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s******y
发帖数: 163 | 2 这些purebred breeder有行会行规的，要低了破坏市场。 |
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p****y
发帖数: 23737 | 7 ft，你联想错误了
para是笨笨的，但是你跟这种人在一起，可以100个放心
这种人不会骗你，背叛你，出卖你，会照顾你，保护你
pup没有不给我面子，我说过你不太了解他，等你和他灌水久了就知道 |
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p****y
发帖数: 23737 | 8 没用的，qxc是本版有名的一毛不拔的小气鬼，pup一毛不拔的程度比qxc高N陪，赫赫
我给你吧，可以买几件漂亮衣服穿一个月 |
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p****y
发帖数: 23737 | 9 原来你们在说“要这样对她，不是对我”这句话，
很好笑啊，当时我看了大笑（跟pup一样的反应），觉得你很幽默。
我觉得不好笑的是整件事，虽然剧情中偶尔出现很好笑的台词。
wrong |
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a**u
发帖数: 8107 | 13 ☆─────────────────────────────────────☆
augustina (augustina) 于 (Thu Mar 11 23:18:19 2010, 美东) 提到:
请愿。
补充一下我的理由：
版主，我劝他不回，如此不尊重楼主。
固然言论自由重要，但此地不同。若在别处，我不谈宗教便是；但此处如同一座本应容纳各种宗教宗派的庙宇，但忽然进来一个野人/痴人，乱满乱闹，不让别人说话，难道版主不应该封？！不封此人，版主何为?!
竟然有如此原教旨主义者也号称佛子，真是我佛耻辱。
☆─────────────────────────────────────☆
dreamfly (妄想) 于 (Thu Mar 11 23:22:38 2010, 美东) 提到:
容纳各种宗教宗派的庙宇，但忽然进来一个野人/痴人，乱满乱闹，不让别人说话，难
道版主不应该封？！不封此人，版主何为?!
世界上耻辱多了，你管得过来嘛
当初他在本版口出秽言，f-word满天飞，封了主id再上马甲，你是没见识过
得了吧，回头人家说你不尊重连id都拼错了，呵呵
☆────────... 阅读全帖 |
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a**u
发帖数: 8107 | 14 ☆─────────────────────────────────────☆
onecity (天地一大梦) 于 (Sun Aug 10 16:21:50 2008) 提到:
恐怕古往今来都没有吧？如果有就好了.
别的不说, 如果这位大牛能以科学的语言阐明一些佛学的经义, 或者在不能阐明时指出
为什么不能阐明, 对受过科学训练多年的广大学子, 一定会有很大帮助.
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vitruvian (日日改过) 于 (Mon Aug 11 01:25:57 2008) 提到:
有才叫误人呢。
本来就是不同的体系。硬要扯到一起，只能是四不象。
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zxzhren (紫霞真人) 于 (Thu Aug 14 09:11:14 2008) 提到:
用科学语言来描述佛教中许多东西，是应该的，在某些方面也是可以的。但许多方面，
目前科学还无法表达，因为现有的科学知识认识还没有到那程度，还无法观测到某些东
西，更无法来分析和解释它... 阅读全帖 |
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z*******9
发帖数: 112 | 17 Can not install Ubuntu.
The first time:
At the very last stage of the installation, it pup out a warning, saying
some file corrupted from my CD.
I download the install Image file directly from the Ubuntu web. How is
this possible?
So I tried the second time using the same CD, with a little cleaning. THis
time it basically stop in the middle of the installation. After copying
all the file from CD to my laptop, it stop there. i have to turn it off by
shut off the power.
Is it possible that it is m... 阅读全帖 |
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G******O
发帖数: 189 | 18 I use p1-3 usually. Occasionally old pups such as p20 can also be used but
you might get only several thousands cells per ml and those cells might not
grow very well. So the younger the better. |
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h****g
发帖数: 439 | 19 我们都是用hetero的。我想hetero产生的cre足以切掉loxp吧，而且hetero好mating，
pups会有一半对照。 |
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M******g
发帖数: 152 | 20 I got a wierd genotyping result:
the gene I'm working on is arrb1.
breeding pair: arrb1 hetero + CreERt2 homo,
I'm expecting some pups will be arrb1 hetero/CreERt2 hetero.
However I didn't get the above genotype.
What I got is arrb1 heter/CreERt2 homo. I don't why I can get CreERt2 homo
in this generation.
I have used different primers/PCR, and they all gave me the same result:
arrb1 hetero/CreERt2 homo.
This is most wierd genotyping I've ever met. I don't understand
Mouse expert: please ad... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 21 被reviewer郁闷到了，我们的breeding strategy，他说为啥只用公的+/-,有一篇paper
说公老鼠的diet影响后代的metabolic gene expression。
下了paper一看，他们把老鼠pups养到三周杀了，做了一堆microarray和CpG什么的。唯
一的一个蛋白质实验是在肝里测了10个lipid，有三个的变化的p小于0.05
我就郁闷了，你多养几个星期抽个血测测insulin和glucose tolerence能死么，又不是
很难做。这些红点儿绿点儿的，到底有多少真能出来phenotype?!!!
真想直接criticize这篇paper。。。还是Cell的。。。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 22 要做诱导还可以做doxycyclin诱导tTA或者rtTA啊。
比如这样一个
XXX-rtTA;tetO-Cre；XXXfl/fl
虽然是triple transgenic..但是理论讲，在没有诱导
前是没有phenotype, 完全vital的。所以一旦拿到了triple transgenic strain就可以
拿非诱导的mice来keep line以及generate new pups.效率会高很多。我现在在做的耗子就是triple transgenic.如果算上里面的R26R-LacZ reporter那其实是tetra-transgenic.
生成第一个triple transgnic strain需要大概半年时间。
做CMV-Cre全身诱导的问题一来是缺乏tissue specificity.二来那个未必在全身都会有同样的效率。我记得好像CMV-CreER在liver 和lung的效率就不好。反正实在没法了才来这个。
诱导系统目前就doxycyclin和ERT俩了。Jax lab都有。没事上JaxLab网站浏览他们的各种mouse lines很有意思的。 |
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s********r
发帖数: 312 | 23 If ES cells are male, only male chimeras are useful, vice versa. |
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y*********u
发帖数: 183 | 24 I am having the same problem: some people here said that high agouti combine
with distorted sex ratio is usually a guarantee of successful germ line
transmission
but I am waiting for it to really happen -_ |
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m******5
发帖数: 1383 | 25 Which cell line are you using ? I saw some literature mentioning that G4 or
Sv129 derived line is much more robust and with predictable behavior than C57 derived lines.
combine |
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s********r
发帖数: 312 | 26 Yes,129 is the best strain for gene targeting. |
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m******5
发帖数: 1383 | 27 -_- it is not my original question |
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m******5
发帖数: 1383 | 28 ^_^ do you have an answer of my original answer?
I am waiting for an answer in an paranoid mode |
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s******r
发帖数: 2876 | 29 对pups来说，不用spray，也可以foster。
I am sure it is not a pleasant process for the mice. You are welcome to
submit this procedure for your institutional animal procedure committee for
review and let us know if it can be officially approved. It is not my
personal invention. Although I did not see people spray ethanol and bleach
on their fur to combine male mice, I did see animal staff spray 0.04% bleach
on the young pulps to remove their smell for the fostering process (e.g.
mom eat up puppies. They ... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 30 我自己做的，在同种background下的初生一到两天的幼仔的adoption，没有任何去除气
味操作，95%以上的情况下work。我也曾经有一两次把两笼15天左右的小鼠和母鼠合到
一起，也没问题。
你说的这个protocol是多大的pups？
for
bleach
bleach
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S******9
发帖数: 2837 | 31 是beta-actin的Cre？ 1084，1085，42，43 primers， Wt=300bp， Cre=100bp
才12只pups说明不了问题。
尤其是第一次生，总是litter size很小，后面就好一些。
你这个是inducible还是non-inducible的Cre? |
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D******n
发帖数: 2836 | 32 看来楼主也是很有行动力，想法和operation的能力都有。
有人指出，楼主没想这个，没想那个，咋眼看起来很有
道理，可是我觉得很多东西都是不能100%预先想通，很
多都是遇到一个问题解决一个。
最大问题是，整如pup兄指出，bio不是IT，先不管是否
regulated，成本可相差不少，起码idea雏形的实现成本
不在一个等级上。bio的用户群比网络用户也小多了。
lz不如多了解bio startup成功的故事（如果有得话）
，而不是泛泛startup。 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 33 为了尽早启动表达，pups不大的时候就开始比较大量地涂tamoxifen。之后已经有快两
个月，母鼠一直不孕。我怀疑是母/公鼠一直舔小鼠，扰乱了她/他们的激素导致的。
板上各位有没有见过老鼠注射了tamoxifen就不孕的现象？还可能是其它什么原因。
一直等小鼠，好着急。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 34 可能是种系不一样吧
我用的是129S/B6的, 晚一点分笼就会出现妈妈鼠又怀孕的情况
虽然不是肯定出现,但是6周左右确实能出现, 同样的情况,女儿怀孕的就几乎没有出现
过,除非到了8周左右才分笼.....
另外如果要提高效率, 用4-6个月的公老鼠效率比年轻的公老鼠高不少,而且越是久经沙
场的老兵效率越高..
母老鼠的也是4个月左右的效率高一点,
第一胎总归会出现点问题,主要是吃自己的pup...... |
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l*****z
发帖数: 13617 | 35 一般6周以上的老鼠就可以交配了。
如果想早一些，可以把4周以上的老鼠放一起，一只公的加3-4只母的，几周一过，见到
肚子大的母鼠就分出来，再补进新的母鼠；或者过2-3周就都分出来，配新的进去。
另外，最快的，但是麻烦点，就是每天（最好是早晨）去查plug,一旦有，立马分出，
补进新的母鼠，循环的比较快，DOB也比较确定。
初产的母鼠是比较容易出现产崽少，弱的问题，但是我们本来就做KO或者过表达，出现
这些问题势必更多一些，母鼠感觉pup不正常就会吃掉。 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 36 多谢啦！Protocol奉上。
我们是用小鼠胚胎的软骨和骨头染色的protocol。染软骨的话只用Alcian Blue即可。
最后胚胎用BABB处理就会变得透明。BABB危险，而且会腐蚀显微镜，使用时要小心。很
多动物的胚胎都可以用类似的方法染骨头（红色）和软骨（蓝色）：鼠，龟，蛇，鸡，
鱼，蜥蜴，变色龙，蝙蝠。。。而且都很漂亮！
比如这个人，做了好多不同动物的染色还到处办展览：
http://www.shinsekai-th.com/en/photo.php
Protocol：
1. Skeletal Preparations- Cartilage and Bone staining
1.1 Cartilage staining in mouse embryos from E12.5 - E13.5
Dissect out embryos, rinse in 1 x PBS, and place in ice-cold 95% Ethanol for
1 hour.
Change to fresh 95% ETOH and rock overnight at room temper... 阅读全帖 |
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l******n
发帖数: 298 | 37 sm22a promoter which should be expressed in large vessels
I do not understand fully your second question
I do not fully understand your thir question. In the transgene, we have a
promoter+gene+polyA tail
We did microinjection and had 2 out of 20 founders. From these 2 founders, I
have got many positive pups and I took 2 of them (one from each line,
isolate RNA and test by RT. Run a gel and showed nothing....
thank s |
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o***e
发帖数: 490 | 38 不知道这些pups会不会有发育缺陷？克隆羊生出来不久就死了。 |
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b****e
发帖数: 52 | 39 age是match的,因为是TKO,用DKO mate的,而且P0就死了,所以只好用P0的B6 pups做对照
. KO应该不是纯的B6,棕色的毛.Variation大的话只能多做几组吗? |
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H****N
发帖数: 997 | 40 Just don't give up yet. Try different chimeras. I had one line that I bred
for half a year with several chimeras. I only got one pup that carried the
mutant. That line has since been used by several labs and serveral papers,
including one Nature, and one Nature Medicine, have been published. One the
other hand, I had another line which I could never get germline transmission
. I had to retarget it. |
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H****N
发帖数: 997 | 41 Just don't give up yet. Try different chimeras. I had one line that I bred
for half a year with several chimeras. I only got one pup that carried the
mutant. That line has since been used by several labs and serveral papers,
including one Nature, and one Nature Medicine, have been published. One the
other hand, I had another line which I could never get germline transmission
. I had to retarget it. |
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l********e
发帖数: 415 | 42 我也用这个ES细胞，5只chimera只有一只是公的。这只公的和wildtype生了大概200-
250只pup，只有一只germ line transmission ... |
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X*******8
发帖数: 3895 | 43 ：我找到了这篇文章，还有全文PDF下载（http://www.nature.com/nbt/journal/v25/n9/pdf/nbt0907-：981.pdf）。：可能是我水平不行，找遍了文章，也没发现您所说的Marshall“先入为主”等内容。
前面提到过一段，下面一段是I.E.回复中的引用。你还是去看看她的回复吧。我文中有
出处的。正反都听听
“In discussing my results, Chassy et al.
state “Previous reports in the literature have
shown no effects of [Roundup Ready] RR
soy on birth weights or pup mortality; they
have also not shown any effects of RR soy on
the testis or in the livers of male rats fed RR
soy”2,5,6. Later, they concluded that the likely
“explanati... 阅读全帖 |
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X*******8
发帖数: 3895 | 44 ：我找到了这篇文章，还有全文PDF下载（http://www.nature.com/nbt/journal/v25/n9/pdf/nbt0907-：981.pdf）。：可能是我水平不行，找遍了文章，也没发现您所说的Marshall“先入为主”等内容。
前面提到过一段，下面一段是I.E.回复中的引用。你还是去看看她的回复吧。我文中有
出处的。正反都听听
“In discussing my results, Chassy et al.
state “Previous reports in the literature have
shown no effects of [Roundup Ready] RR
soy on birth weights or pup mortality; they
have also not shown any effects of RR soy on
the testis or in the livers of male rats fed RR
soy”2,5,6. Later, they concluded that the likely
“explanati... 阅读全帖 |
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l**********k
发帖数: 189 | 45 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-p... 阅读全帖 |
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z********8
发帖数: 818 | 46
首先看看刚生下来（T=0）的肺能不能呼吸，不能呼吸的话一会儿就憋死了，肺扔在水
这个看肺沉降是在pup死之前吗？
难怪你的头像是mice了，看了养了很多。 |
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m*******8
发帖数: 256 | 47 各位大侠好，我去年从KOMP购买了某个基因的targeting vector，让我们的transgenic
core做了knock out小鼠，得到heterozygous小鼠后，鉴定了半年，超过200多个pups
，仍没有纯合子小鼠。该基因是睾丸特异表达的，敲除理论上是不会致死的。更奇怪的
是后代基因型比例也不对，完全不符合孟德尔遗传定律，heterozygous的后代偏多。此
外，我还从体内取了一细胞胚胎，体外发育到囊胚，做了囊胚的genotyping，也得不到
-/-，囊胚之前的胚胎发育很正常。我用了多套引物进行过genetyping，扩出来的片段
，包括野生型和杂合子片段都经过测序验证。我很困惑，请给位大侠多多给小弟提出宝
贵意见，不胜感激。
ps：附件中是我鉴定的电泳图谱，两条带说明是杂合子，只有下面的条带说明是
野生型，只有上面的条带说明是纯合子。 最后一孔为阴性对照。 |
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T****u
发帖数: 424 | 48 为什么-/- lethal不可能呢？
embrynonic lethal?
虽然是睾丸特异性表达，还有些基因在发育过程中会瞬时表达，发挥作用就silence掉
了。
你最终看到的是组织特异性表达。
还是try Loxp吧。
transgenic
pups |
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s******y
发帖数: 28562 | 49 Heterogygous 是不是正好是WT 的两倍？
如果是的话，说明你的纯化体可能是早期胚胎致死。
transgenic
pups |
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s****9
发帖数: 932 | 50 我以后绝对不会再相信KOMP。我们也买了一个老鼠ES cell，也是拿不到KO，全是hete
和WT。最后发现它给的ES cell不是单克隆，混了很多的clone，转进去的那个ES clone
位点不对。
整个过程耽误了一年多。
transgenic
pups |
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