数: 619 | 44 我的回收产物应该还是比较好的,260/230挺高,应该没有什么salt contamination.现在
已经pnk treat了纯化的PCR产物, 试一下3:1 blunt end 连接.如果不成功的话我就重
新订引物双酶切了.下次还是尽量不要做blunt end 克隆了. |
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d****7
发帖数: 109 | 45 别急，如果合成两条互补链oligo然后退火的话，记得纯化方法一定要选最高的（HPSF
绝对不行，最好是PAGE纯化的），否则会有很多合成失败的垃圾影响接下来的连接。
还有，如果你是设计的oligo带overhang的话，记得用PNK给5'端加磷酸，因为化学合成
的5'端不带磷酸的，没磷酸是连不上的！ |
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m*****z
发帖数: 1451 | 46 PAGE纯化的都不靠谱，最好是HPLC纯化的
pnk加磷酸不如直接合成带5'磷酸的oligo
这样基本上万无一失了，就是有点贵。
想省钱的还是合成2条primer故意让它们形成primer之间的dimer
PCR后酶切，跑个10%的non-denatured的PAGE，切胶后碾碎，用TE泡1小时或过夜，乙醇
沉淀，记得加点离子。
HPSF |
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N2
发帖数: 81 | 47 事情怎么弄的这么复杂
方法1: 直接设计在长引物里就好,IDT,100nmol,90bases
方法2: 2 oligos to form a adaptor with sticky ends and used in the ligation
directly without recovery , add 0.2u PNK in the ligation and you don't need
primer Phosphorylation |
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K**4
发帖数: 1015 | 48 这个文章提出的DNA-guidedDNAinterference by bacterial Argonaute (or PIWI) 好
像不是很充分阿。首先他自己的实验也表明，Argonaute即结合RNA也结合DNA。
Analysis of co-purifiednucleicacidsrevealedthatTtAgo-associatedRNA (10–150
nucleotides) is preferentially 32 P-labelled in a polynucleotide kinase (PNK
) forward reaction, indicating the presence of 5' hydroxyl groups (Extended
Data Fig. 1c). By contrast, co-purified DNA has a more defined length (13–
25 nucleotides), and is preferentially labelled in a PNKexchangereaction,
indicatingph... 阅读全帖 |
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P****d
发帖数: 564 | 50 Thanks!
150
PNK
Extended |
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