发帖数: 1 | 1 我来说说ngAgo的局限:
1.ngAGO是否真如文章所述,不和ssRNA结合。我觉得需要通过通过高通量测序进行验证
,电泳胶的灵敏度太低,看不到不代表没有。
2.ngAgo是否和内源ssDNA或ssRNA结合,如果它的结构和TtAgo类似(包含PIWI,PDZ以
及MID domain),那么这些保守的domain也存在于与ngAgo同源的argonautes(Ago2)
中,需要利用灵敏度比较高的手段才能说明这个问题,保不齐ngAgo会对PIWI或RNAi通
路有影响,5‘p-ssDNA以及5’p-ssRNA在细胞中存在,尤其是在germ cell的分化过程
中以及很多种类的癌细胞中,如果ngAgo和它们结合的话,这将大大限制其在此类细胞
中的应用。
3. ssDNA loading 的问题,目前对于ssDNA load到Argonaute形成DNP的机制尚不清楚
,在细胞内ssDNA load到Argonaute是不是需要其他蛋白质(比如伴侣蛋白,热激蛋白
等)的辅助,甚至Argonaute折叠成functional protein是否需要ssDNA的帮助,这些都
不是很清楚。
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